全 文 ：［１］ 许济群，王锦之．方剂学［Ｍ］．上海：上海科技出版社，１９９５：１２８．
［２］ 肖 娟，王秀兰，马 鹏．ＲＰＨＰＬＣ测定玉屏风颗粒中黄芪甲
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［３］ 陈恩瑜．ＨＰＬＣ法测定玉屏风口服液中升麻苷和５Ｏ甲基维阿
米醇苷含量［Ｊ］．海峡药学，２００４，１６（３）：８０．
［４］ 伍 毅，郑 国．ＨＰＬＣ测定复聪香液中黄芪甲苷的含量［Ｊ］．
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Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｎｏｎｅｐｏｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｇｒｏｕｐｆｒｏｍ
ＹｕｐｉｎｇｆｅｎｇｐｏｗｄｅｒｂｙＨＰＬＣ
ＹＡＮＧＫｅｄｉ，ＢＡＯＨｕｉｂｉｎ，ＬＩＨｏｎｇ，ＨＥＫａｉｐｅｎｇ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＧｕａｎｇｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ５３０００４，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｇｒｏｕｐ，ｉ．ｅ．，ｐｒｉｍｏｇｌｕｃｏｓｙｌｃｉｍｉｆｕｇｉｎ，ａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅ，ａｎｄ５ｏｍｅｔｈｙｌｖｉｓａｍｍｉｏ
ｓｏｄｅｆｒｏｍＹｕｐｉｎｇｆｅｎｇｐｏｗｄｅｒｗｉｔｈｏｎｅｐｏｔｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｉｎｔｈｉｓｗｏｒｋ．ＡＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｅａｃｈ
ａｃｔｉｖｅｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｍｅｎｔｉｏｎｅｄａｂｏｖｅｉｎｔｈｅｅｘｔｒａｃｔ．Ｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｔｉｍｅ，ｖｏｌｕｍｅｐｅｒｃｅｎｔｏｆｅｔｈａｎｏｌｉｎｗａｔｅｒ
ａｎｄｉｔｓａｍｏｕｎｔａｄｄｅｄｏｎｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｙｉｅｌｄｏｆａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｇｒｏｕｐｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔ．Ｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｒｅｓｕｌｔｓ
ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅａｓｆｏｌｏｗｓ：１ｇｏｆＹｕｐｉｎｇｆｅｎｇｐｏｗｄｅｒｗａｓｏｎｅｐｏｔｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｏｒ４ｈｏｕｒｓａｔ８０℃
ｗｉｔｈ９０％ ｅｔｈａｎｏｌａｓｓｏｌｖｅｎｔ，ａｎｄｔｈｅｙｉｅｌｄａｎｄｃｏｎｔｅｎｔｏｆａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｇｒｏｕｐｗｅｒｅ０１６％，０５３％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅ
ｄｉｅｎｔｇｒｏｕｐｉｎＹｕｐｉｎｇｆｅｎｇｐｏｗｄｅｒｃｏｕｌｄｂｅｅｆｅｃｔｉｖｅｌｙｏｎｅｐｏｔｅｘｔｒａｃｔｅｄｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｂｏｖｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＨＰＬＣ；Ｙｕｐｉｎｇｆｅｎｇｐｏｗｄｅｒ；ａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｇｒｏｕｐ；ｏｎｅｐｏｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
［责任编辑 鲍 雷］
［收稿日期］ ２００７００００
［通讯作者］ 李天傲，Ｔｅｌ：（０１０），Ｅｍａｉｌ：＠
蛇床子中５种成分的 ＨＰＬＣ测定法
翁德新１，李天傲
（１．浙江省德清县第三人民医院，浙江 德清 ３１３２０１；
２．浙江大学 城市学院 医学与生命科学院，杭州 ３１００１５）
［摘要］ 目的：建立对蛇床子药材中花椒毒素、异虎耳草素、香柑内酯、欧前胡素、蛇床子素进行同时测定的
ＲＰＨＰＬＣ法。方法：采用ＡｌｔｅｃｈＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相乙腈０１％醋酸水溶液，梯度洗脱，流
速：１ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长２４５，３２５ｎｍ；柱温为４０℃。结果：花椒毒素、异虎耳草素、香柑内酯、欧前胡素、蛇床子
素的线性范围分别为１～２０μｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０９９９９），１～２０μｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０９９９９），１～２０μｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０９９９
８），１００～１２００μｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０９９９７），１００～２０００μｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０９９９９），回收率均大于９５％。结论：本法简便、
准确、重现性好，适用于蛇床子中５种成分的同时测定。
［关键词］ ＲＰＨＰＬＣ；蛇床子；花椒毒素；异虎耳草素；香柑内酯；欧前胡素；蛇床子素；含量测定
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）１８１８８３０３
蛇床子为伞形科蛇床属植物蛇床子 Ｃｎｉｄｉｕｍ
ｍｏｎｎｉｅｒｉ（Ｌ．）Ｃｕｓｓ．的成熟果实，具有温肾壮阳、祛
风湿燥、杀虫止痒之功效。蛇床子主要含蛇床子素
（ｏｓｔｈｏｌｅ）、香柑内酯 （ｂｅｒｇａｐｔｅｎ）、异虎耳草素
（ｉｓｏｐｉｍｐｉｎｅｌｉｎ）、花椒毒素（ｘａｎｔｈｏｔｏｘｉｎ）、欧前胡素
（ｉｍｐｅｒａｔｏｒｉｎ）等具有生物活性的香豆素类化合物。
现代药理学研究表明，蛇床子中香豆素类成分在抗
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第３２卷第１８期
２００７年９月
中 国 中 药 杂 志
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心律失常、抗骨质疏松、抗艾滋病、抗真菌、抗肿瘤及
抗诱变等方面均有作用［１，２］。已有报道对蛇床子中
蛇床子素和欧前胡素测定［３］，但对以上５种香豆素
类成分的同时测定方法并未见报道。本实验采用
ＲＰＨＰＬＣ法，使用梯度洗脱和变换波长检测，对蛇
床子中５种香豆素类成分首次进行同时测定，方法
简便，灵敏度高，重复性好。
１ 仪器与试药
岛津 ＬＣ－１０ＡＤＶＰ高效液相色谱仪，岛津
ＳＰＤ－１０ＡＶＰ紫外检测器，浙江大学 Ｎ２０００色谱工
作站。
蛇床子素（０８２２２００００３）和欧前胡素（１１０８２６
２００３０８）对照品由中国药品生物制品检定所提供；
异虎耳草素和香柑内酯对照品（自制，经质谱和
ＮＭＲ确证结构，经ＨＰＬＣ测定纯度达到９８％以上）；
花椒毒素对照品（西格玛公司，批号９５５５０）。蛇床
子药材购于河北省药材市场，经中国药科大学宋学
华教授鉴定为正品。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 色谱柱 ＡｌｔｅｃｈＣ１８柱（４６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相 Ａ乙腈；Ｂ．０１％ 醋酸水溶
液；流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１。流动相 Ｂ梯度０～１５ｍｉｎ，
７７％～５０％；１５～３０ｍｉｎ，５０％ ～０％；３０～４０ｍｉｎ，
０％。检测波长：０～２６ｍｉｎ（２４５ｎｍ），２６～３０ｍｉｎ
（３２５ｎｍ），３０～４０ｍｉｎ（２４５ｎｍ）；柱温４０℃，进样量
２０μＬ。
２．２ 对照品溶液的制备 分别取花椒毒素、异虎耳
草素、香柑内酯、欧前胡素、蛇床子素对照品适量，精
密称定，用甲醇配成分别为１０，１０，１０，６００，１０００μｇ
·ｍＬ－１的对照品溶液。
２．３ 供试品溶液的制备 取蛇床子药材粉末（过３
号筛）约３０ｇ，精密称定，置５０ｍＬ具塞锥形瓶中，
精密加入７０％乙醇１５ｍＬ，密塞，称重，摇匀，超声处
理１ｈ，放冷，滤过，收集滤液，同法操作２次，合并滤
液，置５０ｍＬ量瓶中，以７０％乙醇定容，摇匀，用微
孔滤膜（０４５μｍ）滤过，作为供试品溶液。
２．４ 线性关系考察 取各对照品储备液，分别按适
当比例以７０％乙醇稀释至不同浓度的对照品溶液，
按上述色谱条件进行测定，以各对照品的峰面积作
纵坐标，浓度作横坐标，得线性方程，结果表明各组
分线性良好，见表１。
２．５ 精密度试验 取混合对照品溶液，连续进样６
次，每次２０μＬ，记录峰面积，结果表明５种组分峰
面积的 ＲＳＤ分别为 １３％，２２％，１５％，２５％，
０９％。
表１ ５种组分的线性方程
成分 线性方程 ｒ
线性范围
／μｇ·ｍＬ－１
花椒毒素 Ｙ＝７８２×１０３Ｃ＋１６０ ０９９９９ １～２０
异虎耳草素 Ｙ＝６５３×１０３Ｃ－６５２ ０９９９９ １～２０
香柑内酯 Ｙ＝５０２×１０３Ｃ－１９５２ ０９９９８ １～２０
欧前胡素 Ｙ＝１６２×１０３Ｃ－７５６ ０９９９７ １００～１２００
蛇床子素 Ｙ＝０４２×１０３Ｃ＋１２ ０９９９９ １００～２０００
２．６ 稳定性试验 取蛇床子供试品溶液按上述色
谱条件分别于０，１，２，４，８，１２ｈ进样分析，记录色谱
峰面积，５个组分峰面积 ＲＳＤ为 ２１％，２４％，
１５％，２７％，１８％，结果表明样品溶液在１２ｈ内
稳定性良好。
２．７ 重复性试验 精密称取同一批号蛇床子粉末
６份，按２．３项下方法制备后，在上述色谱条件下进
行分析，计算 ５种组分的含量，其 ＲＳＤ分别为
２２％，２６％，２１％，２２％，１９％，结果表明方法重
复性良好。
２．８ 加样回收率试验 精密称取已知含量的蛇床
子样品６份，分别精密加入各对照品适量，按２．３项
下方法制备后，在上述色谱条件下进行分析，分别测
得花椒毒素、异虎耳草素、香柑内酯、欧前胡素、蛇床
子素的平均回收率为 １０２７％，１０２５％，１００８％，
９６０％，９８２％，表明各组分回收率良好。
２．９ 含量测定 取３批蛇床子药材，按２．３项下制
成供试品溶液，按上述色谱条件进行分析，记录色谱
图（图１）。分别计算５种成分的含量，测定结果见
表２（ｍｇ·ｇ－１）。
表２ 蛇床子中５种成分的质量分数
批号 花椒毒素 异虎耳草素 香柑内酯 欧前胡素 蛇床子素
１ ０２３８ ０１７９ ０３４６ １３３ ２７４５
２ ０２４１ ０１６９ ０３５０ １３５ ２７６０
３ ０２４３ ０１７８ ０３４４ １３６ ２７７０
３ 讨论
３．１ 提取溶剂的考察 分别考察了水、稀乙醇、
７０％乙醇、９５％乙醇和无水乙醇超声提取。结果表
明，水提取效率很低，稀乙醇提取效率与７０％乙醇
相比略低，７０％乙醇、９５％乙醇和无水乙醇提取基本
相同，考虑到含醇量越高，提取出叶绿素越多，为了
保护色谱柱，本实验采用７０％乙醇作提取溶剂。考
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图１ 对照品（Ａ）及蛇床子药材（Ｂ）ＨＰＬＣ图
１．花椒毒素；２．异虎耳草素；３．香柑内酯；
４．欧前胡素；５．蛇床子素
察了提取次数的影响，结果表明，提取３次能将这５
种香豆素提取完全。
３．２ 波长选择 在２００～４００ｎｍ进行紫外扫描，表
明５种成分的最大吸收波长不等。例如，蛇床子素
在２０８，３２２ｎｍ处有最大吸收，欧前胡素在 ２１９，
２４９，３０２ｎｍ处有最大吸收。为了同时进行含量测
定且不降低检测灵敏度，采用了变换波长检测的方
法，分别使其在最大吸收波长附近进行检测。实验
表明变换波长并未对基线造成干扰。
３．３ 流动相选择 由于待测成分结构上的差异，如
果采用等度洗脱，５种成分分离欠佳，而选择梯度洗
脱，既提高了分离度，又节省了出峰时间。流动相中
加入一定比例的冰醋酸，有助于改善峰形和分离状
况。
［参考文献］
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２００３，２６（２）：１４１．
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子素和欧前胡含量［Ｊ］．沈阳药科大学学报，２００４，２１（５）：２０１．
Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ５ａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎ
ｆｒｕｃｔｕｓｃｎｉｄｉｂｙＨＰＬＣ
ＷＥＮＧＤｅｘｉｎ１，ＬＩＴｉａｎａｏ
（１．ＺｈｅｊｉａｎｇＤｅｑｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌＮｏ．３，３１３２０１，Ｃｈｉｎａ；
２．ＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＣｉｔｙＣｏｌｅｇｅ，３１００１５，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａｎＲＰＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ５ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎＦｒｕｃｔｕｓＣｎｉｄｉ．
Ｍｅｔｈｏｄ：ＡｎａｌｙｓｉｓｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａｎＡｌｔｅｃｈＣ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ｃｏｌｕｍｎ．Ｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ：ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅｗａｔｅｒａｃｅｔｉｃ
ａｃｉｄ，ｇｒａｄｉｅｎｔ．Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１ｍＬ·ｍｉｎ－１．Ｔｈｅｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ３２５ｎｍａｎｄ２４５ｎｍ．Ｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ４０
℃．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｌｉｎｅａｒｒｅｓｐｏｎｓｅｒａｎｇｅｓｗｅｒｅ１２０μｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０９９９９）ｆｏｒｘａｎｔｈｏｔｏｘｉｎ，１２０μｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０９９９９）ｆｏｒ
ｉｓｏｐｉｍｐｉｎｅｌｉｎ，１１２０μｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０９９９８）ｆｏｒｂｅｒｇａｐｔｅｎ，１００１２００μｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０９９９７）ｆｏｒｉｍｐｅｒａｔｏｒｉｎ，１００２０００μｇ·
ｍＬ－１（ｒ＝０．９９９９）ｆｏｒｏｓｔｈｏｌｅ．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｗａｓａｌａｂｏｖｅ９５％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄａｃｃｕ
ｒａｔｅｗｉｔｈｇｏｏｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＲＰＨＰＬＣ；ＦｒｕｃｔｕｓＣｎｉｄｉ；ｘａｎｔｈｏｔｏｘｉｎ；ｉｓｏｐｉｍｐｉｎｅｌｉｎ；ｂｅｒｇａｐｔｅｎ；ｂｍｐｅｒａｔｏｒｉｎ；ｏｓｔｈｏｌｅ
［责任编辑 李 禾］
·５８８１·
第３２卷第１８期
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ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
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Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００７