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Determination of 1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-D-glucose in forty four kinds of Chinese traditional medicines by HPLC

44种中药中1,2,3,4,6-五-O-倍酰-D-葡萄糖含量的测定



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ChemicalstabilityofSalviamiltirrhizahairyroot
LVDongmei1,YUANYuan1,ZHANGDong,HUANGLuqi1,LIANGRixin1,QIUDeyou2
(1.InstituteofChineseMateriaMedica,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China;
2.InstituteofForestry,ChineseAcademyofforestry,Beijing100091,China)
[Abstract] Objective:TostudyonthechemicalstabilityofSalviamiltirhizahairyroot.Method:TherolAgenewasdetected
byPCRinDNAandthechemicalcontituentvariancesweredetectedbyHPLC.Result:TherolAgenewasfoundinalthe10batches
oftheculfuredhairyroot.Thesimilaritiesofthechromatographicfingerprintsofthe10batchesarehigherthan095.Conclusion:
Therearenosignificantdiferencesofthechemicalconstituentsin10hairyrootsamples.
[Keywords] Salviamiltirhizahairyroot;chemicalstability;HPLC
[责任编辑 王亚君]
[收稿日期] 20070301
[基金项目] 北京市属市管高等学校人才强教计划资助项目;首都医科大学科研基金(2006ZR09)
[通讯作者] 王桥,Tel:(010)83911524,Email:qiaow@ccmu.edu.cn
44种中药中1,2,3,4,6五O倍酰D葡萄糖
含量的测定
王维聪,王 潮,宋学英,赵文华,王 桥
(首都医科大学 化学生物学与药学院,北京 100069)
[摘要] 目的:采用高效液相色谱测定44种中药中1,2,3,4,6五O倍酰D葡萄糖(1,2,3,4,6pentaOgal
loylDglucose,PGG)的含量。方法:以乙醇水溶液(50∶50)为提取剂,在50~60℃的温度下超声1h,从中药中提
取PGG;采用DiamonsilC18(46mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈25%醋酸水溶液(18∶82),紫外检测
波长280nm,流速10mL·min-1。结果:PGG在1~150μg·mL-1呈良好的线性关系(r=09994)。五倍子、牡
丹皮、赤芍、白芍等17种中药中均含有PGG,且在五倍子、牡丹皮、赤芍、白芍中 PGG含量较高。结论:本实验用简
单快捷的方法考察了44种中药中PGG的含量,并准确测定了五倍子等17种含PGG中药中PGG的含量,为从中药
中分离、纯化PGG以及中药的开发利用提供了实验基础。
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    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
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March,2008
[关键词] 1,2,3,4,6五O倍酰D葡萄糖;高效液相色谱法;中药提取
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)06065603
  在自然界的一些植物中含有1,2,3,4,6五O
倍酰D葡萄糖(1,2,3,4,6pentaOgaloylDglu
cose,PGG)。最近有文献报道,PGG可以显著抑制
肿瘤血管生成、诱导肿瘤细胞凋亡而具有明显的抗
癌作用[14]。研究表明,PGG作为胰岛素模拟物(in
sulinmimetics),可以激活胰岛素受体,促进脂肪细
胞中葡萄糖的转运,降低糖尿病小鼠血糖水平[5]。
此外,PGG还可以抑制前脂肪细胞(preadipocytes)
分化成脂肪细胞,具有减少糖尿病伴随的肥胖等并
发症的功效[6,7]。这些研究结果提示PGG是一种潜
在的、并具有广泛应用前景的抗癌及抗糖尿病药物。
然而,从中药中分离提取PGG及其含量测定的方法
还未见报道。为了考察不同中药中 PGG的含量,作
者采用超声提取法,用HPLC仪测定了44种中药中
PGG的含量。
1 仪器和试剂
美国Waters2695型高效液相色谱系统(含四元
梯度泵、2996型二极管阵列紫外检测器、在线真空
脱气机、自动进样器、柱温箱、empower色谱工作
站),MIKRO22R台式高速冷冻离心机(德国 Het
tich公司),GL-88B涡旋混合器(江苏依林贝尔仪
器制造有限公司)。
44种中药均购自北京同仁堂药店,由首都医科
大学中医药学院中药系龚慕辛副教授鉴定。PGG
由本研究室提供(纯度 >98%)[8],乙腈(色谱纯,
Fisher公司),其他试剂皆为分析纯,水为重蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 迪马公司 DiamonsilC18色谱柱
(46mm×250mm,5μm);紫外检测波长280nm;
流动相乙腈25%醋酸水溶液(18∶82);流速 10
mL·min-1;进样量20μL。
2.2 精密度试验 取50μg·mL-1PGG对照品溶
液20μL连续5次进样,测得 PGG峰面积的 RSD
034%,仪器精密度良好。
2.3 稳定性试验 分别取50μg·mL-1PGG对照
品溶液20μL,在0,2,4,8,12,16,20,24,36,48h测
定PGG峰面积的 RSD36%,表明 PGG溶液在48
h内性质稳定。
2.4 线性关系考察 用浓度为 200μg·mL-1的
PGG储备液精确配制浓度分别为1,5,10,50,100,
150μg·mL-1的对照品溶液。按2.1项下色谱条
件进行测定,以PGG的峰面积r对浓度 X做线性回
归,得回归方程 Y=376×104X-967×104,r=
09994,结果表明PGG在1~150μg·mL-1呈良好
的线性关系,其定量限为1μg·mL-1。
2.5 不同提取方法的比较 选择赤芍作为代表性
中药,用于比较不同提取方法对 PGG提取率的影
响。准确称取赤芍样品粉末(40目)05g,共称18
份。分别置于50mL磨口锥形瓶中,按表1加入不
同提取剂[乙醇水溶液(50∶50)或乙醇3% 醋酸水
溶液(50∶50)]200mL后精密称重。每种提取剂
分别按照以下3种不同方法提取PGG,并重复3次。
搅拌提取法:室温下磁力搅拌提取24h。超声
提取法:50~60℃超声提取 1h。超声搅拌提取
法:50~60℃超声提取1h,然后室温下磁力搅拌提
取6h。
在提取结束后称重,用相应提取剂补足失重。
静置,取上清液离心(20℃ 14000r·min-1,10
min)。离心后,取上清过02μm滤膜。滤液按2.1
项下色谱条件测定其中PGG浓度,按下式计算PGG
的提取率,结果见表1。
表1 不同方法从赤芍中提取PGG的提取率
(珋x±x,n=3) % 
提取方法 乙醇水溶液 乙醇3%醋酸水溶液
搅拌 0270±0012 0275±0014
超声 0319±0063 0275±0007
超声搅拌 0293±0010 0269±0020
  提取率(%)=(样品中PGG量/样品质量)×100%
2.6 重复性试验 准确称取05g赤芍样品粉末
(40目)共5份,分别置于50mL磨口锥形瓶中,加
入200mL提取剂(50%乙醇水溶液),并精密称
重。50~60℃超声提取1h后称重,用提取剂补足
失重。静置,取上清液离心(20℃14000r·min-1,
10min),取上清过02μm滤膜,得到供试品溶液待
HPLC测定。按 2.1项下色谱条件,测得样品中
PGG平均含量为319mg·mL-1,RSD197%,表明
供试品溶液的制备方法重复性良好。
2.7 加样回收率测定 准确称取05g赤芍样品
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粉末共6份,按每克赤芍加入30mgPGG的比例,
分别精确加入10mg·mL-1PGG对照品溶液。按
2.6项下方法进行提取,按21项下测定PGG浓度,
见图1,PGG平均回收率978%,RSD50%。
图1 PGG对照品与赤芍样品HPLC图
A.对照品;B.样品;1PGG
2.8 44种中药中PGG含量测定 按2.6项下方法
制备供试品溶液,按2.1项下色谱条件测定 PGG的
含量。结果表明在测定的44种中药中,17种中药
含有PGG见表2。而在五味子、何首乌、银杏叶、黄
芪、川芎、莪术、山茱萸、石榴皮、栀子、枸杞子、甘草、
当归、薏苡仁、乌梅、玄参、密蒙花、紫草、半夏、知母、
桑叶、黄连、茯苓、委陵菜、丹参、罗布麻、夏枯草、粉
葛等27种中药中未测到有PGG的存在。
3 讨论
3.1 提取剂及提取方法的选择 本实验以赤芍为
代表性中药,分别考察了两种不同提取剂[乙醇水
溶液(50∶50)和乙醇3%醋酸水溶液(50∶50)];各
采用3种不同的提取方法[搅拌提取、超声提取、超
声搅拌提取]比较对PGG提取效果的影响。从表1
中可以看到,2种不同提取剂从赤芍中提取 PGG的
提取率没有显著性差异,即采用酸性介质也并没有
显著提高PGG的提取率。超声提取法对 PGG的提
取率相对较高,但并没有显著性差异。超声搅拌提
取法得到的提取率并不高于超声提取法,说明超声
法已较充分地提取了赤芍中的PGG。
3.2 44种中药 PGG含量的测定 通过对测得的
   表2 17种中药中PGG质量浓度(珋x±s,n=3)
No 药材 PGG/mg·g-1 RSD/%
1 五倍子 584±14 25
2 牡丹皮 647±045 70
3 赤芍  319±007 20
4 白芍  303±016 52
5 黄芩  187±007 36
6 芦荟  152±007 45
7 决明子 100±008 78
8 地锦草 090±003 34
9 荔枝核 081±001 15
10 菊花  067±002 22
11 红花  039±000 097
12 杜仲  025±002 75
13 大黄  023±002 69
14 淫羊藿 021±000 028
15 红景天 011±000 29
16 桑白皮 011±000 33
17 地黄  011±000 31
含有PGG中药的分析可知,含有 PGG的中药主要
属于唇形科、豆科、毛茛科、菊科等,且均具有清热凉
血、祛瘀止痛、养血调经、平肝止痛、敛阴止汗、敛肺
降火等功效,但其药效是否与 PGG的存在有关,还
有待于进一步深入的研究。
本研究用简单快捷的方法测定了中药材中
PGG的含量,它将为PGG的分离纯化及其药理作用
的深入研究提供实验依据,也为含PGG中药的开发
和利用提供了一种新的思路。
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Determinationof1,2,3,4,6pentaOgaloylDglucoseinforty
fourkindsofChinesetraditionalmedicinesbyHPLC
WANGWeicong,WANGChao,SONGXueying,ZHAOWenhua,WANGQiao
(SchoolofChemicalBiologyandPharmaceuticalSciences,CapitalMedicalUniversity,Beijing100069,China)
[Abstract] Objective:Todetermine1,2,3,4,6pentaOgaloylDglucose(PGG)infortyfourkindsofChinesetraditional
medicinesbyHPLC.Method:ThePGGwasextractedwithasolventconsistingofethanolandwater(50∶50)inultrasonicbathat50
60℃ for1hour.ADiamonsilC18column(46mm×250mm,5μm)wasusedfortheseparationandanalysisofPGGwithamobile
phaseconsistingofacetonitrileand25% aceticacidsolution(18∶82).Thewavelengthofdetectionwasat280nm,andflowratewas
setat10mL·min-1.Result:ThecalibrationcurveforPGGislinearovertherangeof1150μg·mL-1(r=09994),andPGG
wasfoundinseventeenkindsofChinesetraditionalmedicines,suchasgaltreepeonybark,redpeonyroot,whitepeonyroot,andso
on.Conclusion:ThecontentsofPGGweredeterminedinfortyfourkindsofChinesetraditionalmedicinesbyarapidandprecision
HPLCmethod.
[Keywords] PGG;HPLC;assay
[责任编辑 王亚君]
《中国中药杂志》近况简介
《中国中药杂志》为中国中文核心期刊,中国科技核心期刊;为“中国科学引文数据库”、“中国学术期刊综合
评价数据库”和“中国科技论文统计源”核心期刊,并且被《中国学术期刊文摘》中、英文版收录。在国际上,被美
国医学索引Medline及《化学文摘》(CA)、《生物学文摘》(BA)、《国际药学文摘》(IPA)、《分析文摘》(AA),毒物
学文摘(ToxFile),俄罗斯《文摘杂志》(AJ),荷兰《医学文摘》(EM),波兰《哥白尼索引》(IC)等权威性专业文摘收
录。其中,《中国中药杂志》在Medline收录中国论文的期刊中名列第4位,为524篇。据中国科学技术信息研究
所信息分析研究中心发布2006年版中国科技期刊引证报告:《中国中药杂志》总被引频次为3260;影响因子为0.
634;基金论文比例0.48。另据中国学术期刊综合引证年度报告(2007):《中国中药杂志》总被引频次为5726,影
响因子为0959,5年影响因子1258,基金论文比048。
《中国中药杂志》荣获第三届国家期刊奖百种重点期刊,国家中医药管理局“以岭杯”第三届全国中医药优秀
期刊评选一等奖,中国科协精品科技期刊工程项目资助。
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