全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 8 期 2011 年 8 月
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木芙蓉提取物中金丝桃苷的 HPLC 法测定
郑 林，刘 毅*，高 洁，危 莉
贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002
摘 要：目的 建立 HPLC 法测定木芙蓉提取物中金丝桃苷的方法，为木芙蓉提取物的开发利用提供科学依据。方法 色
谱柱为 Diamonsil TM柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.3%磷酸溶液（18∶82），体积流量 1.0 mL/min，柱温
30 ℃，检测波长 360 nm。结果 金丝桃苷与其他成分分离良好，在 29.2～292.0 ng 线性关系良好，r＝0.999 9，平均回收率
为 98.7%，RSD 为 2.03%。结论 所建立的定量方法简便、准确、专属性好、灵敏度高。
关键词：木芙蓉提取物；金丝桃苷；HPLC；黄酮类；锦葵科
中图分类号：R286.02 文献标志码：B 文章编号：0253 -2670(2011)08 - 1541 - 02
Determination of hyperoside in extract of Hibiscus mutabilis by HPLC
ZHENG Lin, LIU Yi, GAO Jie, WEI Li
Guiyang College of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550002, China
Key words: extract of Hibiscus mutabilis L.; hyperoside; HPLC; flavones; Malvaceae
木芙蓉来源于锦葵科植物木芙蓉 Hibiscus
mutabilis L.的新鲜或干燥叶，夏、秋两季采收，鲜
用或晒干，为贵州省少数民族用药[1]。其性味辛、
微苦，凉，归肾、肝经，具有清热凉血、解毒消肿、
排脓的功效[1-2]。木芙蓉中化学成分较多，主要含有
黄酮类化合物、植物甾醇类、酚类、氨基酸、鞣质、
还原糖等物质，以黄酮类物质为其主要的功效成分，
其中包括黄酮醇苷类化合物金丝桃苷[3]。金丝桃苷
分布广泛，具有抗炎、解痉、利尿、止咳、降压、
降低胆固醇、蛋白同化、局部和中枢镇痛以及对心、
脑血管的保护作用等多种生理活性，是一种重要的
天然产物[4-6]。本实验采用 HPLC法对木芙蓉提取物
中的金丝桃苷进行定量研究，为其进一步开发利用
提供科学依据。
1 仪器与材料
Waters 2487 Dual λ Absorbance Detector，威玛
龙 515型色谱工作站（贵州安科公司），UV—2501PC
紫外分光光度计（日本岛津），DT—2000 型电子
天平（美国双杰），AUY200电子天平（日本岛津），
BT124S电子天平（Sartorius公司）。金丝桃苷对照
品（批号 111521-200303）由中国药品生物制品检
定所提供。乙腈、甲醇为色谱纯，水为娃哈哈饮用
纯净水，乙醇、甲酸、冰醋酸、醋酸乙酯、磷酸均
为分析纯。
木芙蓉购于贵阳市花果园药材市场（产地贵
阳），经贵阳中医学院王悦云副教授鉴定为锦葵科植
物木芙蓉 Hibiscus mutabilis L.的干燥叶。
木芙蓉提取物为贵阳中医学院药剂实验室自制
（批号 091108、091109、091110）。取粉碎成粗粉的
木芙蓉叶 150 g 置圆底烧瓶内，用 70%乙醇回流提
取 3 次（1 800 mL 3 h、1 500 mL 2 h、1 200 mL 1.5
h）；合并 3 次滤液，置 60 ℃水浴旋转蒸发至无醇
味；剩余药液置蒸发皿中于水浴上挥干得稠膏，再
将稠膏置真空干燥箱中，在−0.08 MPa 70 ℃条件下
干燥 24 h，取出，称定质量，得 1 g提取物相当于
生药 3.88 g的干膏。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Diamonsil TM柱（250 mm×4.6 mm，
5 μm），流动相为乙腈-0.3%磷酸水溶液（18∶82），
体积流量 1.0 mL/min，检测波长 360 nm，柱温 30 ℃。
理论板数按金丝桃苷峰计算大于 3 000。在此色谱条
收稿日期：2010-11-18
作者简介：郑 林（1964—），男，贵阳中医学院药学系副教授，研究方向为中药资源的综合开发与利用。
Tel: (0851)3606797 13809414837 E-mail: zhenglin_zy@yahoo.com.cn
*通讯作者 刘 毅 Tel: 13984016122 E-mail: liuyi6604@126.com
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件下，HPLC法专属性考察结果见图 1。
*金丝桃苷
*hyperoside
图 1 对照品（A）和木芙蓉提取物（B）的 HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of reference substance (A)
and extract of H. mutabilis (B)
2.2 对照品溶液的制备
精密称定金丝桃苷对照品适量，置 25 mL量瓶
中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，制成含金丝桃苷
58.4 μg/mL的对照品储备液，备用。测定时用流动
相稀释成 14.6 μg/mL的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取木芙蓉提取物 1 g（相当于生药 3.88 g），精
密称定，置 50 mL量瓶中，加甲醇适量，超声 30 min
（功率 250 W，频率 39 kHz）使溶解，加甲醇至刻
度，摇匀，用 0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，
即得。
2.4 线性关系考察
取对照品储备液适量，配制 29.2、23.36、17.52、
11.68、5.84、2.92 μg/mL系列对照品溶液，各取 10
μL，进样测定，记录色谱图，以进样量为横坐标，
峰面积积分值为纵坐标进行线性回归，得回归方程
Y＝2×106 X－4 766.8，r＝0.999 9，表明金丝桃苷
在 29.2～292.0 ng线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取 14.6 μg/mL 金丝桃苷对照品溶液 20
µL，重复进样 5次，测定峰面积，计算得金丝桃苷
峰面积的 RSD为 1.43%。
2.6 稳定性试验
取批号 091108 的木芙蓉提取物样品制备供试
品溶液，分别于 0、2、4、6、8、12 h进样测定，
记录峰面积，计算得金丝桃苷峰面积的 RSD 为
2.70%，表明供试品溶液在 12 h内稳定。
2.7 重现性试验
取批号 091108的木芙蓉提取物样品，平行制备
5份供试品溶液，分别精密吸取 20 μL进样分析，
记录峰面积，计算得金丝桃苷质量分数的 RSD 为
1.58%。
2.8 加样回收率试验
取批号 091108的木芙蓉提取物样品 6份，每份
0.5 g，精密称定，分别置 50 mL量瓶中，分别精密
加入金丝桃苷对照品溶液适量（相当于提取物中
100%金丝桃苷的量），制备供试品溶液，进样测定，
计算金丝桃苷的回收率。结果金丝桃苷的平均回收
率为 98.7%，RSD为 2.03%。
2.9 样品测定
取 3批（批号 091108、091109、091110）木芙
蓉提取物样品，分别制备供试品溶液，各精密吸取
20 µL进样测定，外标法计算，结果 3批样品中金
丝桃苷的量分别为 0.461 5、0.475 5、0.472 5 mg/g。
3 讨论
本实验曾比较了流动相分别为甲醇-乙腈-0.3%
磷酸（27∶9∶64）、乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%冰醋
酸（1∶1∶19.4∶78.6）、甲醇-0.1%冰醋酸（37∶63），
乙腈-0.3%磷酸（18∶82）时，各色谱峰的分离效果，
结果以乙腈-0.3%磷酸（18∶82）为流动相的分离效
果最好，且流动相组成简单。
黄酮类化合物由于具有交叉共轭体系，所以在
紫外-可见区产生特征性的 2个吸收峰。本实验选择
检测波长为 360 nm，可获得高灵敏度、良好的峰形。
木芙蓉中的主要活性成分为黄酮类成分，其中
对芦丁的定量研究报道较多，而对金丝桃苷定量的
相关研究较少，本实验以甲醇为溶剂提取木芙蓉提
取物中的金丝桃苷，利用 HPLC法测定其量，方法
简便、准确、专属性好、灵敏度高，为木芙蓉提取
物的进一步开发利用奠定了基础。
参考文献
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