全 文 ：ＨＰＬＣ分析比较炮制和提取方法对
黄芩活性成分的影响
王宏志１，喻春皓１，２，高 钧２，赵广荣１
（１．天津大学 化工学院，天津 ３０００７２；２．天士力集团有限公司，天津 ３００４０２）
［摘要］ 目的：分析比较炮制与提取方法对黄芩药材中活性成分提取的影响。方法：以黄芩生药材和炮制药
材为分析对象，比较５种不同提取方法对黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素提取的影响。色谱条件ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂ
ａｘＥｘｔｅｎｄＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相甲醇乙腈水乙酸（１８∶２５∶５７∶０２）；流速０８ｍＬ·ｍｉｎ
－１；检
测波长２７５ｎｍ；柱温３０℃。结果：生药材酶法提取黄芩素、汉黄芩素得率最高，分别为５４１％，１３０％；６０％乙醇回
流提取黄芩苷、汉黄芩苷得率最高，分别为１０１１％，３５５％。炮制药材不同提取方法的效果接近，以酶法提取效果
最好，黄芩苷、汉黄芩苷和黄芩素、汉黄芩素得率分别为１０６３％，３６０％和１８１％，０５９％。结论：对于黄芩生药
材，不同提取方法对４种活性成分的提取影响较大；对于黄芩炮制药材，不同提取方法对４种活性成分的提取影响
较小，针对不同活性成分应选择最适提取方法。
［关键词］ 黄芩；黄芩苷；汉黄芩苷；黄芩素；汉黄芩素；炮制；提取；ＨＰＬＣ
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）１６１６３７０４
［收稿日期］ ２００６１０１０
［通讯作者］ 喻春皓，Ｔｅｌ：（０２２）８１８３４５７６，Ｅｍａｉｌ：ｃｈｕｎｈａｏｙｕ
＠１２６．ｃｏｍ
黄芩 ＳｃｕｔｅｌａｒｉａｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓＧｅｏｒｇｉ属于唇形科
Ｌａｂｉａｔａｅ黄芩属Ｓｃｕｔｅｌａｒｉａ，多年生草本植物，被列为
《神农本草经》上品，具有清热燥湿、泻火解毒、止血
安胎等功效［１］。国内外对其化学成分及药理作用
已进行了系统的研究，其中含量较高的活性成分有
黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等［２，３］。药物
代谢研究表明，黄芩苷和汉黄芩苷为前药，黄芩素和
汉黄芩素为二者的真正药效物质基础［４］。不同炮
制方法［５］和提取方法对黄芩活性成分的提取均有
影响，黄芩提取方法主要有水煎提取［６］、超声提
取［７］等。曾有文献对黄芩苷的提取方法［８］做过比
较，但目前对汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的提取方
法的比较尚未见报道。作者分别考察了水超声提
取、水回流提取、６０％乙醇超声提取、６０％乙醇回流
提取、酶法提取，并对提取物的 ４种活性成分黄芩
苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量进行测定和
比较分析，以选择适宜４种活性成分提取的方法。
１ 仪器与试药
黄芩生药材，粉碎过６０目。黄芩炮制药材，同
批生药材在蒸汽灭菌器中１１０℃灭菌３０ｍｉｎ，然后
放入烘箱中５０℃干燥至衡重，粉碎过６０目。
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ｓｅｒｉｅｓ型高效液相色谱仪，单元泵、
在线脱气、自动进样器、ＶＷＤ检测器（美国安捷伦公
司），ＬＤＺＸ－４０ＳＣＩ型立式自动电热压力蒸汽灭菌
器（上海申安医疗器械厂）。甲醇、乙腈（Ｍｅｒｃｋ）为
色谱纯，柠檬酸为分析纯（天津市化学试剂一厂），
磷酸氢二纳为分析纯（天津市化学试剂三厂），乙醇
为工业乙醇，水为纯净水。纤维素酶（天津奥凯化
工有限责任公司）。黄芩苷对照品（中国药品生物
制品检验所），汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对照品
（上海友思有限公司）。黄芩药材为天津天士力集
团现代中药研究所提供，批号０４０８１０，经本所高钧
博士鉴定。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＥｘｔｅｎｄＣ１８色谱柱
（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相甲醇乙腈水醋酸
（１８∶２５∶５７∶０２）；流速０８ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长２７５
ｎｍ；柱温３０℃。对照品及样品色谱图见图１，２。
２．２ 对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷、汉黄芩
苷、黄芩素、汉黄芩素对照品２７０，１５５，０３２，０２２ｍｇ，
置５０ｍＬ量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照
品溶液。其浓度分别为５４，３１，６４，４４μｇ·ｍＬ－１。
２．３ 供试品溶液的制备 水超声制备黄芩提取物：
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图１ 对照品及黄芩生药材样品的ＨＰＬＣ图
Ａ．对照品；Ｂ．水超声提取样品；Ｃ．水回流提取样品；Ｄ．酶法提取
样品；Ｅ．６０％乙醇超声提取样品；Ｆ．６０％乙醇回流提取样品；
１．黄芩苷；２．汉黄芩苷；３．黄芩素；４．汉黄芩素
图２ 黄芩炮制药材样品的ＨＰＬＣ图
Ａ．水超声提取样品；Ｂ．水回流提取样品；
Ｃ．酶法提取样品；Ｄ．６０％乙醇超声提取样品；
Ｅ．６０％乙醇回流提取样品；
１．黄芩苷；２．汉黄芩苷；３．黄芩素；４．汉黄芩素
精密称取生药材（或炮制药材）约１ｇ，加１４倍水，
室温下超声提取３次，每次４０ｍｉｎ，过滤，合并３次
提取液，加水定容至５００ｍＬ。精密量取０５ｍＬ，加
甲醇定容至５ｍＬ，微孔滤膜滤过（０４５μｍ），即得。
水回流提取制备黄芩提取物：精密称取生药材
（或炮制药材）约１ｇ，加１４倍水加热回流提取３次，
每次１ｈ，过滤，合并 ３次提取液，加水定容至 ５００
ｍＬ。精密量取０５ｍＬ，加甲醇定容至５ｍＬ，微孔滤
膜滤过（０４５μｍ），即得。
酶提制备黄芩提取物：精密称取生药材（或炮
制药材）约１ｇ，加适量纤维素酶，再加入４０ｍＬｐＨ
４８的柠檬酸磷酸氢二纳缓冲液。５０℃水浴１３０ｒ
·ｍｉｎ摇床反应３ｈ，过滤，残渣加１０倍６０％乙醇超
声提取２次，每次３０ｍｉｎ，过滤，合并３次提取液，加
缓冲液定容至５００ｍＬ。精密量取０５ｍＬ，加甲醇定
容至５ｍＬ，微孔滤膜滤过（０４５μｍ），即得。
６０％乙醇超声制备黄芩提取物：精密称取生药
材（或炮制药材）约１ｇ，加１０倍６０％乙醇超声提取
３次，每次３０ｍｉｎ，过滤，合并３次提取液，加６０％乙
醇定容至５００ｍＬ。精密量取０５ｍＬ，加甲醇定容至
５ｍＬ，微孔滤膜滤过（０４５μｍ），即得。
６０％乙醇回流制备黄芩提取物：精密称取生药
材（或炮制药材）约１ｇ，加１０倍６０％乙醇加热回流
３次，每次１ｈ，过滤，合并３次提取液，加６０％乙醇
定容至５００ｍＬ。精密量取０５ｍＬ，加甲醇定容至５
ｍＬ，微孔滤膜滤过（０４５μｍ），即得。
２．４ 线性关系考察 精密吸取对照品溶液１，２，４，
８，１２，１６，２０μＬ依次进样，按上述色谱条件测定，记
录色谱图，以峰面积（Ｙ）为纵坐标，进样量（Ｘ）为横
坐标，绘制标准曲线。得回归方程：Ｙ黄芩苷 ＝
４９０１７６４５Ｘ＋６９４２４９，Ｒ２＝０９９９９；Ｙ汉黄芩苷 ＝
４０２１２１１２Ｘ＋１３２４９３，Ｒ２ ＝０９９９９；Ｙ黄芩素 ＝
７５８５６４２７Ｘ－３４７５８８，Ｒ２＝０９９９９；Ｙ汉黄芩素 ＝
９６５６２５１８Ｘ－１１２５６１，Ｒ２＝０９９９９。结果表明，
黄芩苷在 ００５４～１０８μｇ，汉黄芩苷在 ００３１～
０６２μｇ，黄芩素在０００６４～０１２８μｇ，汉黄芩素在
０００４４～００８８μｇ线性良好。
２．５ 精密度试验 取一份供试品溶液连续进样６
次，进样量１０μＬ，对黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉
黄芩素的峰面积进行考察，其 ＲＳＤ分别为０２９％，
０２５％，０２５％，０２８％，表明精密度良好。
２．６ 稳定性试验 取同一份供试品溶液分别在１，
２，４，８，１２，２４ｈ进样，进样量１０μＬ，对黄芩苷、汉黄
芩苷、黄芩素、汉黄芩素的峰面积进行考察，其 ＲＳＤ
分别为 １９１％，１７５％，１０４％，１１９％，表明供试
品液在２４ｈ稳定。
２．７ 重复性试验 精密称取黄芩药材约１ｇ，６份，
按供试品溶液处理，进样量为１０μＬ，对黄芩苷、汉
黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的峰面积进行考察，其
ＲＳＤ分别为 １８３％，１５１％，１２８％，１９９％，表明
重复性较好。
２．８ 回收率试验 精密称取已知含量的黄芩药材
约０５ｇ，６份，分别准确加入黄芩苷、汉黄芩苷、黄
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芩素、汉黄芩素对照品适量，按供试品溶液处理，进
行测定，经计算黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素
的回收率分别为 ９９７％（ＲＳＤ１０５％），９８９％
（ＲＳＤ１５８％），９７８％（ＲＳＤ１４０％），９８１％（ＲＳＤ
１５７％）。
２．９ 样品测定 取黄芩药材，按供试品溶液处理，
每个样品提取３份，得各供试品溶液。精密吸取对
照品溶液及供试品溶液各１０μＬ，注入高效液相色
谱仪，按上述色谱条件测定，带入回归方程计算各样
品中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的提取得
率及４种活性成分的总得率，取３次测定结果的平
均值，结果见表１，２。
表１ 不同提取方法所得黄芩生药材活性成分
得率的比较（ｎ＝３） ％
提取方法 黄芩苷 汉黄芩苷 黄芩素 汉黄芩素 总得率
水超声 － － ３６４ １２２ ４８６
水回流 ８７０ ３０８ ０９０ ０４５ １３１３
酶法 － － ５４１ １３０ ６７１
６０％乙醇超声 ８９５ ３２２ １６５ ０５４ １４３６
６０％乙醇回流 １０１１ ３５５ １８４ ０５８ １６０８
表２ 不同提取方法所得黄芩炮制药材活性成分
得率的比较（ｎ＝３） ％
提取方法 黄芩苷 汉黄芩苷 黄芩素 汉黄芩素 总得率
水超声 ８７７ ３１３ ０９０ ０２８ １３０８
水回流 ９４３ ３２４ ０８２ ０４５ １３９４
酶法 １０６３ ３６０ １８４ ０５９ １６６６
６０％乙醇超声 ９８３ ３４１ １７９ ０５８ １５６１
６０％乙醇回流 ９３８ ３２０ １６３ ０５６ １４７７
得率（％）＝活性成分含量药材质量 ×１００％
２．１０ 不同提取方法的比较 用生药材提取时，
６０％乙醇回流提取总得率最高为１６０８％，水超声
提取总得率最低为４８６％。水回流提取、６０％乙醇
超声提取、６０％乙醇回流提取的黄芩苷、汉黄芩苷得
率高，且 ６０％乙醇回流提取效果最好。水超声提
取、酶法提取时检测不到黄芩苷、汉黄芩苷，但是黄
芩素、汉黄芩素得率高，且酶法提取效果比水超声提
取效果好，黄芩素、汉黄芩素得率分别提高了
４８６％和６６％。用炮制药材提取时，酶法提取总
得率最高为 １６６６％，水超声提取总得率最低为
１３０８％。各提取方法测得的黄芩苷、汉黄芩苷得率
都较高，与水超声提取效果相比，酶法提取使得黄芩
苷、汉黄芩苷和黄芩素、汉黄芩素得率分别提高了
２１２％，１５０％和１０４４％，１１０７％。
３ 讨论
依据文献报道，先后试验了甲醇水［９］、甲醇
水醋酸［１０］、乙腈水醋酸［１１］等溶剂系统分析检测
黄芩中的４种活性成分，均未获得满意的分离效果，
可能因为黄芩苷和汉黄芩苷与黄芩素和汉黄芩素的
极性差别较大，导致汉黄芩素的出峰时间过长。本
实验中用甲醇乙腈水醋酸（１８∶２５∶５７∶０２）溶剂
系统作为流动相，可得到分离度好、出峰时间适宜的
各组分色谱峰（图１，２）。同时，该方法适合于对黄
芩中的４种主要活性成分同步分析检测，可作为有
效的黄芩质量控制方法。
黄芩生药材中含有黄芩酶类［３］，能促使黄芩
苷、汉黄芩苷水解，向黄芩素、汉黄芩素转化。在高
压蒸汽炮制处理过程中，药材中黄芩酶类失去了催
化转化活性，使得处理后的黄芩药材中黄芩苷、汉黄
芩苷不能被催化转化成黄芩素和汉黄芩素。本实验
中生药材的水超声提取物、酶法提取物ＨＰＬＣ分析，
相同积分条件下检测不到黄芩苷、汉黄芩苷，因为黄
芩生药材中的黄芩酶类在适当温度和湿度下酶解黄
芩苷、汉黄芩苷，转化为黄芩素、汉黄芩素；表明生药
材炮制方法的不同会影响药效物质基础，进而影响
其疗效。
不同提取方法对各有效成分的提取效果不同。
生药材水回流提取、６０％乙醇超声提取、６０％乙醇回
流提取的黄芩苷、汉黄芩苷得率较高，黄芩素、汉黄
芩素得率较低，可能因为生药材中黄芩酶类在沸水、
６０％乙醇体系中失去催化转化活性，这类似于对生
药材进行高压蒸汽炮制，使得黄芩苷、汉黄芩苷不能
转化为黄芩素、汉黄芩素。以黄芩素和汉黄芩素为
主要目标成分提取时，选用黄芩生药材且用酶法提
取比水超声提取效果好。对于炮制药材，不同提取
方法对黄芩苷、汉黄芩苷得率影响不大，从经济性和
操作难易性考虑，可以选择水加热回流提取黄芩苷、
汉黄芩苷；提取黄芩素、汉黄芩素时，酶法提取效果
较好。对于生药材和炮制药材，水超声提取总得率
最低；酶法提取总得率最高，因为纤维素酶酶解破坏
了细胞壁后，黄芩苷、汉黄芩苷和黄芩素、汉黄芩素
更易进入到主体溶液中。
比较了水超声提取、水回流提取、６０％乙醇超声
提取、６０％乙醇回流提取、酶法提取的提取效果。对
于黄芩生药材，不同提取方法对４种活性成分影响
较大，酶法提取、水超声提取的黄芩素、汉黄芩素得
率较高，水回流提取、６０％乙醇超声提取、６０％乙醇
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回流提取的黄芩苷、汉黄芩苷得率较高；对于黄芩炮
制药材，不同提取方法对黄芩苷、汉黄芩苷得率影响
较小，但酶法提取、６０％乙醇超声提取、６０％乙醇回
流提取比水超声提取、水回流提取的黄芩素、汉黄芩
素得率高得多。所以在有针对性的提取制备单一黄
芩活性成分时应选用合适的药材和相应的最佳提取
方法，从而提高目标成分的得率。
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ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＲａｄｉｘＳｃｕｔｅｌａｒｉａｅｂｙＨＰＬＣａｎａｌｙｓｉｓ
ＷＡＮＧＨｏｎｇｚｈｉ１，ＹＵＣｈｕｎｈａｏ１，２，ＧＡＯＪｕｎ２，ＺＨＡＯＧｕａｎｇｒｏｎｇ１
（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＴｉａｎｊｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ３０００７２，Ｃｈｉｎａ；
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［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｃｏｍｐａｒｅａｎｄａｎａｌｙｚｅｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｔｈｅａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＲａｄｉｘＳｃｕｔｅｌａｒｉａｅｂｙｄｉｆ
ｆｅｒｅｎｔｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇａｎｄｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｒａｗａｎｄｐｒｏｃｅｓｓｅｄＲａｄｉｘＳｃｕｔｅｌａｒｉａｅｗｅｒｅｕｓｅｄ，ａｎｄｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｂａ
ｉｃａｌｉｎ，ｗｏｇｏｎｏｓｉｄｅ，ｂａｉｃａｌｅｉｎ，ｗｏｇｏｎｉｎｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＨＰＬＣａｆｔｅｒｆｉｖｅｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．ＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎ
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－１，ａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ２７５ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔ：
ｔｈｅｒａｔｉｏｓｏｆｂａｉｃａｌｅｉｎａｎｄｗｏｇｏｎｉｎｉｎｒａｗｍａｔｅｒｉａｌｗｅｒｅ５４１％，１３０％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｂｙｅｎｚｙｍａｔｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｗｈｉｃｈｉｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎ
ｏｔｈｅｒｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｂｙｒａｗｍａｔｅｒｉａｌ；Ｔｈｅｒａｔｉｏｓｏｆｂａｉｃａｌｉｎａｎｄｗｏｇｏｎｏｓｉｄｅｉｎｒａｗｍａｔｅｒｉａｌｗｅｒｅ１０１１％ ａｎｄ３５５％ ｂｙｅｔｈａｎｏｌｏｆ
６０％，ｗｈｉｃｈｉｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｏｔｈｅｒｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓ；Ｄｉｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｈａｖｅｎｏｅｖｉｄｅｎｔｅｆｅｃｔｓｏｎｐｒｏｃｅｓｓｅｄｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｅｎｚｙ
ｍａｔｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｉｓｔｈｅｂｅｓｔ．Ｔｈｅｒａｔｉｏｏｆｂａｉｃａｌｉｎ，ｗｏｇｏｎｏｓｉｄｅａｎｄｂａｉｃａｌｅｉｎ，ｗｏｇｏｎｉｎｉｓ１０６３％，３６０％ ａｎｄ１５４％，０５９％．
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｄｉｆｅｒｅｎｔｍｅｔｈｏｄｓｈａｖｅｅｖｉｄｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｅｆｅｃｔｓｏｎｔｈｅｆｏｕｒａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｗｉｔｈｒａｗｍａｔｅｒｉａｌ，ｂｕｔｈａｖｅｎｏｅｖｉｄｅｎｔ
ｅｆｅｃｔｓｗｉｔｈｐｒｏｃｅｓｓｅｄｍａｔｅｒｉａｌ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｄｉｆｅｒｅｎｔａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｍｏｓｔｓｕｉｔａｂｌｅｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｈｏｕｌｄｂｅａｄｏｐｔｅｄ．
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ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １６
Ａｕｇｕｓｔ，２００７