全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 6 期 2011 年 6 月

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HPLC 法测定银黄滴丸中绿原酸和黄芩苷
郑敏霞 1，诸葛周 2，戴德雄 2，朱 莹 2
1. 浙江省中医院，浙江 杭州 310006
2. 浙江维康药业有限公司，浙江 丽水 323000
摘要：目的 采用 HPLC 法建立银黄滴丸的质量标准。方法 绿原酸色谱条件：色谱柱为 ZorBax SB-C18（150 mm×4.6 mm，
5 μm），流动相为乙腈-0.4%磷酸（10∶90），体积流量 1 mL/min，柱温 35 ℃，检测波长 327 nm；黄芩苷色谱条件：色谱柱
为 Kromatek C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2），体积流量 1 mL/min，柱温 35 ℃，
检测波长 280 nm。结果 绿原酸线性范围为 0.143～2.288 μg，平均加样回收率为 99.3%，RSD 为 1.54%；黄芩苷线性范围
为 0.067 5～1.080 μg，平均加样回收率为 99.9%，RSD 为 1.07%。结论 该方法简便、灵敏、专属性强、重复性好，可作为
银黄滴丸的质量控制方法。
关键词：银黄滴丸；绿原酸；黄芩苷；HPLC；质量控制
中图分类号：R286.02 文献标志码：B 文章编号：0253 - 2670(2011)06 - 1138 - 03
Determination of chlorogenic acid and baicalin in Yinhuang Pills by HPLC
ZHENG Min-xia1, ZHUGE Zhou2, DAI De-xiong2, ZHU Ying2
1. Zhejiang Province Hospital of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou 310006, China
2. Zhejiang Welcome Pharmaceutical Co., Ltd., Lishui 323000, China
Key words: Yinhuang Pills; chlorogenic acid; baicalin; HPLC; quality control

银黄滴丸由金银花提取物和黄芩提取物组成，
具有清热，解毒，消炎的作用。可用于上呼吸道感
染、急慢性咽炎等症的治疗，临床效果显著。其中
金银花的主要成分和特征成分是绿原酸，黄芩的主
要成分和特征成分是黄芩苷。为了有效地控制该产
品的质量，参照文献方法[1]，针对银黄滴丸中主要
有效成分绿原酸和黄芩苷，建立 HPLC 法进行定量
测定。实验结果表明该方法简便、准确、重复性好，
可作为银黄滴丸质量控制的方法。
1 仪器与材料
Agilent 1100 高效液相色谱仪（美国 Agilent 公
司），浙江大学 N2000 色谱工作站；BP211D 电子天
平（德国 Sartorius 公司）；JL—180DTH 超声波清洗
器（南京科捷分析仪器有限公司）。银黄滴丸（批号
20080901、20080903、20080905）由浙江维康药业
有限公司提供。绿原酸（批号 715-200010）、黄芩
苷（10715- 200212）中国药品生物制品检定所提供。
乙腈、甲醇为色谱纯，水为双蒸水（自制），其余试
剂均为分析纯。
2 方法和结果
2.1 绿原酸的测定[2-4]
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品
适量，置棕色量瓶中，加 50%甲醇制成 50 μg/mL
的对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备 取银黄滴丸内容物，适
当研细，取 0.3 g，精密称定，置 50 mL 量瓶中，加
50%甲醇约 40 mL，超声处理（功率 150 W，频率
50 kHz）20 min，放冷，用 50%甲醇稀释至刻度，
摇匀，用 0.45 μm 微孔滤膜滤过，即得。
2.1.3 阴性对照液的制备 按处方制备缺金银花的
阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备缺金银花
阴性对照液。
2.1.4 色谱条件的选择 取绿原酸对照品溶液进行
紫外（波长 200～400 nm）扫描，结果绿原酸色谱
峰在 327 nm 波长处有最大吸收，故选择 327 nm 作
为检测波长。

收稿日期：2010-09-26
作者简介：郑敏霞（1963—），女，浙江中医药大学附属第一医院中药房副主任。Tel: (0571)87073482 E-mail: zmxyxx@126.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 6 期 2011 年 6 月

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2.1.5 色谱条件 [5] 色谱柱为 ZorBax SB-C18 柱
（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.4%磷
酸（10∶90），体积流量 1.0 mL/min，柱温 35 ℃，
检测波长 327 nm，进样量 10 μL。理论板数按绿原
酸峰计算不低于 3 000。
2.1.6 方法专属性考察 按上述色谱条件分别进样
对照品溶液、供试品溶液和缺金银花阴性对照液进
行分析，结果阴性对照无干扰。色谱图见图 1。




*-绿原酸
*-chlorogenic acid

图 1 对照品（A）、银黄滴丸（B）和缺金银花阴性
对照（C）的 HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of reference substance (A),
Yinhuang Pills (B), and negative sample without
Lonicerae Japonicae Flos (C)

2.1.7 线性关系考察 精密称取绿原酸对照品适
量，加 50%甲醇制成不同质量浓度的系列对照品溶
液，摇匀，分别精密进样 0.143、0.286、0.572、1.144、
1.716、2.288 µg，以峰面积为纵坐标，进样量为横
坐标进行线性回归，得回归方程 Y＝2.253 8×104＋
2×106 X，r＝0.999 8，表明绿原酸在 0.143～2.288 μg
与峰面积呈良好线性关系。
2.1.8 精密度试验 精密吸取57.2 μg/mL对照品溶
液 10 μL，依法测定，连续 5 次，记录色谱峰，计
算得绿原酸峰面积的 RSD 为 0.07%。
2.1.9 稳定性试验 取批号 030101 的供试品溶液，
分别于放置 0、2、4、6、8、16 h 后进样测定，记
录峰面积，计算得绿原酸峰面积的 RSD 为 0.47%，
表明供试品溶液在 16 h 内稳定。
2.1.10 重现性试验 取批号 030101 样品 0.3 g，精
密称定，制备供试品溶液，平行 5 份，分别进样测
定，计算得绿原酸质量分数的 RSD 为 0.59%。
2.1.11 加样回收率试验 取批号030101样品9份，
每份 0.15 g，精密称定，平分 3 组，分别精密加入
绿原酸对照品 1.048、1.310、1.572 mg，制备供试
品溶液，进样测定，计算得绿原酸的平均回收率为
99.3%，RSD 为 1.54%。
2.1.12 样品测定 取 3 批样品，制备供试品溶液，
进样测定，结果见表 1。
2.2 黄芩苷的测定[6-9]
2.2.1 对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，
用甲醇溶解制成 20 μg/mL 的对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取银黄滴丸内容物，适
当研细，取 0.3 g，精密称定，置 100 mL 量瓶中，
加 50%乙醇约 80 mL，超声处理（功率 150 W，频
率 50 kHz）20 min，放冷，用 50%乙醇稀释至刻度，
摇匀，精密量取 5 mL，置 50 mL 量瓶中，用甲醇
稀释至刻度，摇匀，0.45 μm 微孔滤膜滤过，即得。
2.2.3 色谱条件的选择 取黄芩苷对照品溶液进行
紫外（波长 200～400 nm）扫描，结果黄芩苷峰在
280 nm 波长处有最大吸收，故选择 280 nm 作为检
测波长。
2.2.4 阴性对照液的制备 按处方制备缺黄芩的阴
性样品，按供试品溶液的制备方法制备缺黄芩阴性
对照液。
2.2.5 色谱条件 色谱柱为 Kromatek C18 柱（150
mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-水-磷酸
（47 53 0.2∶ ∶ ），体积流量 1.0 mL/min，柱温 35 ℃，
检测波长 280 nm，进样量 10 μL。
2.2.6 方法专属性考察 按上述色谱条件分别进样
对照品溶液、供试品溶液和缺黄芩阴性对照液进行
分析，结果阴性对照无干扰。色谱图见图 2。




*-黄芩苷
*-baicalin

图 2 对照品（A）、银黄滴丸（B）和缺黄芩阴性
对照（C）的 HPLC 色谱图
Fig. 2 HPLC chromatograms of reference substance (A),
Yinhuang Pills (B), and negative sample
without Scutellariae Radix (C)

2.2.7 线性关系考察 精密称取黄芩苷对照品适
量，加甲醇制成不同质量浓度的系列对照品溶液，
摇匀，分别精密进样 0.067 5、0.135、0.202 5、0.270、
0.540、1.080 µg，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐
标进行线性回归，得回归方程 Y＝151.7＋2×106 X，
* *
0 10 20 30 0 10 20 30 0 10 20 30
t / min
A B C
*
*
0 5 10 15 20 0 5 10 15 20 0 5 10 15 20
t / min
A B C
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 6 期 2011 年 6 月

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r＝0.999 9，表明黄芩苷在 0.067 5～1.080 μg 与峰面
积呈良好线性关系。
2.2.8 精密度试验 精密吸取 0.027 mg/mL 对照品
溶液 10 μL，重复进样 5 次，记录峰面积，计算得
黄芩苷峰面积的 RSD 为 1.05%。
2.2.9 稳定性试验 取批号 030101 的供试品溶液，
分别于放置 0、2、4、6、8、16 h 后进样测定，计
算得黄芩苷峰面积的 RSD 为 1.14%，表明供试品溶
液在 16 h 内稳定。
2.2.10 重现性试验 取批号 021201 样品 0.3 g，精
密称定，制备供试品溶液，平行 5 份，分别进样测
定，计算得黄芩苷质量分数的 RSD 为 0.37%。
2.2.11 加样回收率试验 取批号030101样品9份，
每份 0.15 g，精密称定，平分 3 组，分别精密加入
黄芩苷对照品 9.10、11.40、13.50 mg，制备供试品
溶液，进样测定，计算得绿原酸的平均回收率为
99.9%，RSD 为 1.07%。
2.2.12 样品测定 取 3 批样品，制备供试品溶液，
进样测定，结果见表 1。

表 1 银黄滴丸中绿原酸和黄芩苷的测定（n＝3）
Table 1 Determination of chlorogenic acid and baicalin
in Yinhuang Pills (n = 3)
批 号 绿原酸/(mg·g−1) 黄芩苷/(mg·g−1)
20080901 4.54 36.50
20080903 4.16 33.96
20080905 4.44 34.57

3 讨论
曾以甲醇-水-磷酸（60 40 0.2∶ ∶ ）、甲醇-水-磷
酸（47 53 0.2∶ ∶ ）为流动相测定黄芩苷，结果均能
达到满意的分离效果，黄芩苷峰达到基线分离，峰
形对称；前者黄芩苷峰略有拖尾，因此选用甲醇-
水-磷酸（47 53 0.2∶ ∶ ）为流动相。
曾分别以乙腈-0.4%磷酸溶液（11 89∶ 、10 90∶ ）
为流动相测定绿原酸，结果均能达到满意的分离效
果，绿原酸峰达到基线分离，峰形对称；前者绿原
酸峰略有拖尾，因此选用乙腈 -0.4%磷酸溶液
（10 90∶ ）为流动相。
对绿原酸的提取方法进行了考察，分别比较了
超声处理与加热回流两种提取方法，结果发现这两
种方法的提取结果中绿原酸的含量几乎无差异。由
于超声处理简便、快捷，耗时短，因此选用超声处
理作为提取方法，并对提取时间 10、20、30 min 进
行了考察，结果发现超声处理 20 min 后绿原酸提取
率几乎无变化，因此选择提取时间为 20 min。
对黄芩苷的提取方法进行了考察，分别比较了
超声处理与加热回流两种提取方法，结果发现这两
种方法的提取结果中黄芩苷的含量几无差异。由于
超声处理简便、快捷，耗时短，因此选用超声处理
作为提取方法，并对提取时间进行了考察，分别超
声处理 10、20、30 min，结果发现超声处理 20 min
后黄芩苷提取率几乎无变化，因此选择提取时间为
20 min。
参考文献
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[2] 褚文静, 张 雪, 王 伟, 等. HPLC 法测定抗感胶囊
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