全 文 ：麻疯树核糖体失活蛋白 ｃｕｒｃｉｎ在大肠杆菌中
高效表达条件的研究
罗孟军１，２，陈　放２，颜　钫２，刘伟信１
（１．成都市计划生育技术指导所，四川 成都 ６１００３１；
２．四川大学 生命科学学院，四川 成都 ６１００６４）
［摘要］　目的：编码麻疯树毒蛋白（ｃｕｒｃｉｎ）成熟蛋白的基因原核表达载体的构建及其高效表达条件的研究。方法：根据
ＧｅｎＢａｎｋ上麻疯树的ｃＤＮＡ序列设计引物，用ＰＣＲ方法从麻疯树基因组中扩增得到编码麻疯树毒蛋白成熟蛋白的基因；将其
导入原核表达载体ｐＱＥ３０，ｐＥＴ３２中，并将其转入大肠杆菌获得重组菌株。在不同诱导剂、不同温度、不同诱导时间等条件下
诱导其产生重组蛋白并进行检测比较。结果：用ＰＣＲ方法从麻疯树基因组中扩增得到编码麻疯树毒蛋白成熟蛋白的基因，成
功构建了原核表达载体ｐＱＥＲ，ｐＥＴＲ，并获得重组菌株 ＰＲＭ，ＰＲＢ。在不同诱导剂、不同温度、不同诱导时间等条件诱导下，
ＰＲＢ均无重组蛋白产生，而ＰＲＭ却能以包涵体的形式表达ｃｕｒｃｉｎ。结论：重组菌ＰＲＭ在诱导６ｈ，２８℃，ＩＰＴＧ０５ｍｍｏｌ·Ｌ－１
时表达ｃｕｒｃｉｎ蛋白的效率最高。
［关键词］　麻疯树；核糖体失活蛋白；表达载体；大肠杆菌；诱导表达
［收稿日期］　２００８０７１３
［基金项目］　国家“十五”科技攻关课题（２００４ＢＡ４１１Ｂ０１）
［通信作者］　刘伟信，Ｔｅｌ：（０２８）８６６３０５２１，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｕｗｅｉｘｉｎｄ＠
１６３．ｃｏｍ
　　麻疯树 ＪａｔｒｏｐｈａｃｕｒｃａｓＬ．是大戟科 Ｅｕｐｈｏｒｂｉ
ａｃｅａｅ麻疯树属Ｊａｔｒｏｐｈａ的植物，其叶和种子可提取
杀灭钉螺［１］，治疗创伤及癌症的药物［２］。在许多国
家和地区麻疯树常被用于清热解毒、消肿散瘀。但
麻疯树种子对动物，如小白鼠［３］、羊［４］及人，特别是
幼儿［５］表现出毒性，且具有致死作用。１９７６年，
Ｓｔｒｉｐｅ首次从麻疯树种子中分离出了麻疯树毒蛋
白［６］，后来的研究证实了麻疯树种子含毒成分主要
是种子毒蛋白（ｃｕｒｃｉｎ）。进一步的研究表明，麻疯
树毒蛋白 ｃｕｒｃｉｎ是一种 Ｉ型核糖体失活蛋白，具抗
癌活性［７］，是一种具开发成为新型抗癌药物潜力的
蛋白。常规的获得蛋白质的方法是从种子中提取，
这种方法不但工作量大，而且所获得的蛋白质的质
量极不稳定，因此人们试图寻找一种简便而有效的
能大量获得这种有开发潜力蛋白的方法。ｃｕｒｃｉｎ是
一种糖蛋白，其糖基化并非生理功能所必须［８］，这
样就为其在大肠杆菌中的重组表达提供了理论上的
可能性。但是该方法也存在一些困难，如表达产物
是否对原核宿主细胞有毒性、表达效率等。至今未
见利用原核表达系统生产ｃｕｒｃｉｎ蛋白的成熟生产工
艺的报道，但原核表达系统的巨大优越性仍值得去
尝试。因此，本研究在前人研究的基础上，对编码麻
疯树毒蛋白ｃｕｒｃｉｎ成熟蛋白的基因进行克隆、并构
建其原核表达载体，通过采用不同的诱导条件优化
ｃｕｒｃｉｎ表达的最佳条件，为进一步研究利用 ｃｕｒｃｉｎ
奠定基础。
１　材料和方法
１．１　材料
麻疯树种子采集于四川省攀枝花市。大肠杆菌
Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９，ＢＬ２１（ＤＥ３）为四川大学生物工程实
验室保存。质粒载体ｐＭＤ１８Ｔｖｅｃｔｏｒ，ｐＱＥ３０，ｐＥＴ
３２购自大连宝生生物公司。
１．２　方法
１．２．１　ｃｕｒｃｉｎ蛋白基因的分离克隆　采用稍加改
进的ＣＴＡＢ法提取基因组 ＤＮＡ［９］。由于该蛋白基
因组内不含内含子，故根据 ＧｅｎＢａｎｋ上 ｃｕｒｃｉｎ的全
长 ｃＤＮＡ（ＡＹ０６９９４６）序列设计编码麻疯树毒蛋白
ｃｕｒｃｉｎ成熟蛋白的ＰＣＲ引物ＣＴ１：ＡＣＴＧＧＡＴＣＣＧＣＴ
ＧＧＴＴＣＣＡＣＴＣＣＡＡＣＴＴＴ（ＢａｍＨＩ），ＣＴ２：ＣＡＣ
ＧＡＧＣＴＣＡＴＡＣＡＴＴＧＧＡＡＡＧＡＴＧＡＧＧＡ（ＳａｃＩ），用
ＰＣＲ法（９４℃预变性５ｍｉｎ，随后９４℃４０ｓ，５５℃１
ｍｉｎ，７２℃ １５ｍｉｎ３０个循环，最后７２℃ ５ｍｉｎ）扩
增出表达麻疯树毒蛋白的基因片段（约 ９００ｂｐ）。
按试剂盒（上海华舜）上的说明对获得的片段进行
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回收、纯化。并连接到 ｐＭＤ１８Ｔ载体，转入大肠杆
菌ＪＭ１０９感受态细胞中，筛选重组子并测序。
１．２．２　原核表达载体的构建　将含 ｐＭＤ１８Ｔ／ｃｕｒ
ｃｉｎ质粒和载体ｐＱＥ３０，ｐＥＴ３２的 Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９接
种在５０ｍＬＬＢ液体培养基中培养，按 Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔ
ａｌ［１０］的碱变性法提取质粒 ＤＮＡ。用 ＢａｍＨＩ和 ＳａｃＩ
酶切 ｐＭＤ１８Ｔ／ｃｕｒｃｉｎ质粒，１％琼脂糖电泳分离酶
切片段后，用胶回收试剂盒（上海华舜）回收目标片
段，获得带酶切位点（ＢａｍＨＩ和ＳａｃＩ）之间的目的片
段。
用Ｔ４ＤＮＡ连接酶将目的片段分别与以同样双
酶切后的表达质粒ｐＥＴ３２，ｐＱＥ３０在１６℃下连接过
夜，连接产物分别转化大肠杆菌ＪＭ１０９感受态细胞。
挑取重组子并验证。将经菌落ＰＣＲ、质粒双酶切
及测序鉴定为阳性的重组质粒分别转入Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１
（ＤＥ３）感受态细胞进行表达。同时以不含表达片段
的相应空载体转入相应的感受态细胞为空白对照。
１．２．３　重组菌的诱导表达　将上述表达菌和空白
菌接种于 ＬＢ液体培养基中，３７℃下摇瓶培养至
Ａ６００达到０６时，加入诱导剂进行诱导表达，继续培
养６ｈ取出离心后，收集沉淀作 ＳＤＳＰＡＧＥ电泳，电
泳完毕后，将蛋白质电转移到硝酸纤维素膜上。以
ＲＧＳＨｉｓ为一抗，碱性磷酸酶（ＡＰ）标记的兔抗鼠
ＩｇＧ为二抗进行检测，同时以 ｃｕｒｃｉｎ兔抗血清为一
抗，碱性磷酸酶（ＡＰ）标记的鼠抗兔 ＩｇＧ为二抗进行
Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析。
不同诱导剂下的诱导表达：将上述表达菌和空
白菌接种于ＬＢ液体培养基中，３７℃下摇瓶培养至
Ａ６００达到０６时，分别加入不同浓度的诱导剂进行诱
导表达，继续培养６ｈ取出离心后，收集沉淀作ＳＤＳ
ＰＡＧＥ电泳检测。
不同温度及培养时间下的诱导表达：挑取经鉴
定后的阳性重组菌株接种到１０ｍＬＬＢ／Ａｍｐ／Ｋａｎ液
体培养基中，以空白载体为对照。振荡培养至 Ａ６００
达到０６左右，将培养物平均分成５份，加入 ＩＰＴＧ
至 ０５ｍｍｏｌ·Ｌ－１，继续按不同的温度（４，１８，２８，
３７，４２℃）培养相应的时间（２，４，６，８，１０，１６ｈ）后，
取出培养物作ＳＤＳＰＡＧＥ电泳检测。
２　结果分析
２．１　原核表达载体的构建及鉴定
将经ＢａｍＨＩ，ＳａｃＩ酶切后所得的表达 ｃｕｒｃｉｎ成
熟蛋白的基因分别与同样双酶切所得的 ｐＥＴ３２
（ｃ），ｐＱＥ３０载体连接，获得的重组质粒 ｐＥＴ３２／
ｃｕｒｃｉｎ，ｐＱＥ３０／ｃｕｒｃｉｎ。测序结果表明，均含有目的
片段，证明已成功构建了表达载体，分别命名为
ｐＥＴＲ，ｐＱＥＲ。将此２种重组质粒分别导入Ｅ．ｃｏｌｉ
ＢＬ２１（ＤＥ３）是获得重组菌ＰＲＢ，ＰＲＭ。
２．２　ｃｕｒｃｉｎ在２个表达系统中的诱导表达
２．２．１　不同诱导条件对 ｃｕｒｃｉｎ重组菌表达的影响
　对照及含有目的基因的重组菌 ＰＲＢ在 ＩＰＴＧ、木
糖、乳糖（表１）的诱导下均不能产生重组蛋白，而重
组菌ＰＲＭ在ＩＰＴＧ诱导下可以产生大小约３０ｋＤ的
重组蛋白质，与所推算的理论大小相一致，且该蛋白
以包涵体的形式表达。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ检测表明
所产生的新蛋白条带为麻疯树毒蛋白ｃｕｒｃｉｎ的重组
蛋白（图１）。但木糖和乳糖却不能诱导 ＰＲＭ产生
重组蛋白质。ＩＰＴＧ诱导时，浓度为００５ｍｍｏｌ·Ｌ－１
时其诱导产生的重组蛋白条带较为明显，在低于
０５ｍｍｏｌ·Ｌ－１时随浓度的增加其条带有逐渐加深
的趋势；当 ＩＰＴＧ浓度高于０５ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，其重
组蛋白带的颜色不再随浓度的增加而加深，表明在
该浓度下，重组蛋白的表达量达到最高（图２）。
表１　不同诱导剂诱导试验方案
诱导剂浓度
／ｍｍｏｌ·Ｌ－１
表达结果
ＩＰＴＧ 乳糖 木糖
０ － － －
００１ － － －
００５ ＋ － －
０１ ＋ － －
０２  － －
０４  － －
０５  － －
１０  － －
２０  － －
　　注：“－”表示没有重组蛋白产生；“＋”表示有重组蛋白产生；
“＋”越多则产生的重组蛋白的量越多。
Ｍ．ｍａｒｋｅｒ；１．对照；２．ＩＰＴＧ诱导表达的ＰＲＭ。
图１　重组蛋白的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ
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Ｍ．ｍａｒｋｅｒ；１～６．ＩＰＴＧ浓度分别为００５，０１，
０２，０３，０４，０５ｍｍｏｌ·Ｌ－１；７．阴性对照；８．诱导表达的ＰＲＢ；
所有的重组菌均诱导培养６ｈ。
图２　重组菌在不同ＩＰＴＧ浓度下的诱导表达
２．２．２　不同温度对表达的影响　在不同温度下
（表２）培养 ＰＲＭ，ＰＲＢ，将培养物作 ＳＤＳＰＡＧＥ电
泳。与对照相比，在较低温度下 ＰＲＢ和 ＰＲＭ均无
新的蛋白条带产生。而在相对较高温度下，ＰＲＭ却
能产生与推算的理论大小一致（约为３０万）的新蛋
白条带，且经 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ检测表明所产生的新
蛋白条带为麻疯树毒蛋白 ｃｕｒｃｉｎ的重组蛋白。在
２８，３７℃培养时产生的蛋白质的量相对较多；在４２
℃时产生重组蛋白质的量较少；在一定的温度范围
内（１８～４２℃），重组蛋白的表达量随时间的延长而
增加，在诱导后８ｈ表达量即达到最大值。但当蛋
白的量达到一定程度时，其表达量不再随时间的延
长而增加，而是保持在一个相对稳定的水平上。但
无论在什么温度下，ＰＲＢ均不能产生新的条带（图
３）。结果表明，该基因不适合用载体ｐＥＴ３２进行表
达，且该蛋白在ＰＲＭ菌中的最适表达温度为２８℃。
表２　不同温度对重组菌ＰＲＭ表达的影响
诱导时间
／ｈ
表达结果／℃
４ １８ ２８ ３７ ４２
２ － － － － －
４ － － ＋ ＋ －
６ － ＋   ＋
８ － ＋   ＋
１０ － ＋   
１６ －    
　　注：“－”表示没有重组蛋白产生，“＋”表示有重组蛋白产生，
“＋”越多则产生的重组蛋白的量越多。
３　讨论
Ｃｕｒｃｉｎ是一种Ⅰ型核糖体失活蛋白，能在体外
　　
Ｍ．ｍａｒｋｅｒ；１～９．诱导温度分别为１８，１８，２８，２８，
３７，３７，４２，４２，４℃（奇数带为ＰＲＭ，偶数带为ＰＲＢ）。
图３　温度对ＰＲＭ和ＰＲＢ表达的影响
抑制肿瘤细胞的活性，其主要的生理生化特征就是
对无细胞体系蛋白质合成具有强烈的抑制效果［７］。
该类蛋白生化性质稳定，制备简便，可与单克隆抗体
等制备免疫毒素，在肿瘤治疗和骨髓移植等方面有
着广泛的应用前景。
本研究成功地构建了麻疯树毒蛋白ｃｕｒｃｉｎ基因
的原核表达载体 ｐＱＥＲ，ｐＥＴＲ，将表达载体分别转
化Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）得表达菌ＰＲＭ，ＰＲＢ。但在所
设计的表达条件下，ＰＲＢ不能表达出重组蛋白，说
明载体质粒ｐＥＴ３２不适合 ｃｕｒｃｉｎ的表达。而 ＰＲＭ
却能在ＩＰＴＧ的诱导下表达出大小约为３０万的蛋
白，表明ｐＱＥ３０是ｃｕｒｃｉｎ表达的适合载体。
在目的基因的异源表达中，表达条件的优化是
目标蛋白质表达量大小的关键。影响大肠杆菌 Ｅ．
ｃｏｌｉ中蛋白表达量的因素除载体启动子结构以外，
还有质粒拷贝数、质粒稳定性等［１０］。在温度、诱导
剂种类、诱导时间、培养基等诸多影响因素中，诱导
剂和温度的影响对目标蛋白的表达最为明显。研究
结果表明，在４℃时几乎没有目标蛋白质产生，而当
温度逐渐升高时目标蛋白质的量也不断增加，当温
度到达２８℃时，在相同条件下，目标蛋白质的表达
量达到最大；其表达量不再随温度的升高而增加，且
在温度高于３７℃时，其表达量有降低的趋势。
在选用的诱导剂 ＩＰＴＧ、木糖、乳糖中，只有
ＩＰＴＧ可以诱导目标蛋白的表达。而乳糖和木糖不
能诱导目标蛋白的表达。可能是由于乳糖或木糖提
高了细菌的生长速度，但是却间接降低了质粒的拷
贝数，导致表达量下降。乳糖浓度太低时，细菌在诱
导表达早期已将乳糖消耗干净，造成诱导不足；乳糖
浓度太高时，细菌生长速度过快，降低了质粒的拷贝
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数，使表达量有所下降［１２］。本研究表明，ｃｕｒｃｉｎ能
在大肠杆菌中进行表达，说明 ｃｕｒｃｉｎ对原核生物是
无毒性的。
［参考文献］
［１］　 程忠跃，黄四喜，曾庆海，等．不同产地麻疯树素室内浸杀灭
螺效果比较［Ｊ］．中国血吸虫病防治杂志，２００１，１３（４）：２２１．
［２］　 林　娟，周选围，唐克轩，等．麻疯树植物资源研究概况［Ｊ］．
热带亚热带植物学报，２００４，１２（３）：２８５．
［３］　 ＡｄａｍＳＥＩ．ＴｏｘｉｃｅｆｅｃｔｓｏｆＪａｔｒａｐｈａｃｕｒｃａｓｉｎｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｔｏｘｉ
ｃｏｌｏｇｙ，１９７４，２（１）：６７．
［４］　 ＡｄａｍＳＥＩ，ＭａｇｚｏｕｂＭ．ＴｏｘｉｃｉｔｙｏｆＪａｔｒａｐｈａｃｕｒｃａｓｆｏｒｇｏａｔｓ
［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，１９７５，４（３）：３４７．
［５］　 ＡｂｄｕＡｇｕｙｅＩ，ＳａｎｎｕｓｉＡ，ＡｌａｆｉｙａＴａｙｏＲＡ，ｅｔａｌ．Ａｃｕｔｅｔｏｘｉｃ
ｉｔｙｓｔｕｄｉｅｓｗｉｔｈＪａｔｒａｐｈａｃｕｒｃａｓＬ［Ｊ］．ＨｕｍＴｏｘｉｃｏｌ，１９８６，５
（４）：２６９．
［６］　 ＳｔｉｒｐｅＦ，ＰｅｓｓｉｏｎＢｒｉｚｚｉＡ，ＬｏｒｅｎｚｏｎｉＥ．Ｓｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｆｒｏｍｔｈｅｓｅｅｄｓｏｆＣｒｏｔｏｎｔｏｇｌｉｕｍａｎｄｏｆＪａｔｒｏｐｈａｃｕｒｃａｓ［Ｊ］．Ｂｉｏ
ｃｈｅｍＪ，１９７６，１５６（１）：１．
［７］　 林　娟，颜　钫，唐　琳，等．麻疯树核糖体失活蛋白的分离
纯化和作用机制研究［Ｊ］．高技术通讯，２００２（１１）：３６．
［８］　 崔维科，赵　绮，唐　琳，等．麻疯树核糖体失活蛋白（ｃｕｒｃｉｎ）
化学修饰及其与活性的关系［Ｊ］．应用环境与生物学报，
２００６，１２（３）：３２９．
［９］　 邹喻苹，葛　颂，王晓东．系统与进化植物学中的分子标记
［Ｍ］．北京：科学出版社，２００１：６８．
［１０］　ＳａｍｂｒｏｏｋＪ，ＦｒｉｔｓｃｈＥＦ，Ｍａｎｉａｔｉｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇ（ＡＬａｂｏｒｔｏｒｙ
Ｍａｎｎｕａｌ）［Ｍ］．２ｎｄ．Ｎｅｗｙｏｒｋ：ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ，１９８９．
［１１］　隋广超，胡美浩．影响大肠杆菌中外源基因表达的因素［Ｊ］．
生物化学与生物物理学进展，１９９４，２１（２）：１２８．
［１２］　张　毅，屈贤铭．乳糖作为诱导剂对重组目的蛋白表达的影
响［Ｊ］．生物工程学报，２０００，１６（４）：４６４．
ＳｔｕｄｙｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｕｒｃｉｎｇｅｎｅｃｌｏｎｅｄｆｒｏｍＪａｔｒｏｐｈａｃｕｒｃａｓ
ｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ
ＬＵＯＭｅｎｇｊｕｎ１，２，ＣＨＥＮＦａｎｇ２，ＹＡＮＦａｎｇ２，ＬＩＵＷｅｉｘｉｎ１
（１．ＦａｍｉｌｙＰｌａｎｎｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｅｎｇｄｕ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００３１，Ｃｈｉｎａ；
２．ＣｏｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｉｃｈｕａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００６４，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｍａｔｕｒｅｐｒｏｔｅｉｎｃｕｒｃｉｎｇｅｎｅｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｓｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉａｎｄｃｈｏｏｓｅ
ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｉｎｄｕｃｉｎｇｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｓｔｒａｉｎｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｇｅｎｅｅｎｃｏｄｉｎｇｏｆｃｕｒｃｉｎｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒｏｍｔｈｅｇｅｎｏｍｅｏｆＪａｔ
ｒｏｐｈａｃｕｒｃａｓｓｅｅｄｓｂｙＰＣＲａｎｄｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｓｐＱＥ３０ａｎｄｐＥＴ３２ｏｂｔａｉｎｉｎｇｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｖｅｃｔｏｒｓｐＱＥＲａｎｄｐＥＴ
Ｒｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｔｗｏｖｅｃｔｏｒｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｒｅｄｉｎｔｏＥ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）ａｎｄｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｓｔｒａｉｎｓＰＲＭａｎｄＰＲＢｗｅｒｅａｔａｉｎｅｄｒｅ
ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＰＲＭａｎｄＰＲＢｗｅｒｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙｄｉｆｅｒｅｎｔｒｅｖｕｌｓａｎｔｓａｎｄｕｎｄｅｒｄｉｆｅｒｅｎｔｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄｔｉｍｅ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｇｅｎｅｅｎｃｏｄｉｎｇ
ｏｆｍａｔｕｒｅｐｒｏｔｅｉｎｃｕｒｃｉｎｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙＰＣＲａｎｄｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｓｔｒａｉｎｓＰＲＭａｎｄＰＲＢｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓ
ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＰＲＢｃｏｕｌｄｎｏｔｐｒｏｄｕｃｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｕｎｄｅｒｓｕｃｈｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ＰＲＭｃｏｕｌｄｈｉｇｈｌｙｐｒｏｄｕｃｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏ
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