全 文 ：(t. ∆επαρτµ εντ οφ Πηαρµ αχευτιχσ, Ωειφανγ ΜεδιχαλΥνιϖερσιτψ, Ωειφανγ uytswu, Χηινα;
u. ∆επαρτµ εντ οφ Πηαρµ αχψ, Ηυναν Χολλεγε οφ ΤραδιτιοναλΧηινεσε Μεδιχινε, Χηανγσηα wtssz, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼ ·«¨ µ¨ ¤¯·¬²± ¥¨ ·º¨¨ ± µ¨ ¤¯·¬√¨§¨ ±¶¬·¼ ¤±§®¬± °¨¤·¬¦¤¯ √¬¶¦²¶¬·¼ ²©·«¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ©²µ≠∏¬¬¤±2
¬¯±ªªµ¤±∏¯ ¶¨q Μετηοδ : ׫¨ µ¨ ¤¯·¬√¨§¨ ±¶¬·¼ ¤±§®¬± °¨¤·¬¦¤¯ √¬¶¦²¶¬·¼ ¥¼ ¤¯®¤¯¬¥∏µ¨·¨ ²©·«¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± º µ¨¨ ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨§q ׫¨ ¦²±2
± ¦¨·¬²± ¥¨ ·º¨¨ ± ®¬± °¨¤·¬¦¤¯ √¬¶¦²¶¬·¼ ¤±§¶³µ¤¼ §µ¼¬±ªo ¤¯¶²¤±§·¨°³¨ µ¤·∏µ¨ ²©·«¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± º¤¶µ¨¶³¨ ¦·¨§q ± ·«¨ ° ¤¨±·¬° o¨ §¬©2
©¨ µ¨±·°¤·«¨ °¤·¬¦¤¯ °²§¨ ¶¯º µ¨¨ ¶¬°∏¯¤·¨§q Ρ εσυλτ: ¬± °¨¤·¬¦¤¯ √¬¶¦²¶¬·¼ ¬¶¶∏¶¦¨³·¬¥¯¨·«¤± µ¨ ¤¯·¬√¨§¨ ±¶¬·¼ ·²·«¨ ©¨©¨¦·©²µ¶³µ¤¼ §µ2
¼¬±ªo ¤±§·«¨ °¤·«¨ °¤·¬¦¤¯ °²§¨ ¯¬¶¤¯¶² ¶¨·∏³¤¦¦²µ§¬±ª¯¼q ׫¨ µ¨¶∏¯·¦¤± ²©©¨µ·«¨ ³µ²³¨ µ¬±¯¨··¨°³¨ µ¤·∏µ¨ ¤±§®¬± °¨¤·¬¦¤¯ √¬¶¦²¶¬·¼
©²µ¶³µ¤¼ §µ¼¬±ªq Χονχλυσιον: ׫¨ ° ·¨«²§¬± ·«¨ ¬¨³¨ µ¬° ±¨·¬¶¶¬°³¯ o¨ ³µ¤¦·¬¦¤¯ ¤±§°¤±¬³∏¯¤·¨ ¤¨¶¬¯¼q ׫¨ ¶·∏§¼ º¬¯¯ ³µ²√¬§¨ ·«¨ ¥¤2
¶¬¶©²µ ¬¨·µ¤¦·¨§¶²¯∏·¬²± ²©¦²°³µ¨¶¶¬²± ¤±§¶³µ¤¼ §µ¼¬±ªq
[ Κεψ ωορδσ] ≠∏¬¬¤± ¬¯±ªªµ¤±∏¯ ¶¨~ µ¨ ¤¯·¬√¨§¨ ±¶¬·¼~ √¬¶¦²¶¬·¼~ ®¬± °¨¤·¬¦¤¯ √¬¶¦²¶¬·¼~ °¤·«¨ °¤·¬¦¤¯ °²§¨ ¯
≈责任编辑 鲍 雷
金银花提取液中绿原酸的快速定量
李 娜 o高晓燕 o范 强 o乔延江 3
k北京中医药大学 中药学院 o北京 tsstsul
≈摘要 目的 }建立金银花提取液中绿原酸的快速含量测定方法 ∀方法 }采用反相高效液相色谱法测定金银
花提取液中绿原酸的含量 o同时测定样品的紫外光谱 o选择和高效液相测得绿原酸含量相关性最佳的波长点 o建立
绿原酸含量的紫外预测方程 o并另取 tt批金银花提取液对预测方程进行检验 ∀结果 }高效液相色谱法测定绿原酸
在 s1s| ∗ u1ux Λª线性关系良好 ~加样回收率为 tss1wh o精密度为 t1th kν xl∀紫外光谱中和绿原酸含量相关
性最佳的波长点为 u|w ±°o绿原酸质量浓度 kΧo°ª# °pt l与 u|w ±°下的吸光度 kΑl相关方程 Χ u1zsv wuxΑ p
s1tu| t{kρ s1||u |oν t|l~绿原酸含量测定值和预测值之间具有良好的相关性 kρ s1||x uoν ttlo方法精密
度为 s1uh kν yl∀结论 }该方法检测金银花提取液中绿原酸含量简捷 o快速 o准确 o可用于金银花提取液的快速
质量控制 ∀
≈关键词 金银花提取液 ~绿原酸 ~高效液相色谱 ~紫外光谱
≈中图分类号 u{wqt ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusszlsw2svtu2sv
≈收稿日期 ussx2s|2uu
≈基金项目 北京市科委项目 ksvsuvstzstvsl
≈通讯作者 3 乔延江 oר¯}kstsl{wzv{ysto∞2°¤¬¯}¼´¬¤²
uyvq± ·¨
清开灵注射液处方由胆酸 !黄芩苷和金银花等
{味药组成 ∀其中金银花为忍冬科植物忍冬 Λονιχε2
ρα ϕαπονιχα ׫∏±¥q的干燥花蕾或带初开的花 o具有
清热解毒 !凉散风热之功效 ≈t o在清开灵注射液的
生产过程中以药材水提取液的形式入药 o据报道其
主要有效成分为绿原酸 ≈u ∀本研究建立了金银花
提取液中绿原酸含量的 ∂快速测定方法 o经 °≤
检验 o该方法准确 !快速 !方便 o可用于清开灵注射液
生产过程中金银花提取液的在线质量控制 ∀
1 仪器与试药
ª¬¯¨ ±·ttss高效液相色谱仪 }四元泵 !真空脱
气泵 !自动进样器 !柱温箱 !⁄⁄二极管阵列检测
器 !°数据处理工作站 ∀ ° p {wxv紫外 2可见分光
光度仪 ∀
绿原酸对照品购自中国药品生物制品检定所
k批号 ttszxv2ussutul~配制清开灵注射液的金银
花提取液由指定药厂提供 ∀甲醇为色谱纯 o购自
ƒ¬¶«¨ µ公司 o甲酸为分析纯 o购自北京化学试剂厂 o
水为去离子水 ∀
2 方法与结果
2q1 高效液相色谱法
2q1q1 色谱条件 ª¬¯¨ ±·
÷ ≥
2≤t{色谱柱
#utv#
第 vu卷第 w期
ussz年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ w
ƒ ¥¨µ∏¤µ¼o ussz
kw1y °° ≅ uxs °°ox Λ°l~流动相甲醇 2水 2甲酸
kusΒ{sΒs1s{l~流速 t1s °# °¬±pt ~检测波长 vvs
±°~柱温 vs ε ∀
2q1q2 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照
品 w1x °ª置于 ux °的量瓶中 o用水溶解并稀释至
刻度 o摇匀 o备用 ∀
2q1q3 供试品溶液的制备 精密移取药厂生产线
提供的金银花提取液 o用水稀释至 uxsoxssot sss
倍 ∀
2q1q4 线性关系考察 精密移取绿原酸储备液 o用
水稀释至 s1swx °ª# °pt ∀依次进样 uowo{otxo
uxovxoxs Λo按上述色谱条件测定峰面积 ∀以峰面
积 Ψ对进样量 Ξ k Λªl算得回归方程为 Ψ
u uxy1zzΞ nu1uuoρ s1||| |kν zl∀结果表明在
s1s| ∗ u1ux Λª具有较好的线性关系 ∀
2q1q5 精密度试验 精密移取绿原酸储备液 o用水
稀释至 s1swx °ª# °pt ∀重复进样 x次 o每次 xs
Λo按上述色谱条件测定绿原酸峰面积 o ≥⁄为
t1th kν xl∀
2q1q6 重复性试验 取金银花液样品 y份 k批号
xttxlo用水稀释 xss倍 o依次进样 xs Λo按上述色
谱条件测定绿原酸峰面积 o ≥⁄为 t1wh kν yl∀
2q1q7 稳定性试验 取稀释 xss倍的金银花液 k批
号 xttxlo每隔 u «连续进样 uw «o每次进样 xs Λo
按上述色谱条件测定绿原酸峰面积 o结果表明该溶
液在 uw «内是稳定的 o ≥⁄ t1{h kν {l∀
2q1q8 加样回收率试验 取 y份已知含量的金银
花液 k含绿原酸 u1{w °ª# °pt lts °于 ux °量
瓶中 o分别加入 u1x °ª# °pt绿原酸溶液 ts °o
加水稀释至刻度 o按 2q1q5项下方法制备 y份供试品
溶液 o按上述色谱条件测定 o计算回收率 o结果平均
回收率为 tss1wh kν yl∀
2q1q9 样品的测定 取药厂提供的金银花液 o按
2q1q2项下方法制备成供试品溶液 o每次进样 xs
Λo计算含量 ∀测定结果见图 t∀
2q2 紫外光谱法
2q2q1 样品制备与测试条件 精密吸取药厂生产
线提供的金银花提取液 o用水稀释至 uxsoxssot sss
倍 ∀扫描波长 t|s ∗ wss ±°o采样间隔 t ±°∀以水
为参比进行 ∂光谱测定 ∀
2q2q2 测定结果分析 对 t|批金银花液进行了不
同稀释倍数的 ∂ 光谱测定 o发现各批次稀释 xss
图 t 金银花提取液 °≤图
q对照品 ~
q提取液 ~ tq绿原酸
倍时 ∂光谱吸光度范围是 s1u ∗ t1wo适合准确定
量 o因此选择稀释 xss倍的金银花液的 ∂ 光谱进
行绿原酸含量相关分析的研究 ∀绿原酸与金银花液
∂光谱见图 u和图 v∀对金银花液 ∂光谱上每隔
t ±°的吸光度值和 °≤测得的同一样品溶液中
的绿原酸的含量进行相关性分析 o结果如图 w所示 o
发现在很多波长下的 ∂测试结果与绿原酸含量呈
较好的线性关系 o综合分析确定波长为 u|w ±°o得
到绿原酸含量 kΧl的 ∂法预测方程 }绿原酸含量 Χ
k°ª# °pt l u1zsv wuxΑu|w ±° p s1tu| t{o ρ
s1||u |kν t|l∀
图 u 绿原酸的 ∂图 ks1ssz °ª# °pt l
图 v 金银花提取液稀释 xss倍的 ∂图
2q2q3 精密度试验 取批号 xtutsz的金银花液 o
稀释 xss倍 o于 u|w ±°处连续 y次重复测定 o将结
果代入 ∂预测方程 o计算绿原酸含量 o ≥⁄ s1sxh
kν yl∀
2q2q4 重复性试验 取 xtutsz批金银花液 o制备
y份稀释 xss倍的供试品溶液 o于 u|w ±°处测定 o
计算绿原酸含量 o ≥⁄ s1ush kν yl∀
#vtv#
第 vu卷第 w期
ussz年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ w
ƒ ¥¨µ∏¤µ¼o ussz
图 w 金银花液中绿原酸含量 k °≤测得 l
和 ∂光谱吸光度值之间相关系数 2波长图
2q2q5 稳定性试验 取批号 xtutsz的金银花液 o稀释
xss倍 o在室温条件下放置 sovoyo|otuouw «后 o于 u|w
±°处测定 o得绿原酸含量 o ≥⁄ t1uth kν yl∀
2q2q6 ∂法测定绿原酸含量结果检验 另取 tt
批金银花液 o分别用 °≤和 ∂ 方法进行绿原酸
含量测定 o结果见表 t∀表中数据表明 o∂方法测
定结果同 °≤测定结果具有较好的一致性 o并且
同时具有快速 !简便的特点 ∀
3 讨论
对金银花及其成方制剂中绿原酸的含量测定有
多种方法 o应用紫外分光光度法对金银花中绿原酸
进行定量主要有 u种方法 o包括在样品中加入弱碱 o
使峰红移而后测定 ≈v o或者直接测定了金银花中的
绿原酸和异绿原酸的加合含量 ≈w ∀以上方法不但
实验步骤繁琐 o而且均不能实现绿原酸的快速定量 ∀
本研究采用 °≤和 ∂ 法进行相关分析 o建立了
表 t ∂方法与 °≤绿原酸测定结果比较
批号
绿原酸 k°≤l
r°ª# °pt
绿原酸 k∂ l
r°ª# °pt
偏差 ρ
xtttsw u1uz u1vy s1s| s1||x u
xttusw t1xy t1xs p s1sy
xttusx s1{z s1z| p s1s{
xttvsw u1vz u1uz p s1ts
xttwsw s1zv s1yz p s1sy
xttwsy t1sv t1ts s1sz
xttxsw u1tt u1us s1s|
xtt{sw t1xx t1yv s1s{
xtt{sy u1vt u1wt s1ts
xtt|sw u1yx u1yy s1st
xtuus| u1zx u1{y s1tt
绿原酸的快速预测方程 o通过测定金银花提取液在
u|w ±°下的吸光度直接预测绿原酸的含量 o结果表
明 o该方法简便 !快速 !准确 o可实现在线检测 ∀同
时 o这种对不同分析测试方法进行相关分析的思路
也为中药生产的在线指标成分定量提供了借鉴 ∀
≈参考文献
≈t 中国药典 ≈≥ q一部 qussx}txuq
≈u 尉 芹 o马希汉 q绿原酸及其提取分离方法评述 ≈ q中成药 o
usstouvkul}tvyq
≈v 李 宗 o缪建泉 q差示分光光度法测定金银花和成药百毒灵中
绿原酸类成分的总含量 ≈ q海峡药学 ot||zo|kul}yq
≈w 钟方晓 q高效液相及紫外分光光度法测定金银花中绿原酸和异
绿原酸含量方法学比较 ≈ q时珍国医国药 oussxotykvl}utuq
Ρ απιδ δετερµ ινατιον οφ χηλορογενιχ αχιδ
ιν αθυεουσσολυτιον οφΦλοσΛονιχεραε ϑαπονιχαε εξτραχτιον
¤o ÷¬¤²2¼¤±o ƒ ±¬¤±ªo ± ≠ ¤±2¬¤±ª
(Βειϕινγ Υνιϖερσιτψ οφ Χηινεσε Μεδιχινε, ΣχηοολοφΧηινεσε Πηαρµ αχψ, Βειϕινγ tsstsu, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶¨·¤¥¯¬¶«¤µ¤³¬§° ·¨«²§©²µ·«¨ §¨ ·¨µ°¬±¤·¬²± ²©¦«¯²µ²ª¨ ±¬¦¤¦¬§¬± ¤´ ∏¨ ²∏¶¶²¯∏·¬²± ²©ƒ ²¯¶²±¬¦¨µ¤¨ ¤2
³²±¬¦¤¨ ¬¨·µ¤¦·¬²±q Μετηοδ: ≤«¯²µ²ª¨ ±¬¦¤¦¬§¦²±·¨±·¬± ¤´ ∏¨ ²∏¶¶²¯∏·¬²± ²©ƒ ²¯¶²±¬¦¨µ¤¨ ¤³²±¬¦¤¨ ¬¨·µ¤¦·¬²± º¤¶° ¤¨¶∏µ¨§¥¼ °2°≤q
׫¨ ∂ ¶³¨ ¦·µ∏° ²©·«¨ ¶¤°¨¶¤°³¯ ¶¨º µ¨¨ ¶¦¤±±¨ §¶¬°∏¯·¤±¨ ²∏¶¯¼q ׫¨ º¤√¨¯ ±¨ª·«²©·«¨ ¥¨ ¶·¦²µµ¨ ¤¯·¬²± ¥¨·º¨¨ ± ∂ ¤¥¶²µ¥¤±¦¨ ¤±§¦«¯²2
µ²ª¨±¬¦¤¦¬§¦²±·¨±·§¨ ·¨µ°¬±¨ §¥¼ °≤ º¤¶¦«²¶¨± ¤±§·«¨ ¦«¯²µ²ª¨ ±¬¦¤¦¬§¦²±·¨±·²©¤´ ∏¨ ²∏¶¶²¯∏·¬²± ²©ƒ ²¯¶²±¬¦¨µ¤¨ ¤³²±¬¦¤¨ ¬¨·µ¤¦2
·¬²± º¤¶ ¶¨·¬°¤·¨§¥¼ ³µ¨§¬¦·¬²± ¨´ ∏¤·¬²±q ·«¨ µts ¥¤·¦«¨ ¶²©¤´ ∏¨ ²∏¶¶²¯∏·¬²± ²©ƒ ²¯¶²±¬¦¨µ¤¨ ¤³²±¬¦¤¨ ¬¨·µ¤¦·¬²± º¤¶∏¶¨§©²µ·¨¶·¬±ª·«¨
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∂ ¶³¨ ¦·µ∏° ¦²µµ¨ ¤¯·¬±ªº¬·«¦«¯²µ²ª¨ ±¬¦¤¦¬§¦²±·¨±·º¤¶u|w ±°q ׫¨ ³µ¨§¬¦·¬²± ¨´ ∏¤·¬²±} ¦«¯²µ²ª¨ ±¬¦¤¦¬§¦²±·¨±·Χ u1zsv wuxΑu|w ±° p
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·«¨ µ¤³¬§¦²±·µ²¯ ²©¤´ ∏¨ ²∏¶¶²¯∏·¬²± ²©ƒ ²¯¶²±¬¦¨µ¤¨ ¤³²±¬¦¤¨ ¬¨·µ¤¦·¬²±q
[ Κεψ ωορδσ] ¤´ ∏¨ ²∏¶¶²¯∏·¬²± ²©ƒ ²¯¶²±¬¦¨µ¤¨ ¤³²±¬¦¤¨ ¬¨·µ¤¦·¬²±~ ¦«¯²µ²ª¨±¬¦¤¦¬§~ °≤~ ∂ ¶³¨ ¦·µ∏°
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第 vu卷第 w期
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