全 文 ：不同产地和品种枳壳药材的毛细管电泳
指纹图谱研究
罗光明，谭小辉，徐丽芳，杨雅琴，杨世林
（江西中医学院 药学院，江西 南昌 ３３０００４）
［摘要］ 目的：采用毛细管电泳法建立枳壳的指纹图谱，并对不同产地和品种枳壳药材的指纹图谱进行比较。
方法：以８０ｍｍｏｌ·Ｌ－１硼酸１５ｍｍｏｌ·Ｌ－１硼砂缓冲液（用氢氧化钾调ｐＨ９７０）为背景电解质，检测波长２０１ｎｍ，
运行电压１６ｋＶ，柱温２３℃，压力进样２７６ｋＰａ。结果：建立了枳壳药材的毛细管电泳指纹图谱（ＣＥＦＰ），测定了不
同产地和品种枳壳毛细管电泳指纹图谱与共有模式间相似度。结论：该方法具有较好的重复性，可用于枳壳药材
的质量控制。
［关键词］ 枳壳；毛细管电泳法；指纹图谱；质量控制
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）２０２３６２０３
［收稿日期］ ２００７１２１１
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（３０４６０１５６）；国家“十
五”科技攻关项目（２００４ＢＡ７２１Ａ２３）
［通讯作者］ 罗光明，Ｔｅｌ：（０７９１）７１１８９８２，Ｅｍａｉｌ：ｊｚｌｇｍ１１＠
１６３．ｃｏｍ
枳壳为芸香科柑橘属植物酸橙Ｃｉｔｒｕｓａｕｒａｎｔｉｕｍ
Ｌ．及其栽培变种的干燥未成熟果实，具有理气宽
中、行滞消胀之功效，主治胸胁气滞，胀满疼痛、食积
不化、痰饮内停、胃下垂、脱肛、子宫脱垂等症［１］。
枳壳中主要的化学成分有挥发油，对羟福林（辛弗
林ｓｙｎｅｐｈｒｉｎｅ）、Ｎ甲基酪胺（Ｎｍｅｔｈｙｌｔｙｒａｍｉｎｅ）、橙
皮苷（ｈｅｐｅｒｉｄｉｎ）、新橙皮苷（ｎｅｏｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ）和柠檬
酸、维生素Ｃ、磷、果酸、色素等［２］。目前多采用高效
液相色谱对其进行研究，但是中药提取物常损害色
谱柱，消耗大量的有机试剂，导致ＨＰＬＣ指纹图谱成
本高且污染环境；而高效毛细管电泳因其低消耗、无
污染、柱效高、样品处理简单而日益受到重视。运用
高效毛细管电泳法（ＨＰＣＥ）对枳壳药材进行指纹图
谱的研究尚未见报道。本研究采用区带电泳法，以
江西及湖南、四川等地所产道地药材枳壳为研究对
象，建立了枳壳毛细管电泳指纹图谱。该方法具有
检测方法简单，快捷，重复性好，为枳壳药材的质量
控制提供了新的参考方法。
１ 材料
ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒＰ／ＡＣＥＴＭＭＤＱ毛细管电泳仪，
ＰＤＡ检测器，３２ＫａｔａｔＴＭＳｏｆｔｗａｒｅｖｅｒ５０数据处理系
统；台式微电离子酸度计 ＰＰ１５（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）；ＢＳ２２４Ｓ
电子天平（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ，１／１万）；ＫＱ５２００Ｂ型超声波清
洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
柚皮苷对照品（中国药品生物制品检定所）、新
橙皮苷（自制，经 ＨＰＬＣ，峰面积归一法测定纯度 ＞
９８％）；硼砂（Ｎａ２Ｂ４Ｏ７·１０Ｈ２Ｏ）和硼酸（Ｈ３ＢＯ３）均
为分析纯；其余试剂为分析纯；水为重蒸水。
枳壳样品分别采于江西、四川和湖南等主要产
区，并经江西中医学院药学院赖学文副教授鉴定为
芸香科药材枳壳Ｃ．ａｕｒａｎｔｉｕｍ。
２ 方法与结果
２．１ 对照品溶液的制备 精密称定新橙皮苷、柚皮
苷对照品各１０ｍｇ，置于１０ｍＬ量瓶中，加重蒸水
稀释至刻度，０４５μｍ滤膜过滤，即得。
２．２ 供试品溶液的配制 枳壳药材粉碎过４０目
筛，称取１００ｇ，加１００ｍＬ水，置于１５０ｍＬ圆底烧
瓶中。轻轻振摇混匀，称重，在沸水中回流２ｈ，放
冷，再称重，并用水补足失重，摇匀，滤过，过 ０４５
μｍ滤膜，备用。
２．３ 电泳条件 未涂层石英毛细管柱 ７５μｍ×
６２５ｃｍ（有效柱长５０ｃｍ）；背景电解质８０ｍｍｏｌ·
Ｌ－１硼酸１５ｍｍｏｌ·Ｌ－１硼砂（用氢氧化钾调 ｐＨ
９７０）；运行电压１６ｋＶ；柱温２３℃；进样压力２７６
ｋＰａ，进样时间８ｓ；检测波长２０１ｎｍ。
２．４ 稳定性试验 取同一份供试品溶液，分别于
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０，４，８，１２，１６，２４ｈ检测枳壳毛细管电泳指纹图谱，
１３个共有峰的迁移时间的 ＲＳＤ小于１３％，相对峰
面积ＲＳＤ小于 ４３％，供试品溶液在２４ｈ内稳定。
２．５ 精密度试验 取同一份供试品溶液，连续进样
测定６次，１３个共有峰的相对保留时间的ＲＳＤ小于
０５％，相对峰面积的 ＲＳＤ小于３６％，表明该方法
精密度良好。
２．６ 重复性试验 取同一批供试品６份，按２．２项
下方法制备成供试品溶液，按２．３项下方法进行测
定，１３个共有峰的相对保留时间的 ＲＳＤ小于
０９５％，相对峰面积的ＲＳＤ小于４５％，表明方法重
复性良好。
２．７ 指纹图谱相似性评价 按２．２项下方法制备
供试品溶液，按２．３项下电泳条件分别测定１１批样
品，记录色谱图。以其相对保留时间和相对峰面积
平均值标定指纹特征。通过对其 ＣＥＦＰ比较研究，
按其电泳峰的共有率大于８０％［３］，确定共有峰 １３
个。其中Ｓ峰为新橙皮苷的峰，含量较高且出峰时
间居中，故将其作为参比峰，计算其他各峰的相对保
留时间和相对峰面积。１３个共有峰的相对保留时
间的ＲＳＤ在００８％～０７２％。
１１批样品共有峰利用《中国药典》“中药色谱指
纹图谱相似度评价系统Ａ版”生成的对照图谱中各
峰保留时间分别为：峰１（９１４５），峰２（１０２９５），峰
３（１１１５１），峰 ４（１１６５２），峰 ５（１２０３７），峰 ６
（１２７８１），峰 ７（１３０３７），峰 ８（１３３２８），峰 ９
（１４４５５），峰 １０（１６１２４），峰 １１（１６５４７），峰 １２
（１６８８０），峰１３（１７１４１）。通过参照对照品的保留
时间可知６号峰为新橙皮苷、８号峰为柚皮苷，见图
１，２。
１．新橙皮苷；２．柚皮苷
图１ 混合对照品的电泳图谱
利用《中国药典》“中药色谱指纹图谱相似度评
价系统 Ａ版”，将 Ｎｏ．１～１１枳壳药材图谱数据导
入，经多点校正和数据匹配，以中位数法生成对照指
纹图谱。１１批枳壳药材的相似度分别是 ０９９２，
６．新橙皮苷；８．柚皮苷；其他色谱峰未鉴定
图２ 枳壳药材的共有指纹图谱
０９８０，０９９２，０９９６，０９９６，０９９６，０９８９，０９８０，
０９７３，０９９５，０９９１，见图３。
图３ １１批药材的指纹图谱
３ 讨论
３．１ 药材提取方法考察 在预实验过程中，对枳壳
的提取方法包括煎煮、水浴、温浸、超声、索氏提取都
做了筛选，同时对于提取的时间、药材粉碎的粗细也
进行了考察。发现用超声、温浸２种提取方法时，成
分不容易被完全提取；采用煎煮法时，因煎煮条件控
制难以保持一致，因而造成图谱稳定性较差；在索氏
提取中，分别考察了甲醇、５０％甲醇、５０％乙醇３种
不同溶剂提取后，发现成分提取效果仍不佳，最后采
取水浴沸水回流２ｈ，出峰稳定，且重复性较好。故
本研究采用水浴法作为枳壳药材的提取工艺。
３．２ 背景电解质优化 缓冲体系是影响分离效果
的主要因素。进行实验搜寻时，可先用宽 ｐＨ缓冲
范围的体系如磷酸盐等为搜寻基础，初步定出 ｐＨｍ
的大致位置，再换用更好的缓冲试剂进行优化［４］。
用ＮａＨ２ＰＯ４，Ｎａ２ＨＰＯ４二者做 ＢＧＥ分析样品，结果
发现ｐＨ范围在９０～１００时，分离效果良好。然
后利用ＮａＨ２ＰＯ４，Ｎａ２ＨＰＯ４、硼酸和硼砂溶液及其中
任意二者的混合溶液作 ＢＥＧ分离时，发现以 ８０
ｍｍｏｌ·Ｌ－１硼酸１５ｍｍｏｌ·Ｌ－１硼砂作 ＢＧＥ时，分
离效果明显改善。后又综合考虑加入添加剂甲醇、
乙醇等和表面活性剂 ＳＤＳ，对分离效果有一定的帮
助，但会造成背景吸收过高，基线不稳和出峰延迟的
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现象。故而采取８０ｍｍｏｌ·Ｌ－１硼酸１５ｍｍｏｌ·Ｌ－１
硼砂作ＢＧＥ。
３．３ ｐＨ值的考察 随 ｐＨ的增加，出峰时间后移。
通过将上述ＢＧＥ分别在ｐＨ８６，９０，９３，９５，９７，
９９，１０１，１１时进行分离效果比较，以 ｐＨ９７时各
峰分离效果最为理想。此外还考察了 ＮａＯＨ和
ＫＯＨ二者的影响，发现用 ＫＯＨ得出的图谱基线更
平且杂峰影响更少。
３．４ 电压、温度及检测波长的优化 电压加大时，
出峰时间明显缩短，但电压过大时，分离效果降低。
考察电压分别为８，１２，１６，２０，２４和２８ｋＶ时的分离
效果，以１６ｋＶ分离效果最佳；温度升高，出峰时间
加快，但温度太高会使谱带展宽变窄而影响分离效
果，温度为１６，２０，２３，２５，２７，３０，３５℃时，以２３℃效
果最佳。检测波长为 ２０１，２２８，２５４，２８０ｎｍ时，以
２０１ｎｍ测得各指纹峰信号较强且出峰数明显较多。
３．５ 试验结果表明 通过对１１批枳壳的测定分
析，发现其整体特征极其相似，标定了１３个共有峰，
共有峰面积之和大于总峰面积的 ９０％，相似度在
０９７～０９９，表明各产地和品种枳壳药材之间虽然
存在差异，但同时具有较好的相关性，这与作者所获
得的高效液相指纹图谱的结果相一致。
［参考文献］
［１］ 孙星衍，孙冯翼．神农本草经．第２卷［Ｍ］．北京：商务印书馆，
１９８４：８０．
［２］ 胡世林．中国道地药材［Ｍ］．哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，
１９８９：７．
［３］ 孙国祥，慕善学，侯志飞，等．大青叶的毛细管电泳指纹图谱研
究［Ｊ］．分析化学，２００５，３３（６）：８５３．
［４］ 陈 义．毛细管电泳技术及应用［Ｍ］．２版．北京：化学工业出
版社，２００６：４８．
ＳｔｕｄｙｏｎｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓｏｆＣｉｔｒｕｓａｕｒａｎｔｉｕｍｆｒｏｍｄｉｆｅｒｅｎｔｐｌａｃｅｓｂｙ
ｃａｐｉｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ
ＬＵＯＧｕａｎｇｍｉｎｇ，ＴＡＮＸｉａｏｈｕｉ，ＸＵＬｉｆａｎｇ，ＹＡＮＧＹａｑｉｎ，ＹＡＮＧＳｈｉｌｉｎ
（ＪｉａｎｇｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｎｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３０００４，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｃａｐｉｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｍｅｔｈｏｄｆｏｒＣｉｔｒｕｓａｕｒａｎｔｉｕｍｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓｔｏｃｏｎ
ｔｒｏｌｉｔｓｑｕａｌｉｔｙ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｂａｃｋｇｒｏｕｎｄｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ（ＢＧＥ）ｗａｓａｎ８０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｂｏｒｉｃａｃｉｄｓｏｌｕｔｉｏｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ１５ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｂｏ
ｒａｔｅ．ＴｈｅｐＨｏｆｔｈｅＢＧＥｗａｓａｄｊｕｓｔｅｄｔｏ９７０ｗｉｔｈＫＯＨｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ２０１ｎｍａｎｄａｖｏｌｔａｇｅｏｆ１６ｋＶｗａｓ
ａｐｐｌｉｅｄ．Ｔｈｅｓａｍｐｌｅｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃｉｎｊｅｃｔｉｏｎｗａｓ０４ｐｓｗｉｔｈａｄｕｒａｔｉｏｎｔｉｍｅｏｆ８ｓｅｃ．Ｃ．ａｕｒａｎｔｉｕｍｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙｗａｔｅｒａｎｄａｓｅｔ
ｏｆｃａｐｉｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ（ＣＥＦＰ）ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ１２ｃｏｐｏｓｓｅｓｓｉｎｇｐｅａｋｓｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｇｏｏｄｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ
ｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄＣＥＦＰａｎｄｅａｃｈｓｅｔｏｆＣＥＦＰｏｆＣ．ａｕｒａｎｔｉｕｍｃｏｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｅｌｅｖｅｎｄｉｆｅｒｅｎｔｐｌａｃｅｓ，ａｎｄｔｈｅｉｒｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｃｏｅｆｉ
ｃｉｅｎｔｓｗｅｒｅｂｅｔｗｅｅｎ０９７３ａｎｄ０９９６．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅＣＥＦＰｈａｓａｃｃｅｐｔａｂｌｅｐｒｅｃｉｓｉｏｎ，ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙａｎｄｓｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄｃａｎｂｅｕｓｅｄ
ｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＣ．ａｕｒａｎｔｉｕｍ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｃｉｔｒｕｓａｕｒａｎｔｉｕｍ；ｃａｐｉｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ；ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ；ｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌ
［责任编辑 王亚君
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