全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45卷 第 17期 2014年 9月
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HPLC-ELSD法测定疲王颗粒中人参皂苷 Rg1、Re、Rb1
涂 禾 1，李 希 2，冯建安 2，冯光富 1
1. 四川省骨科医院，四川 成都 610041
2. 四川省中医药科学院中医研究所，四川 成都 610041
摘 要：目的 建立疲王颗粒中人参皂苷 Rg1、Re、Rb1 的定量测定方法。方法 采用高效液相色谱-蒸发光散射检测
（HPLC-ELSD）法，色谱柱为 Shim-pack VP-ODS（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-水，梯度洗脱：0～20 min，20%
乙腈；20～35 min，20%～30%乙腈；35～55 min，30%乙腈；55～56 min，30%～45%乙腈；体积流量 0.8 mL/min；柱温 25 ℃；
ELSD 漂移管温度 100 ℃，气体流量 3 L/min。结果 人参皂苷 Rg1、Re、Rb1的线性范围分别为 125.44～470.40 μg/mL
（r＝0.999 6）、88.96～333.60 μg/mL（r＝0.999 2）、157.12～589.20 μg/mL（r＝0.999 5），其平均加样回收率分别为 100.27%
（RSD为 1.713%，n＝9）、101.29%（RSD为 1.220%，n＝9）、101.00%（RSD为 1.668%，n＝9）。结论 该方法测定简便、快
速、重复性好，可作为疲王颗粒的质量控制方法。
关键词：疲王颗粒；高效液相色谱-蒸发光散射检测法；人参皂苷 Rg1；人参皂苷 Re；人参皂苷 Rb1
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)17 - 2487 - 03
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.17.012
Determination of ginsenoside Rg1, Re, Rb1 in Piwang Granules by HPLC-ELSD
TU He1, LI Xi2, FENG Jian-an2, FENG Guang-fu1
1. Sichuan Orthopedic Hospital, Chengdu 610041, China
2. Institute of Traditional Chinese Medicines, Sichuan Academy of Traditional Chinese Medicine Sciences, Chengdu 610041, China
Abstract: Objective To establish a method for the content determination of ginsenoside Rg1, Re, and Rb1 in Piwang Granules.
Methods HPLC-ELSD was used. The analysis was carried on Shim-pack VP-ODS (150 mm × 4.6 mm, 5 μm) column with mobile
phase consisted of acetoneitrile-water, and the gradient elution ( 0—20 min, acetoneitrile 20%, 20－35 min, acetoneitrile 20%→30%,
35－55 min, acetoneitrile 30%, 55－56 min, acetoneitrile 30%→45%) was used. The flow rate was 0.8 mL/min. The column
temperature was 25 ℃. The drift tube temperature was 100 ℃. The flow rate of gas was 3 L/min. Results The responses of
ginsenoside Rg1, Re, and Rb1 were liner in the ranges of 125.44－470.40 (r =0.999 6), 88.96－333.60 (r =0.999 2), and 157.12－589.20
μg/mL (r =0.999 5), respectively. The average recoveries were 100.27% (RSD = 1.713%, n = 9), 101.29% (RSD = 1.220%, n = 9), and
101.00% (RSD = 1.668%, n = 9). Conclusion The method is simple, rapid, and with good repeatability. It can be used for the quality
control of Piwang Granules.
Key words: Piwang Granules; HPLC-ELSD; ginsenoside Rg1; ginsenoside Re; ginsenoside Rb1
疲王颗粒具有健脾益气、生血的功效，主要由
人参、黄芪、葛根、延胡索、白芍、川芎、川牛膝
等 11味中药组成，用于运动员连续大运动量训练后
引起的气、血虚的运动性疲劳症。人参为方中君药，
在质量标准研究中需对人参中指标成分人参皂苷
Rg1、Re、Rb1进行定量测定。由于人参定量测定通
常用的高效液相色谱-紫外检测（HPLC-UV）法[1-3]，
样品中黄芪和人参同时存在时会相互干扰，故本实
验选择高效液相色谱 -蒸发光散射检测（HPLC-
ELSD）法测定疲王颗粒中的 3种人参皂苷的量。
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪，美国安捷伦公司；
BP211D电子天平，德国赛多利斯集团；ELSD—500
蒸发光散射检测器，美国奥泰公司；CQ—250超声
收稿日期：2014-04-17
基金项目：国家“十五”科技攻关项目（奥运专项 中药消除运动性疲劳的应用研究 2002BA904B03）
作者简介：涂 禾（1965—），男，副主任中药师，研究方向为中药制剂、医院药事管理和临床药学。
Tel/Fax: (028)87050716 E-mail: 297983480@qq.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45卷 第 17期 2014年 9月
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波清洗器，中国船舶重工集团公司七院第七二六研
究所。
人参皂苷 Rg1、Re、Rb1对照品（供定量测定用，
由中国食品药品检定研究院提供，人参皂苷 Rg1批
号为 110703-201027，HPLC测定质量分数≥98%；
人参皂苷 Re批号为 110754-201123，HPLC测定质
量分数≥98%；人参皂苷Rb1批号为110704-200921，
HPLC测定质量分数≥98%）；乙腈为色谱纯、水为
超纯水（自制），其他试剂均为分析纯。
疲王颗粒样品（四川省骨科医院自制），批号分
别为 110201、110401、110402、110403、120301、
120302、120303。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Shim-pack VP-ODS柱（150 mm×
4.6 mm，5 μm）；保护柱为 Agilent ZORBAX
SB-C18柱（12.5 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-
水为流动相，梯度洗脱：0～20 min，20%乙腈；
20～35 min，20%～30%乙腈；35～55 min，30%
乙腈；55～56 min，30%～45%乙腈；体积流量
0.8 mL/min；柱温 25 ℃；ELSD 漂移管温度
100 ℃，气体流量 3 L/min。
2.2 溶液制备
2.2.1 供试品溶液 取本品约 4.5 g，精密称定，
加入甲醇 100 mL，超声处理 45 min，滤过，用甲
醇 50 mL分次洗涤滤纸和容器，合并滤液与洗液，
蒸干，残渣加水 20 mL 使溶解，用水饱和的正丁
醇强烈振摇提取 4 次（30、30、30、20 mL），合
并正丁醇提取液，用 40%氨水洗涤 3 次，每次 30
mL，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至
10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心，取上
清液，即得[4-8]。
2.2.2 阴性对照溶液 按本品制法，去处方中人参，
制成缺人参的阴性样品，按“供试品溶液”项下方
法制成阴性对照溶液。
2.2.3 对照品溶液 精密称取人参皂苷 Rg1对照品
7.84 mg、人参皂苷 Re对照品 5.56 mg、人参皂苷
Rb1对照品 9.82 mg于 10 mL量瓶中，加甲醇溶解
并加甲醇至刻度，即得含人参皂苷 Rg1 0.784
mg/mL、人参皂苷 Re 0.556 mg/mL、人参皂苷 Rb1
0.982 mg/mL的混合对照品溶液。
2.3 专属性试验
分别取混合对照品、供试品及阴性对照溶液，
注入高效液相色谱仪，按照“2.1”项色谱条件，在
同一条件下测定，结果见图 1。阴性对照在人参皂
苷岀峰区间未出现相应色谱峰，表明该测定方法具
有较好的专属性，测定无干扰。
1-人参皂苷 Rg1 2-人参皂苷 Re 3-人参皂苷 Rb1
1-ginsenoside Rg1 2-ginsenoside Re 3-ginsenoside Rb1
图 1 混合对照品 (A)、供试品 (B) 和阴性对照 (C) 的
HPLC图谱
Fig. 1 HPLC of mixed reference substances (A),
sample (B), and negative control (C)
2.4 线性关系考察
分别精密吸取“2.2.3”项下的对照品溶液 0.8、
1.2、1.6、2.0、3.0 mL于 5 mL量瓶中，加甲醇稀
释至刻度，摇匀，各精密吸取 10 μL注入液相色谱
仪，按照“2.1”项色谱条件，测定峰面积，以进
样浓度的常用对数为横坐标（X），峰面积的常用
对数为纵坐标（Y）进行线性回归处理，得到人参
皂苷 Rg1、Re、Rb1的回归方程分别为 Y＝1.722 5
X＋5.082 8，r＝0.999 6；Y＝1.551 2 X＋5.131 2，r＝
0.999 2；Y＝1.963 5 X＋4.953 3，r＝0.999 5。结果
表明，人参皂苷 Rg1、Re、Rb1的进样浓度分别在
125.44～470.40 μg/mL、88.96～333.60 μg/mL、
157.12～589.20 μg/mL对数值与峰面积的对数值呈
良好的线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液 10 μL，连续重复进
样 6次，测定峰面积。结果人参皂苷 Rg1、Re、Rb1
的峰面积的 RSD 值分别为 1.608%、1.882%、
1.135%。
A
B
C
1 2 3
1
2 3
0 10 20 30 40 50 60
t / min
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精密吸取供试品溶液 10 μL，连续重复进样 6
次，测定峰面积。结果人参皂苷 Rg1、Re、Rb1 的
峰面积的 RSD值分别为 1.506%、1.218%、1.762%。
2.6 稳定性考察
精密吸取同一供试品（批号 110201）溶液，分
别在 0、4、8、16、24、48 h，测定人参皂苷峰面积，
结果人参皂苷 Rg1、Re、Rb1的峰面积的 RSD值分
别为 1.595%、1.696%、1.756%。结果表明在 48 h
内供试品溶液中人参皂苷的量基本稳定。
2.7 重复性考察
取同一批号供试品（批号 110201）6份，分别
按“2.2.1”项供试品溶液制备方法平行制备 6个供
试品溶液，在上述色谱条件下分别进样测定。结果
人参皂苷 Rg1、Re、Rb1 质量分数平均值分别为
0.708 3、0.507 9、0.927 9 mg/g，RSD 值分别为
1.171%、1.628%、1.765%，表明测定方法有较好的
重复性。
2.8 回收率试验
精密称取已测定的供试品（批号 110201，人参
皂苷 Rg1 0.708 3 mg/g、人参皂苷 Re 0.507 88 mg/g、
人参皂苷 Rb1 0.927 94 mg/g）约 2.5 g，加入人参皂
苷对照品适量，分别按“2.2.1”项下平行制备 9个
供试品溶液，在上述色谱条件下分别进样测定。结
果平均回收率人参皂苷 Rg1 为 100.27%，RSD 为
1.713%；人参皂苷 Re为 101.29%，RSD为 1.220%；
人参皂苷 Rb1为 101.00%，RSD为 1.668%。结果表
明，用本法测定供试品中人参皂苷 Rg1、Re、Rb1
的量，回收率良好。
2.9 样品测定
取 6批中试产品（批号 110401、110402、110403、
120301、120302、120303），按上述定量测定方法测
定，结果见表 1。
3 讨论
因疲王颗粒剂组方复杂，若选择 HPLC-UV法，
人参皂苷测定要用较低的紫外检测波长（203 nm）
检测，因是紫外末端吸收，黄芪中的黄芪甲苷及杂
质会产生干扰。ELSD 检测器对不挥发性的物质进
行检测，不存在紫外末端吸收问题，且对流动相的
变化不敏感。本法能够进行人参中的 3种皂苷的定
量测定。
表 1 样品中人参皂苷定量测定结果 (n = 2)
Table 1 Determination of ginsenoside content
in samples (n = 2)
批号
质量分数 / (mg·g−1)
人参皂苷 Rg1 人参皂苷 Re 人参皂苷 Rb1
110401 0.718 0 0.541 4 0.934 2
110402 0.715 5 0.560 1 0.917 2
110403 0.682 5 0.533 9 0.897 4
120301 0.700 8 0.519 6 0.929 2
120302 0.690 8 0.506 8 0.926 4
120303 0.717 5 0.531 9 0.936 2
由于组方的复杂性对样品提取方法（超声提取
和索氏提取）比较，2 种方法的结果差异不大，故
选择了操作简便的超声提取法；在超声时间（30、
45、60 min）的选择中，选择了 45 min；同时还对
水饱和正丁醇次数（3、4次）进行考察，振摇提取
3 次与 4 次的结果差异不大，为了确保提取完全，
故选用提取 4次。
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