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Determination of chlorogenic acid, caffeic acid and linarin in Flos Chrysanthemi Indici from different places by RP-HPLC

不同产地野菊花中绿原酸、咖啡酸和蒙花苷含量



全 文 :不同产地野菊花中绿原酸%咖啡酸和蒙花苷含量
郭巧生!! 房海灵! 申海进
南京农业大学 中药材研究所! 江苏 南京 +$$*#
$摘要%!目的&对 ++ 份不同产地野菊花中绿原酸%咖啡酸和蒙花苷的含量进行测定$为科学评价及有效控制其质量提供
参考( 方法&采用 8?R05AB.[ <
(
色谱柱!&f# 00i+$ 00$

0)绿原酸和咖啡酸流动相为乙腈5$fg磷酸水溶液!*r()
检测波长 )+# 20( 蒙花苷流动相甲醇5水5冰醋酸!+#r+)r)检测波长 ))& 20$柱温 + h)流速 0F-0R2d( 结果&绿原酸%
咖啡酸和蒙花苷的浓度与峰面积$分别在 +f j$

D!%e$f**($+f j+

D!%e$f**($&f*% j&f&%

D!%e$f***呈良好
的线性关系)平均加样回收率分别为 $$f(g$*#f+g$$)f%g$>8I分别为 +fg$+f)g$f( g( 结论&不同产地野菊花中绿
原酸%咖啡酸和蒙花苷含量存在显著差异$重庆丰都产野菊花中绿原酸含量最高为 $f+)+g$咖啡酸含量整体偏低$江苏和安
徽产野菊花中蒙花苷含量基本达到药典规定水平(
$关键词%!野菊花)绿原酸)咖啡酸)蒙花苷)高效液相色谱法
$稿件编号%!+$$*$+$$$%
$基金项目%!国家科技基础条件平台项目!+$$Ib4+$$$
$通信作者 % !! 郭巧生$ NQV# ! $+ (&)*#*$ H50BRV# D`S3
21BWfQUWf.2
!!野菊花!EV/SA/SR@BQ菊属>?%B$&-?+*)*多年生草本植物野菊>f
;-A;.)*FR22v的干燥头状花序$&中国药典一部
!+$$ 年版称其性味苦辛$微寒$归肝%心经)具有
清热解毒%疏风平肝之功效)常用于疔疮痈肿$目赤
肿痛$头痛眩晕等*5++ ( 我国野菊花资源分布广泛$
产地的自然环境差异大$为考察不同产地野菊花的
质量$本试验以绿原酸%咖啡酸和蒙花苷为指标成
分$采用>G5JGF<法对来自于 ++ 个产地的野菊花
样品进行质量分析$为野菊花药材质量评价及合理
利用该药用植物资源提供参考(
!仪器%试剂与试药
4bN4AWCRTRQCH@B0F司$8?R0BUYW F<5+$4N高效液相色谱仪!日本 8?R5
0BUYW 公司)绿原酸 ! +%b+$*$ *g%咖啡酸
!$&%b#$*$*(g$8RD0B公司)蒙花苷!&%$%+*&$
*%g$中国药品生物制品检定所)乙腈%甲醇%冰醋
酸!德国9H>团有限公司$纯净水$其他试剂!南京化学试剂有
限公司$分析纯(
试验样品于 +$$% 年 $ 月下旬5 月中旬收集$
经南京农业大学郭巧生教授鉴定为菊科植物野菊
>f;-A;.)*f的干燥头状花序( 采集头状花序$于
$ h杀青 ) 0R2 后$置 & h烘箱中干燥$粉碎$过
$$ 目筛备用(
!方法与结果
-!色谱条件!8?R05AB.[ <
(
色谱柱!&f# 00i
+$ 00$

0)测定绿原酸%咖啡酸参照吴明侠方
法*)+ $略有改动( 流动相乙腈5$fg磷酸水溶液
!*r($流速 f$ 0F-0R2d$检测波长 )+# 20)测
定蒙花苷方法参照&中国药典一部!+$$ 版 *+ $
流动相甲醇5水5冰醋酸!+#r+)r$检测波长 ))&
20( 进样量 +$

F( 流速 f$ 0F-0R2d$柱温 +
h( 色谱图见图 $+(
]!对照品溶液的制备!分别精密称取绿原酸
$f*% 0D%咖啡酸 *f 0D%蒙花苷 (f++ 0D加甲醇
溶解制成绿原酸质量浓度为 $&f+ 0D-Fd$咖
啡酸质量浓度为 (*f+%( 0D-Fd$蒙花苷质量浓度
为 %*f%$ 0D-Fd的对照品母液( 再分别吸取绿
原酸母液 + 0F%咖啡酸母液 % 0F$蒙花苷母液 )
0F置于 + 0F量瓶$甲醇定容$得绿原酸 $ 0D-
F
d
$咖啡酸 + 0D-Fd及蒙花苷 &f&% 0D-Fd的
对照品溶液$经 $f&

0微孔滤膜滤过备用(
]&!供试品溶液的制备!精密称取 & h干燥至恒
重的野菊花样品 $f) D$以甲醇提取$料液比 r+$$
先浸泡 & ?$再超声提取 ?$经 $f&

0滤膜过滤$
续滤液作为供试品溶液(
]Y!线性关系考察!精密吸取绿原酸%咖啡酸混合
对照品溶液及蒙花苷对照品溶液各 &$($+$#$
-$#-
第 ) 卷第 * 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! !!!!!! ! ! ! !
\/Vf)$ :SSWQ!*
9B6$ +$$
!!
f绿原酸)+f咖啡酸(
图 !对照品!4和供试品!MJGF<图
f蒙花苷(
图 +!对照品!4和供试品!MJGF<图
+$

F$按上述色谱条件测定( 以对照品浓度 K!0D
-F
d
为横坐标$峰面积 L为纵坐标进行线性回
归$得 + 种有机酸组分及蒙花苷的回归方程%相关系
数及线性范围!表 (
表 !绿原酸$咖啡酸和蒙花苷的回归方程%相关
系数及线性范围
对照品 回归方程 % 线性范围=0D-Fd
绿原酸 Lef*%Kd$f$%$ $f**( +f j$
咖啡酸 Le%f#+Kd+f*& $f**( +f j+
蒙花苷 Le+$ &Km) *)$ $f*** &f*% j&f&%
]$!精密度试验!精密吸取绿原酸%咖啡酸混合对
照品溶液及蒙花苷对照品溶液各 &

F$分别连续进
样 次$在上述色谱条件下测定各对照品峰面积
次积分值的 >8I分别为绿原酸 $f#+g$咖啡酸
$f(%g$蒙花苷 $f##g$相对保留时间的 >8I介于
$f*)g jf)g(
][!重复性试验!同一样品称取 份$按 ]& 项下
操作制备供试液$分别进样$测定峰面积$>8I分别
为绿原酸 +fg$咖啡酸 +f)g$蒙花苷 f%g(
]%!稳定性试验!精密吸取绿原酸%咖啡酸混合对
照品溶液及蒙花苷对照品$分别于 $$&$($+$+& ?
进样分析$) 种对照品在 +& ? 内峰面积积分值的
>8I分别为绿原酸 f(g$咖啡酸 +f$g$蒙花苷
f&g$对照品溶液在 +& ?内稳定(
]\!加样回收率试验!精密量取已知绿原酸和咖
啡酸及蒙花苷含量的野菊花样品提取液各 ) 0F$加
入绿原酸和咖啡酸混合对照品溶液及蒙花苷对照品
0F$定容到 $ 0F$重复 次$进样$测定峰面积$
带入回归方程计算含量$取 次测定结果的平均值(
绿原酸的平均加样回收率为 $$f(g$>8I+fg$
咖啡酸的平均加样回收率为 *#f+g$>8I+f)g$蒙
花苷的平均加样回收率为 $)f%g$>8If( g(
]#!含量测定!取不同产地的野菊花样品$按 ]&
项下方法制备供试品溶液$每个样品 ) 个重复( 测
定峰面积$带入回归方程计算含量$取 ) 次测定结果
的平均值$采用 8G88#f$ 软件进行数据分析$结果
见表 +(
++ 份不同产地的野菊花药材中绿原酸质量分
数在 $f$+*g j$f+)+g$其中来源于重庆丰都居群
最高为 $f+)+g( 来源于湖南株洲居群最低为
$f$+*g( ++ 份不同产地的野菊花药材中咖啡酸质
量分数整体较低$为 $f$%g j$f$)#g$但也存在
显著差异$其中来源于安徽滁州居群最高为
$f$)#g( 来源于安徽宣城居群最低为 $f$%g(
+$$ 年版药典规定蒙花苷质量分数不得少于
$f($g$++ 份不同产地的野菊花药材达到药典标准
的占总数的 *g$蒙花苷质量分数在 $f)$g j
+f)g( 其中来源于安徽%江苏居群含量较高$而来
源于湖南株洲的居群最低仅为 $f)$g(
&!讨论
绿原酸具有利胆%抗菌%降压%抗氧化%抗突变及
抗肿瘤作用*&+ $咖啡酸具有止血%镇咳%祛痰%抗氧
化%抗肿瘤等活性*+ $与野菊花中的抗肿瘤等活性
一致*#+ )蒙花苷是我国药典规定的野菊花药材的质
控指标之一)因此选择绿原酸%咖啡酸和蒙花苷作为
指标来反应野菊花的品质(
植物次生代谢产物在植物体内的合成积累$是
在植物具有相关基因的基础上且在一定环境条件下
诱导作用的结果*%+ $因此影响次生代谢产物的主要
有 + 个因素#生境和遗传( 野菊广泛分布于我国各
地$受气候%土壤等环境因素影响$表现出明显的地
理分布差异( 从地域分布来看$江苏和安徽产野菊
花中蒙花苷含量 *$g达到药典标准$绿原酸含量也
较高( 且两省地理位置相互靠近$与其历来为野菊
花的主产区相映证( 与经度和纬度进行相关性分
析$发现绿原酸和咖啡酸与经度呈负相关$与纬度呈
正相关$但相关性均不显著( 分析影响本实验结果
-#-
第 ) 卷第 * 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! !!!!!! ! ! ! !
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9B6$ +$$
!!
表 +!野菊花样品中绿原酸%咖啡酸和蒙花苷的质量分数!-e) g
;/f 来源 绿原酸 咖啡酸 蒙花苷
江苏南京 $f)+ k$f$$+
DL
$f$+$$ k$f$$)
ET
$f%+) k$f$$&
09
+ 江苏常州 $f$*+ k$f$$
R:
$f$*# k$f$$$+
TEL
$f*) k$f$$)
TE
) 江苏无锡 $f$(& k$f$$)
1X
$f$*& k$f$$
TEL
$f(#) k$f$$
R:
& 江苏洪泽 $f** k$f$$+
]M
$f$*& k$f$$+
TEL
f+$) k$f$$+
QH
安徽滁州 $f# k$f$$+
?J
$f$)#$ k$f$$)
B4
$f($* k$f$$+
[b
# 安徽宣城 $f$%( k$f$$+
1X
$f$%$ k$f$$$&
?J
+f$&( k$f$$#
]M
% 安徽合肥 $f%% k$f$$&
UI
$f$*) k$f$$)
TDEL
f)% k$f$$)
.<
( 安徽阜阳 $f#& k$f$$+
QH
$f$* k$f$$
TDEL
$f(#$ k$f$$
R:
* 安徽铜陵 $f$ k$f$$+
09
$f$*# k$f$$
TEL
$f(*) k$f$$&
?J
$ 安徽安庆 $f%( k$f$$#
UI
$f$++$ k$f$$)
UIH
+f) k$f$$)
B4
浙江温州 $f$#% k$f$$&
[b
$f$*& k$f$$
TEL
$f# k$f$$
/;
+ 河南信阳 $f#) k$f$$)
QH
$f$*& k$f$$$
TEL
f+( k$f$$
UI
) 河南南阳 $f$%% k$f$$
1X
$f$+) k$f$$+
.$f*% k$f$$+
DL
& 四川绵山 $f*& k$f$$
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$f&(( k$f$$&
/O
重庆丰都 $f+)+ k$f$$&
B4
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$f)#) k$f$$)
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# 山东临沂 $f$* k$f$$+
VF
$f$++$ k$f$$+
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$f)) k$f$$+
`^
% 云南昆明 $f$* k$f$$
R:
$f$*( k$f$$$
TE
$f)& k$f$$
C>
( 湖南株洲 $f$+* k$f$$)
2;
$f$*$ k$f$$
TDEL
$f)$ k$f$$&
C>
* 江西萍乡 $f$( k$f$$+
VF
$f$*# k$f$$+
TEL
$f($+ k$f$$+
[b
+$ 广东广州 $f k$f$$)
TE
$f$+& k$f$$
]M<
$f%)% k$f$$+
VF
+ 福建福州 $f$#% k$f$$
[b
$f$+$ k$f$$)
QH
$f)%% k$f$$
AG
++ 湖北荆州 $f$)+ k$f$$+
2;
$f$($ k$f$$+
DLJ
$f(( k$f$$)
1X
!!注#小写字母表示9l$f$$大写字母表示9l$f$$同一列中含有不相同字母者为差异显著(
的因素$除环境因素外$遗传因素可能也是造成野菊
花化学成分含量差异显著的主要原因$对此可从分
子生物学水平进一步研究(
+$$ 年版药典规定蒙花苷含量不得少于
$f($g$从上述测定结果可知#不同产地药材中蒙花
苷含量参差不齐$且与其他 + 种有机酸无显著相关
性$故应考虑对多个成分进行定量分析$并结合药材
的外观性状%产量等性状$以便更全面地反映药材的
质量( 该研究结果为进一步了解不同产地野菊花有
效成分含量的差异奠定一定的基础(
$参考文献%
*+!中国药典-一部*8+-+$$#+*-
*++!国家中医药管理局中华本草编委会-中华本草-第 % 册*9+-
上海#上海科学技术出版社$***#($-
*)+!吴明侠$张贵君-JGF<法测定野菊花 %$g乙醇提取物中两种
有机酸类药效组分的含量*X+-中医药学报$+$$%$)!##))-
*&+!陈少洲$吕飞燕$台建祥-葵粕中绿原酸的研究进展应用前景
*X+-食品与发酵工业$+$$+$+(!#-
*+!田雪菲$蒲小萍-咖啡酸对神经毒素9GGm诱发大鼠小脑颗粒细
胞凋亡的保护作用*X+-北京大学学报#医学版$+$$&$)#!#+%-
*#+!王军文$杨志波$向亚萍$等-菊藻丸体外对癌细胞生长影响的
初步研究*X+-湖南中医学院学报$+$$$$+$!+r++-
*%+!8WU?BL$ >BcRS?B2[BCL4-:2c/VcQ0Q2@B2U R2@QCB.@R/2 /TcBCR/WS
SRD2BVR2D./0A/W2US/2 @?QAVB2@0Q@B]/VR.QcQ2@SUWCR2DUQTQ2SQ
CQSA/2SQ$ CQSRS@B2.Q@/S@CQSSTB.@/CST/C0B@R/2 /TSQ./2UBC60Q@B]5
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第 ) 卷第 * 期
+$$ 年 月
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@R/2BVS@B2UBCU R2 A?BC0B./A/QRBf
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$责任编辑!王亚君%
欢迎订购当代药用植物典#丛书
&当代药用植物典由香港浸会大学中医药学院赵中振教授及中国工程院肖培根院士主编( 全书分为 )篇共 &册$分别为东
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全书图文并茂$深入浅出$内容独到( 书中药用草本植物的照片!实物照片质量优良$不少是深入其原产地拍摄获得$十
分珍贵$便于与药用草本植物实物进行鉴别比较( 特别附有的中国%日本%韩国药典中的同名异物情况中英文对照表对在国
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第 ) 卷第 * 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! !!!!!! ! ! ! !
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