全 文 ：连翘的组织培养和连翘苷形成的研究
刘幼琪 o汤行春
k湖北大学 生命科学学院 o湖北 武汉 wvssyul
≈摘要  目的 }研究影响连翘愈伤组织生长和连翘苷生物合成的培养条件 ∀方法 }选用不同的培养基和不同
的光照条件 o测定愈伤组织生长干重和连翘苷含量 ∀结果和结论 }连翘细胞生长周期为 u{ §o采用  ≥基本培养基 o
附加激素为 t °ª#p tu ow2⁄os qx °ª#p t Ž× os qx °ª#p ty2…„ o在光照条件下可有效促进细胞生长和连翘苷的生
物合成 ∀
≈关键词  连翘 ~愈伤组织培养 ~连翘苷
≈中图分类号  ≥ xyz ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvlsw2svut2sv
连翘作为传统中药 o早已收入我国药典 ∀目前
国内外学者对连翘的化学成分及其药理活性研究较
多 o已分离出萜类 !苷类 !木脂素类 !黄酮类 !苯乙醇
等化合物近百种 ∀根据药理实验 o从连翘中分离得
到的苯乙醇苷类具有较强的抗菌活性 o且对 ¦„  °
磷酸二酯酶活性有很强的抑制作用 ∀连翘在临床上
用于治疗急性肾炎 o紫癜病 o肺脓肿和视网膜出血等
症 o有较好疗效 ∀此外 o连翘还有抗糖尿病和抗流感
病毒作用 ∀根据市场调查 o近两年来 o连翘的需求量
不断上升 ∀大量采集 o必然破坏生态环境 o大量种
植 o势必占用有限的耕地资源 ∀因此 o利用组织培养
技术获得连翘次生代谢产物具有极其重要的意义 ∀
本研究意在探索连翘的组织培养的条件及其对连翘
细胞中连翘苷生成的影响 ∀
1 材料与方法
1 q1 培 养 材 料 连 翘 Φορσψτηια συσπενσα
k׫∏±¥ql ∂¤«¯ 采于湖北大学校园 ∀由湖北大学生
命科学学院王万贤教授鉴定 ∀当年生茎段流水洗净
后 o用 s qt h升汞浸泡 tx °¬±o无菌水漂洗 x次后 o
接种在愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导 ∀
在继代培养和增殖培养中 o得到了黄色和绿色两种
不同的愈伤组织细胞系 o经过检测 o其中黄色愈伤组
织中连翘苷含量较高 o因此 o以这种愈伤组织作为试
验材料 ∀
≈收稿日期  ussu2sy2us
≈基金项目  武汉市科委科技攻关项目k||usswyŠl
≈通讯作者  ר¯ }ksuzl{{yyv|z{
1 q2 培养条件 在愈伤组织诱导试验中 o除培养
基种类试验外 o所用的基本培养基均为  ≥培养基 ∀
除植物激素浓度试验外 o所附加的激素为 t qs °ª#
ptu ow2⁄os qx °ª#pt Ž× os qx °ª#pty2…„ o所有
培养基附加蔗糖v h o固体培养基中附加琼脂
s qyx h o³‹ x q{ o光照强度为 u sss ¬¯o光周期 tu «#
§p t o培养温度kux ? tl ε ∀
1 q3 愈伤组织系生长的测定 以每瓶愈伤组织的
干重表示培养过程中细胞生长的变化 o愈伤组织的
增长量 €收获量r瓶 p接种量r瓶 ~愈伤组织增长指
数 €愈伤组织增长量 ≅ tssr愈伤组织接种干重 ∀
1 q4 连翘苷含量测定 愈伤组织样品液的制备 }
鲜愈伤组织烘干后 o研细 !ws目筛网过筛 o精密称取
粉末 o置于 ≥²¬«¯ ·¨提取器中 o加入甲醇 zs °o恒温
水浴锅中 {s ε 热回流提取 y «∀旋转蒸发仪减压
浓缩 o甲醇定容 os qwx Λ°抗有机滤膜超滤 o制得愈
伤组织样品液 ∀连翘苷标准样品购于中国药品生物
制品检定所 ∀样品和对照品色谱图见图 t和图 u ∀
愈伤组织中连翘苷的测定用 ≥«¬°¤§½∏ ≤2y„
高效液相色谱仪 o¶«¬°¤§½∏≥°⁄2y„ 紫外检测器 o色
谱柱为 ≠ • Š≤t{柱kuxs °° ≅ w qy °° ots Λ°l ∀流
动相为甲醇2水kwxΒxxl o流速为 t qs °# °¬±p t o检
测波长为u{s±° ∀连翘苷的特征峰保留时间为
ts qu °¬±o根据峰面积计算出连翘苷的含量 o以每
克愈伤组织干重所含连翘苷的毫克数表示 ∀试验中
各处理的生长数据为 {个重复 o连翘苷含量为 v个
重复 ∀
#tuv#
第 u{卷第 w期
ussv年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o‘²qw
„³µqoussv
图 t 连翘苷标准品色谱图
t q³«¬¯¯¼µ¬± 图 u同
图 u 愈伤组织样品中连翘苷色谱图
1 q5 数据处理 各项检测数据用 ¬‘¬2× „…统计
软件统计处理 o组合间比较用 ≥• 测验 !τ测验及
相关分析 o数据以 ξ ? σ表示 ∀
2 结果与分析
2 q1 愈伤组织生长周期和连翘苷积累的变化 连翘
愈伤组织细胞系的生长曲线基本符合/ ≥0型曲线 o
愈伤组织培养 { §后进入对数生长期 ouv §后进入
静止期k图 vl ∀愈伤组织中连翘苷的积累量在培养
uv §左右达最高 ∀
图 v 连翘愈伤组织生长和连翘苷积累的变化
t q愈伤组织 u q连翘苷
2 q2 不同植物激素浓度组合对连翘愈伤组织生长
和连翘苷含量的影响 在试验中观察到不同的激
素和不同激素的组合对连翘愈伤组织生长和连翘苷
的积累有较大的影响 o各组合之间的差异是显著的
k见表 tl ∀特别是当 u ow2⁄的浓度增加到 t °ª#
pt时 o加上 y2…„ 和 Ž× 和协同作用 o对连翘愈伤
组织的生长和连翘苷的积累有极大的促进 o但是在
u ow2⁄的浓度增加到 x °ª#pt o则对愈伤组织的生
长和连翘苷的产量的增加产生不利的影响 ∀另外 o
细胞分裂素 y2…„的浓度也不宜过高 ∀
表 t 不同激素组合对连翘愈伤组织生长和连翘苷含量的影响
激素组合rp t
u ow2⁄ y2…„ Ž×
接种干重
r ª#p t
收获干重
r ª#p t
生长指数

连翘苷含量
r °ª#ªp t
s qt s qs s qx x qvt ? s qvy | qxs ? s qyv s qz| ? s qvw¤ u qt{w ? s qssv¤
t qs s qs s qx x quy ? s qwx tv qwy ? t qtx t qxy ? s qux¤¥ v qu|u ? s qsstw¤¥
x qs s qs s qx x qvx ? s qxt z qwv ? s qwt s qtx ? s quw¥ u qs|t ? s qssvx¥
s qt s qx s qx x qus ? s qu| tw qwy ? s qzt t qxx ? s qwy¤¥ u q|tu ? s qssu¥¦
t qs s qx s qx x qsx ? s qv{ uv q{{ ? t qz| v qzv ? s qvt¥¦ w qxxt ? s qssy¦
x qs s qx s qx x qt{ ? s qwv ts qtx ? t qsu s q|y ? s qu|¦ u qtvt ? s qssxy¦§
s qt u qs s qx x q{| ? s qwy z qsz ? t qsu s q|u ? s qx|¦ u q|tw ? s qssyu§
t qs u qs s qx x qxt ? s qu{ tt qt| ? s qyt t qsv ? s qty¦§ v qxzv ? s qssvt§¨
x qs u qs s qx x qs| ? s quz { qs| ? s qvy s qx| ? s qvx§ t q|zx ? s qssx¥
注 }有相同字母的数据之间差异不显著
2 q3 不同培养基对连翘愈伤组织的生长和连翘苷 的含量的影响 由愈伤组织的生长指数和连翘苷
#uuv#
第 u{卷第 w期
ussv年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o‘²qw
„³µqoussv
含量的检测k见表 ul可以看出 o ≥培养基的效果比 较好 ∀
表 u 不同培养基对连翘愈伤组织的生长和连翘苷的含量的影响
培养基种类 接种干重r ª#p t 收获干重r ª#p t 生长指数 连翘苷含量r °ª#ªp t
 ≥ x qs{ ? s qxt uv qyu ? s qtz v qyx ? s qvx v q|v| ? s qsst{
…x x qv| ? s qyt tt qyw ? t qvy t qty ? s qs| u quwz ? s qssty
‘y x qxz ? s qu| ts q|z ? s qyt s q|z ? s qtx u qvst ? s qssxz
⁄≤ • x quv ? s qvz tu qs{ ? s q|{ t qvt ? s qvw u quy{ ? s qsstu
2 q4 光照条件对连翘愈伤组织生长和连翘苷含量
的影响 通过光照和黑暗条件的对比实验 o结果表
明k见表 vl }光照条件下愈伤组织的细胞生长量和
连翘苷的含量都比黑暗条件下明显增高 ∀
表 v 光照条件对连翘愈伤组织生长和连翘苷含量变化的影响
光照条件 接种干重r ª#p t 收获干重r ª#p t 生长指数 连翘苷含量r °ª#ªp t
光照 x qy{ ? s qxz uy qz| ? s qt| w qzu ? s q{t x qst ? s qssy
黑暗 w q|x ? s qzt t| qwt ? t qst u q|u ? s quw v qww ? s qsstv
3 结论
3 q1 连翘愈伤组织生长周期较长 o为 u{ §∀在整个
生长周期中 o细胞的生长量和连翘苷产量的增长呈
平行关系 ∀
3 q2 在进行连翘愈伤组织的培养时 o采用  ≥培养
基效果最好 o在培养基中添加t qs °ª#ptu ow2⁄o
s qx °ª#pty2…„和 s qx °ª#ptŽ× 有利于愈伤组
织的生长和连翘苷的积累 ∀
3 q3 虽然连翘愈伤组织在黑暗条件下也能生长 o但
光照能促进细胞的生长和连翘苷的形成 ∀
≈参考文献 
≈t  崔燕岩 o冯少勇 o赵 光 o等 q连翘有效成分的 ‹°≤ 法测定 q
药学学报 ot||u ouzk|l }ysv q
≈u  汤行春 o刘幼琪 q连翘组织培养 Œ愈伤组织的诱导和培养条件
的优化 q湖北大学学报 ousss ouukul }t{x q
≈v  ‘¬¶«¬¥¨ ≥ o ’®¤¥¨ Žo ׶∏®¤°²·² ‹ o ·¨¤¯ q ׫¨ ≥·µ∏¦·∏µ¨ ²©
ƒ²µ¶¼·«¬¤¶¬§¨ Œ¶²¯¤·¨§ ©µ²° Φορσψτηια συσπενσα . ≤«¨ ° °«¤µ°
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≈w  Ž¬·¤ª¤º¤ ≥ o ‘¬¶«¬¥¨ ≥ o …¨ ±¨ ¦®¨ • o ·¨¤¯ q °«¬±²¯¬¦≤²°³²∏±§¶
©µ²° ƒ²µ¶¼·«¬¤ ¨¤√ ¶¨ ŒŒq ≤«¨ ° °«¤µ° …∏¯¯o t|{{ o vy k|l }
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≤ o ׫µ¨¨ Š¯ ∏¦²¶¬§¨ ²© Φορσψτηια συσπενσα ƒµ∏¬·¶q °«¼·²¦«¨ °2
¬¶·µ¼ ot|{| ou{kxl }tw|x q
Στυδιεσ ον Χαλλυσ Γροωτη ανδ Πηιλλψριν Αχχυµ υλατιον
οφ Φορσψτηια συσπενσα
Œ˜ ≠²∏2 ¬´o × „‘Š ÷¬±ª2¦«∏±o≤ „Œ ⁄¨ 2·¬¤±
k≥¦«²²¯ ²© ¬©¨ ≥¦¬¨±¦¨ o ‹∏¥¨¬˜±¬√ µ¨¶¬·¼ o • ∏«¤± wvssyu o‹∏¥¨¬o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨ ·«¨ ©¨©¨ ¦·¶²©³«¼¶¬¦¤¯ ¤±§¦«¨ °¬¦¤¯ ©¤¦·²µ¶²±¦¤¯ ∏¯¶ªµ²º·«¤±§³«¬¯¯¼µ¬±¦²±·¨±·¶²© Φ.
συσπενσα . Μετηοδ : × «¨ ¦¨¯¯ ªµ²º·«¬±§¨ ¬¤±§³«¼¯ ¬¯µ¬± ¼¬¨ §¯¬± §¬©©¨ µ¨±·¦∏¯·∏µ¨ ¦²±§¬·¬²± ¶∏¦«¤¶§¬©©¨ µ¨±·³¯¤±·«²µ°²±¨ ¶ °¬¬¨ §o
° §¨¬∏°¶o ¬¯ª«·¤±§§¤µ® º µ¨¨ ¦²°³¤µ¨§q ‹°≤ º¤¶∏¶¨§·² ¬¨¤°¬±¨ ³«¬¯¯¼µ¬± ¦²±·¨±·¶q Ρεσυλτ ανδ Χονχλυσιον : Šµ²º·«¦¼¦¯¨²©
¦¨¯¯¶¬¶·º ±¨·¼2 ¬¨ª«·§¤¼¶q ⁄∏µ¬±ª·«¨ ¦²∏µ¶¨ ²© ¦¤¯ ∏¯¶ªµ²º·«o·«¨ ³µ²¦¨¶¶¨¶²© ³«¬¯¯¼µ¬± ¥¬²¶¼±·«¨¶¬¶ º µ¨¨ ³¤µ¤¯¯¨¯ º¬·«·«¨ ¦¨¯¯
ªµ²º·«q× «¨ ²³·¬°∏° ° §¨¬∏°¬¶  ≥ q× «¨ ²³·¬°∏° «²µ°²±¨ ¶¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¶¤µ¨ t °ª#p t u ow2⁄os qx °ª#p t y2…„ ¤±§s qx °ª
#p tŽ× q ׫¨ ¦¨¯¯ ¦∏¯·∏µ¨ ¬± ¬¯ª«·¬¶°²µ¨ ¶∏¬·¤¥¯¨·«¤±·«¤·¬± §¤µ®q
[ Κεψ ωορδσ] Φορσψτηια συσπενσα~¦¤¯ ∏¯¶¦∏¯·∏µ¨ ~³«¼¯ ¬¯µ¬± ≈责任编辑 袁桂京 
#vuv#
第 u{卷第 w期
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中 国 中 药 杂 志
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