全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 11 期 2012 年 11 月

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HPLC 法同时测定养血注射液中阿魏酸和盐酸川芎嗪
李孝栋，侯 超
福建中医药大学药学院，福建 福州 350108
摘 要：目的 建立同时测定养血注射液中阿魏酸和盐酸川芎嗪的 HPLC 分析方法。方法 色谱柱为 Diamonsil C18柱（200
mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.5%醋酸水溶液（35∶65），检测波长 295 nm，进样量 20 μL，体积流量 1.0 mL/min，
柱温 30 ℃。结果 阿魏酸线性范围 40～200 μg/mL，r＝0.999 9，平均回收率为 97.59%，RSD 为 0.74%；盐酸川芎嗪线性
范围 13.8～69.0 μg/mL，r＝0.999 9，平均回收率为 99.36%，RSD 为 0.71%。结论 该法灵敏、准确，重复性好，可用于同
时测定养血注射液中阿魏酸和盐酸川芎嗪的量。
关键词：养血注射液；阿魏酸；盐酸川芎嗪；HPLC；质量控制
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)11 - 2203 - 03
Simultaneous determination of ferulic acid and ligustrazine hydrochloride
in Yangxue Injection by HPLC
LI Xiao-dong, HOU Chao
College of Pharmacy, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350108, China
Key words: Yangxue Injection; ferulic acid; ligustrazine hydrochloride; HPLC; quality control

养血注射液由传统四物方[1]中提取的有效成分
阿魏酸、盐酸川芎嗪等组成，具有补血、养血、活
血的功效，通过降低血液黏度，对中老年人群中发
病率较高的心脑血管疾病具有良好的预防和治疗作
用，文献报道阿魏酸、盐酸川芎嗪作为四物方中的
活性成分，具有增加血流量、改善微循环[2]、抗血
栓[3]、调血脂和防治心脑血管疾病[4-5]等作用。
在质量控制方面，单独测定阿魏酸或盐酸川芎
嗪的方法较多[6-8]，但同时测定阿魏酸和盐酸川芎嗪
的文献报道较少[9]。因此本实验采用 HPLC 法同时
测定阿魏酸、盐酸川芎嗪的量，将为养血注射液和
相关制剂的质量控制提供依据。
1 仪器与试药
FA2004N 电子天平（上海精密科学仪器有限公
司）；LC—10A 高效液相色谱仪（日本岛津公司）；
KQ—500E 型超声波清洗器（昆山超声仪器公司）。
阿魏酸（批号 110773-201012）、盐酸川芎嗪（批
号 110817-201006）对照品，中国药品生物制品检
定所；养血注射液由福建中医药大学药学院药剂科
研实验室自制（批号分别为 20120310、20120311、
20120312）。甲醇（山东禹王实业有限公司，色谱纯）；
超纯水（实验室自制）；醋酸（上海久亿化学试剂有
限公司，分析纯）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Diamonsil C18 柱（200 mm×4.6 mm，
5 μm）；流动相为甲醇-0.5%醋酸水溶液（35∶65）；
检测波长 295 nm；进样量 20 μL；体积流量 1.0
mL/min；柱温 30 ℃。在此色谱条件下，样品中阿
魏酸、盐酸川芎嗪达到基线分离，阴性对照液中色
谱峰对测定无干扰。结果见图 1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取阿魏酸对照品 20.0 mg，置于 50 mL
量瓶中，甲醇定容，摇匀，即得阿魏酸对照品母液
（质量浓度为 400 μg/mL）；精密称取盐酸川芎嗪对
照品 6.9 mg，置于 50 mL 量瓶中，甲醇定容，摇匀，
即得盐酸川芎嗪对照品母液（质量浓度 138 μg/mL）；
再分别精密吸取上述阿魏酸对照品母液和盐酸川芎

收稿日期：2012-05-22
基金项目：福建省科技平台建设项目（2010Y2004）
作者简介：李孝栋（1969—），男，福建古田人，副教授，主要从事中药物质基础、中药制剂与质量控制的研究。E-mail: lxdtcm@163.com
网络出版时间：2012-10-19 网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/12.1108.R.20121019.1035.006.html
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 11 期 2012 年 11 月

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1-盐酸川芎嗪 2-阿魏酸
1-ligustrazine hydrochloride 2-ferulic acid

图 1 混合对照品 (A)、养血注射液 (B)、缺阿魏酸阴性样品 (C) 和缺盐酸川芎嗪阴性样品 (D) 的 HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of mixed reference substances (A), Yangxue Injection (B), negative sample
without ferulic acid (C), and negative sample without ligustrazine hydrochloride (D)

嗪对照品母液各 25 mL，混合均匀，即得含阿魏酸
200 μg/mL、盐酸川芎嗪 69 μg/mL 的混合对照品母液。
2.3 供试品溶液的制备
取养血注射液适量，甲醇稀释 10 倍，0.45 μm
微孔滤膜滤过，即得。
2.4 阴性供试品溶液的制备
按养血注射液的生产工艺制备缺盐酸川芎嗪、
阿魏酸的阴性样品，并按照供试品溶液的制备方法
制备各阴性供试品溶液。
2.5 线性关系考察
精密吸取“2.2”项下混合对照品母液 2.0、3.0、
4.0、5.0、10.0 mL，分别置于 10 mL 量瓶中，甲醇
定容，摇匀，各取 20 μL 进样，测定峰面积积分值，
以质量浓度为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标
（Y）进行线性回归，得回归方程：阿魏酸 Y＝151 966
X－457 626，r＝0.999 9，线性范围 40～200 μg/mL；
盐酸川芎嗪 Y＝35 706 X＋66 913，r＝0.999 9，线
性范围 13.8～69.0 μg/mL。
2.6 精密度试验
精密吸取“2.2”项下混合对照品母液 4 mL 置
于 10 mL 量瓶中，甲醇定容，摇匀，平行进样 5 次，
测定各成分的峰面积，结果阿魏酸峰面积的 RSD 为
0.27%；盐酸川芎嗪峰面积的 RSD 为 0.38%，表明
仪器精密度良好。
2.7 重复性试验
同一批次内取 5 份样品，按照“2.3”项下方法
制备供试品溶液，测定质量浓度，结果阿魏酸平均
值为 66.87 μg/mL，RSD 为 0.23%；盐酸川芎嗪平均
值为 47.27 μg/mL，RSD 为 0.39%，表明方法重复性
良好。
2.8 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别于 0、2、4、6、8 h
进样，测定峰面积，结果阿魏酸峰面积的 RSD 为
0.71%；盐酸川芎嗪峰面积的 RSD 为 0.52%，表明
供试品溶液在 8 h 内稳定。
2.9 加样回收率试验
精密量取同一批样品 6 份，每份 1.0 mL，每份
精密加入 100 μg/mL 阿魏酸对照品溶液 0.7 mL、69
μg/mL 盐酸川芎嗪对照品溶液 0.3 mL，进样测定，
计算回收率，结果阿魏酸平均回收率为 97.59%，
RSD 为 0.74%；盐酸川芎嗪平均回收率为 99.36%，
RSD 为 0.71%。
2.10 样品测定
取 3 批样品，按照“2.3”项下方法制备供试品
溶液，测定，结果 3 批样品中阿魏酸的质量浓度分
别为 66.75、66.19、66.58 μg/mL；盐酸川芎嗪的质
量浓度分别为 47.36、47.81、47.53 μg/mL。
3 讨论
文献报道[10-11]阿魏酸或盐酸川芎嗪定量检测的
流动相多为乙腈-水或甲醇-乙腈-水，本实验为了更
好地分离阿魏酸与盐酸川芎嗪的色谱峰，对流动相
不同比例进行了考察，结果以甲醇-0.5%醋酸水溶液
（35∶65）为流动相时，阿魏酸在 17.2 min 出峰、
盐酸川芎嗪在 14.3 min 出峰，峰形及相邻峰分离良
好。另外，紫外扫描时，阿魏酸的最大波长为 316
nm，盐酸川芎嗪最大波长为 295 nm，本实验通过
比较最终选择 295 nm 作为同时测定养血注射液中
阿魏酸和盐酸川芎嗪的波长。
参考文献
[1] 中国药典 [S]. 一部. 2010.
1
2
1 1
0 10 20 30 0 10 20 30 0 10 20 30 0 10 20 30
t / min
A
2
2
B C D
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 11 期 2012 年 11 月

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