全 文 ：亡。因此推测这可能是小檗碱诱导 H eL a 细胞凋亡
的分子机制之一。
参考文献:
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化州柚提取物止咳作用及其机制的研究①
李沛波, 苏　畅, 毕福均, 王永刚, 彭　维, 苏薇薇3
(中山大学生命科学学院, 广东 广州　510275)
摘　要: 目的　探讨化州柚提取物止咳作用及其机制的研究。方法　采用辣椒素致豚鼠咳嗽模型, 观察化州柚提取
物对豚鼠咳嗽次数及气管内 C 纤维 P 物质释放的影响; 采用电刺激猫喉上神经引咳模型, 观察化州柚提取物对电
刺激猫喉上神经引咳的电压阈值的影响; 采用机械刺激致辣椒素脱敏豚鼠咳嗽模型, 观察化州柚提取物对机械刺
激致豚鼠咳嗽的影响。结果　化州柚提取物能明显抑制辣椒素所致豚鼠咳嗽, 但对辣椒素诱导的气管内 C 纤维 P
物质的释放不产生明显影响; 对电刺激猫喉上神经引咳的电压阈值无显著影响; 对机械刺激致辣椒素脱敏豚鼠咳
嗽有显著抑制作用。结论　化州柚提取物具有明显止咳作用, 但不产生中枢性镇咳, 其止咳机制不是通过抑制气管
内C 纤维 P 物质释放, 但与快速适应性肺部牵张感受器 (RA R s) 有关。
关键词: 化州柚; 止咳; 辣椒素
中图分类号: R 28515　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253- 2670 (2008) 02- 0247- 04
　　化州柚 C itrus g rand is (L. ) O sbeck var. to2
m en tosa Ho rt. 又称化州仙橘, 系芸香科柑桔属植
物, 为柚 C itrus g rand is (L. ) O sbeck 的栽培变种,
主产于广东化州, 是广东的地道药材。化州柚的未成
熟或近成熟的干燥外层果皮经加工即为中药化橘
红, 习称“毛橘红”, 具有化痰、理气、健胃、消食之功
效, 用于治疗胸中痰滞, 咳嗽气喘, 呕吐呃逆, 饮食积
滞等症。本课题组已有研究报道: 化州柚提取物能明
显抑制氨水所致小鼠咳嗽和枸橼酸所致豚鼠咳嗽,
具有明显止咳作用[1 ]; 化州柚提取物还具有明显的
抗炎作用[2 ]。本研究在原研究基础上进一步探讨其
止咳作用及作用机制。
1　材料与方法
111　药物及试剂: 化州柚提取物 (由中山大学广州
现代中药质量研究开发中心提供, 黄酮类成分占
70% 以上 ) ; 磷酸可待因, 青海制药厂, 批号
20051212; 氯醛糖, A John son M athey Company 生
产; 辣椒素, 湖北襄西化工厂生产; P 物质测定试剂
盒,A dlit teram D iagno st ic labo ra to ries. Inc; 硫酸阿
托品注射液, 郑州羚锐制药有限公司, 规格 015 m gö
mL , 批号 0506196; 氨茶碱注射液, 广州明兴制药有
限公司, 规格 01125 gömL , 批号 050701; 莫吉司坦,
北京华奉联博科技有限公司, 质量分数≥9910% , 批
号 H F0501012; 乌拉糖, 国药集团化学试剂有限
公司。
112　动物: 豚鼠, 体重 300～ 450 g, 由南方医科大
学提供, 动物合格证号: 粤监证字 2007A 005; 家猫,
体重 210～ 310 kg, 购于从化动物养殖场。
113　仪器: BL —420E 泰盟生理记录仪, 成都泰盟
仪器厂生产; CC2170A 超声雾化器, 中外合资成都
维信电子科大新技术有限公司产品;W ellscan M K3
酶标仪, L ab system s D ragon。
114　方法
11411　对辣椒素所致豚鼠咳嗽的影响[3 ]: 取豚鼠
·742·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月
① 收稿日期: 2007206229
基金项目: 国家科技支撑计划项目 (2006BA I06A 02- 02)
作者简介: 李沛波 (1973—) , 男, 湖南涟源人, 药理学博士, 讲师, 研究方向为心血管药理学和新药研发。
T el: (020) 84110808　E2m ail: lipb73@yahoo. com. cn3 通讯作者　苏薇薇　T el: (020) 84110808　E2m ail: lsssww @ 126. com
100 只, 于实验前 1 天将其逐一置于 6 L 聚乙烯容
器内, 用超声雾化器喷入浓度为 013 mo löL 的辣椒
素溶液, 雾化速率为 017 mL öm in, 雾化 2 m in, 观察
并记录 10 m in 内豚鼠咳嗽次数, 挑选咳嗽次数多于
10 次的豚鼠为合格动物用于实验。取合格豚鼠 50
只, 随机分为 5 组: 对照组, 化州柚提取物低、中、高
剂量 (12、24、48 m gökg) 组, 阳性对照药物 (磷酸可
待因 10 m gökg) 组, 每组 10 只, 实验前禁食不禁水
12 h, 然后按 1 mL ö100 g ig 给药, 对照组给予等体
积蒸馏水, 给药后 1 h, 按前法用辣椒素引咳。观察
并记录豚鼠的咳嗽潜伏期和 10 m in 内咳嗽次数。
11412　对电刺激猫喉上神经所致咳嗽的影响[4 ]: 取
健康猫, 随机分为对照组, 化州柚提取物低、中、高剂
量 (1115、2310、4610 m gökg) 组, 阳性对照药物 (磷
酸可待因 712 m gökg) 组, 每组 6 只, 雌雄兼用。实
验时以 1% 氯醛糖按 30 m gökg ip 麻醉, 将猫背位
固定于手术台上, 用玻璃分针分离出喉上神经, 安置
铂丝电极, 连接于刺激器, 在电极和神经表面涂少许
低熔点石蜡, 同时, 暴露部分腹直肌与生理记录仪的
拉力换能器相连。用电刺激喉上神经 (刺激参数: 频
率 32 H zös, 脉冲宽度 015 m s, 连续刺激 5 s, 两次刺
激时间间隔 5 m in, 刺激电压由 012 V 开始逐渐递
增) , 直至出现咳嗽, 记录每只猫的引咳电压阈值。然
后, 各组动物 ig 给药, 对照组给予等体积蒸馏水, 于
给药后 015、1、2、3、4、5 h 时分别以前述同样参数测
定引咳电压阈值。
11413　对机械刺激所致辣椒素脱敏豚鼠咳嗽的影
响[4～ 6 ]: 取豚鼠 50 只, 分 4 天 sc 100 m gökg 辣椒素
进行脱敏, 具体脱敏方法如下: 第 1～ 4 天内分别按
剂量 10、20、30、40 m gökg sc 辣椒素, 注射剂量共
100 m gökg。在注射辣椒素前 15 m in, 先 sc 硫酸阿
托品 (1 m gökg) 和 ig 氨茶碱 (25 m gökg) 预处理,
以预防辣椒素对豚鼠呼吸的损害。注射完最后 1 次
辣椒素后, 将豚鼠随机分为模型组, 化州柚提取物
低、中、高剂量 (12、24、48 m gökg) 组, 阳性对照药
物 (莫吉司坦 10 m gökg) 组, 1 周后, 对豚鼠进行机
械刺激引咳, 方法如下: 用 20% 乌拉糖 (110 gökg)
ip 进行麻醉, 切开颈部皮肤, 分离气管, 于第 5 和第
6 个气管环间开一小孔, 插入刺激用猪鬃毛, 找到刺
激敏感部位后, 化州柚提取物组 ig 给药, 阳性组 sc
给药。于给药后 30、60、90 m in 对气管壁作反复机械
刺激, 频率为 1 次ös, 时间为 10 s, 观察动物 10 m in
内的咳嗽次数。
11414　对辣椒素所致咳嗽豚鼠气管C 纤维 P 物质
释放的影响[7 ]: 按 11411 项方法筛选出对辣椒素致
咳敏感的合格豚鼠 50 只, 按体重随机分为正常组,
模型组、化州柚提取物低、中、高剂量 (12、24、48
m gökg) 组, 每组 10 只。然后按 1 mL ö100 g ig 给
药, 正常组和模型组给予等体积蒸馏水。给药 1 h
后, 除正常组外, 其余豚鼠按 11411 项方法造成辣椒
素致豚鼠咳嗽模型。然后立即深度麻醉豚鼠 (戊巴
比妥钠, 50 m gökg, ip ) , 用气管套管注射 5 mL 冰
冷的生理盐水于气管, 共灌洗 2 次。收集支气管肺泡
灌洗液 (BAL F) , 在 4 ℃ 环境下 3 000 röm in 离心
10 m in, 分离出上清液, 冻干, 转移入 015 mL 用于
定量测定的缓冲液中, 进行 P 物质酶联免疫吸附剂
测定。根据实验前所建立的标准曲线算出BAL F 中
P 物质的量。
11415　统计学处理: 试验数据用 x ±s 表示, 组间比
较采用 t 检验。
2　结果
211　对辣椒素所致豚鼠咳嗽的影响: 由表 1 可见,
化州柚提取物的中、高剂量组的咳嗽次数与对照组
比较, 差异非常显著 (P < 0101) , 说明化州柚提取物
能抑制辣椒素所致豚鼠咳嗽, 提示化州柚提取物具
有明显止咳作用。
表 1　化州柚提取物对辣椒素所致豚鼠咳嗽的影响 (n= 10)
Table 1　Effect of extract from C. g rand is var.
tom en tosa on capsa ic in - induced cough ing
in guinea p ig (n= 10)
组别 剂量ö(m g·kg- 1) 咳嗽次数 镇咳率ö%
对照 - 1612±316 -
磷酸可待因 10 516±2183 3 6514
化州柚提取物 12 1119±413 2615
24 618±3153 3 5810
48 519±3123 3 6316
　　与对照组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101
　　3 P < 0105　3 3 P < 0101 vs con tro l group
212　对电刺激猫喉上神经引咳电压阈值的影响: 由
表 2 可见, 给药后磷酸可待因组各个时间点的电压
阈值与对照组比较, 差异非常显著 (P < 0101) , 而化
州柚提取物低、中、高剂量组各个时间点的电压阈值
与对照组比较, 差异不显著 (P > 0105) , 说明化州柚
提取物对电刺激猫喉上神经所致咳嗽无明显抑制作
用, 提示化州柚提取物不是通过中枢性镇咳方式而
产生镇咳作用。
213　对机械刺激所致辣椒素脱敏豚鼠咳嗽的影响:
由表 3 可见, 给药后莫吉司坦组各时间点的咳嗽次
数与模型组比较, 差异非常显著 (P < 0101) , 而化州
柚提取物低、中、高剂量组在给药后的咳嗽次数与模
·842· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月
表 2　化州柚提取物对电刺激猫喉上神经所致咳嗽的影响 (x±s, n= 6)
Table 2　Effect of extract from C. g rand is var. tom en tosa on cough ing induced
by electr ica l stimulation of laryngea l nerve in cat (x±s, n= 6)
组　别
剂量ö
(m g·kg- 1)
电刺激猫喉上神经引咳的电压阈值öV
给药前 给药后 015 h 　给药后 1 h 　给药后 2 h 　给药后 3 h 　给药后 4 h 　给药后 5 h
对照 - 0180±0131 1105±0120 1112±0128 1115±0124 1125±0140 1134±0136 1153±0156
磷酸可待因 712 0169±0111 1180±01253 3 2198±01383 3 3182±01423 3 4187±01233 3 5183±01373 3 7123±01443 3
化州柚提取物 1115 0170±0116 0179±0113 0182±0124 0196±0121 1115±0135 1136±0125 1144±0147
2310 0191±0132 0197±0131 1108±0137 1124±0148 1135±0141 1141±0154 1167±0163
4610 0175±0125 0187±0132 0198±0136 1108±0133 1121±0147 1132±0146 1165±0151
　　与对照组比较: 3 3 P < 0101
　　3 3 P < 0101 vs con tro l group
表 3　化州柚提取物对机械刺激所致辣椒素脱敏豚鼠咳嗽的
影响 (x±s, n= 10)
Table 3　Effect of extract from C. g rand is var. tom en tosa
on cough ing induced by mechan ica l stimulation
of trachea in capsa ic in -desen sitized guinea p ig
(x±s, n= 10)
组　别
剂量ö
(m g·kg- 1)
咳嗽次数
给药前 给药后 30 m in 给药后 60 m in 给药后 90 m in
模型 - 8113±2176 8105±1183 7170±1177 7123±2108
莫吉司坦 10 7176±1194 4120±01923 3 4121±11033 3 3192±11293 3
化州柚提取物 12 7188±2111 5127±11813 5132±11273 5105±01953
24 8109±2125 4190±11103 3 5101±11253 3 4139±11073 3
48 7197±1145 4187±11453 3 4130±11833 3 4111±11103 3
　　与模型组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101
　　3 P < 0105　3 3 P < 0101 vs model group
型组比较, 差异显著 (P < 0101、0105) , 说明化州柚
提取物对机械刺激所致辣椒素脱敏豚鼠咳嗽有抑制
作用, 提示化州柚提取物的镇咳作用可能与快速适
应性肺部牵张感受器 (RA R s) 有关。
214　对辣椒素所致咳嗽豚鼠气管C 纤维 P 物质释
放的影响: 由表 4 可见, 辣椒素可以明显促进豚鼠气
管C 纤维 P 物质的释放, 模型组 P 物质的量与正常
组比较, 差异非常显著 (P < 0101)。而化州柚提取物
低、中、高剂量组 P 物质的量与模型组比较, 差异不
显著 (P > 0105) , 提示化州柚提取物抑制辣椒素所
表 4　化州柚提取物对辣椒素所致咳嗽豚鼠 BAL F 中
P 物质释放的影响 (x±s, n= 10)
Table 4　Effect of extract from C. g rand is var. tom en tosa
on capsa ic in - induced release of substance P
in BAL F (x±s, n= 10)
组　别 剂量ö(m g·kg- 1) P 物质量ö(nmo l·L - 1)
正常 - 0122±0105
模型 - 0164±01153 3
化州柚提取物 12 0162±01113 3
24 0167±01183 3
48 0165±01173 3
　　与正常组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101
　　3 P < 0105　3 3 P < 0101 vs no rm al group
致豚鼠咳嗽与抑制气管C 纤维 P 物质释放无关。
3　讨论
　　咳嗽是上呼吸道一种重要的保护性反射, 是呼
吸系统疾病中的常见症状。有研究[8, 9 ]表明: 咳嗽的
产生主要与 RA R s 受体和 C2纤维受体接受刺激有
关, RA R s 受体主要对机械刺激敏感, 而C2纤维受
体则主要对化学刺激敏感, 如辣椒素、枸橼酸等。小
剂量的辣椒素可以使豚鼠气管内C2纤维 P 物质释
放而引起咳嗽, 而大剂量的辣椒素 (100 m gökg) 能
导致豚鼠对辣椒素致咳脱敏, 但对机械刺激仍然敏
感, 因此, 对辣椒素脱敏豚鼠进行机械刺激, 可以通
过 RA R s 而产生咳嗽[10 ]。临床常用止咳药物莫吉司
坦对化学刺激和机械刺激均有止咳作用, 研究表明
其主要是通过 RA R s 而起止咳作用[11, 12 ]。
本研究在原研究基础上进一步研究化州柚提取
物止咳作用及作用机制。结果表明: 化州柚提取物明
显抑制辣椒素所致豚鼠咳嗽, 但对电刺激猫喉上神
经所致咳嗽无明显影响, 提示化州柚提取物具有显
著止咳作用, 且其镇咳方式不是中枢性镇咳; 同时化
州柚提取物对辣椒素致咳豚鼠气管内C2纤维 P 物
质释放无明显影响, 但对机械刺激所致的辣椒素脱
敏豚鼠咳嗽具有明显抑制作用, 提示化州柚提取物
可以通过 RA R s 而起止咳作用。
参考文献:
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卷柏有效部位对辐射损伤小鼠的保护作用①
郑晓珂1, 翟品芳1, 冯卫生1, 王继峰2, 牛建昭2
(11 河南中医学院, 河南 郑州　450008; 21 北京中医药大学, 北京　100029)
摘　要: 目的　观察卷柏有效部位对60Co2Χ射线所致小鼠辐射损伤的防护作用。方法　设正常组、模型组、雌激素
组和卷柏组; 除正常组外, 其他各组小鼠均接受 610 Gy 60Co2Χ射线全身照射 1 次; 各组小鼠分别于照射前 72、48、
24 h 和照射后即刻 ig 药物或蒸馏水; 照射后 6、12、24 h 立即分批断头处死小鼠, 观察卷柏有效部位对辐照小鼠胸
腺、脾脏指数及胸腺、脾脏和骨髓细胞凋亡率的影响。结果　辐射损伤后, 受照射小鼠的胸腺、脾脏指数明显下降,
胸腺、脾脏和骨髓细胞凋亡率明显升高; 卷柏有效部位可促进受照射小鼠胸腺脾脏指数的恢复, 并明显降低其胸
腺、脾脏和骨髓的细胞凋亡率。结论　卷柏有效部位对60Co2Χ射线所致小鼠辐射损伤有一定的防护作用。
关键词: 卷柏有效部位; 抗辐射; 细胞凋亡
中图分类号: R 286196　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253- 2670 (2008) 02- 0250- 03
　　卷柏为蕨类卷柏科卷柏属植物卷柏 S elag inel2
la tam a riscina (Beauv. ) Sp ring 的全草, 多年生草
本, 又名长生不死草、九死还魂草、石莲花等, 是传统
中药材。笔者在前期对其进行系统的化学成分研究
过程中, 在其正丁醇部位得到了黄酮[1 ]、木脂素[2 ]类
成分; 后经细胞活性筛选实验证明, 其水部位和正丁
醇部位确有较好的雌激素样作用[3 ]。另外, 现代药理
及临床研究也表明, 卷柏具有防癌治癌、抗炎、抗病
毒和增强机体免疫功能等作用[4 ]。本实验将卷柏水
部位作为其有效部位, 利用碘化丙啶 (P I) 单染的
方法, 通过观察其对辐照小鼠胸腺、脾脏和骨髓细胞
凋亡率的影响, 并结合辐照小鼠的胸腺、脾脏指数,
来探讨其辐射防护作用。
1　材料
111　动物: 昆明种小鼠 72 只, 雌雄各半, 体重
(20±2) g, 购自河南省动物实验中心。
112　药物与试剂: 尼尔雌醇片, 上海华联制药有限
公司生产。RN ase A、碘化丙啶 (P I) 购自 Sigm a 公
司; 乙醇为国产分析纯。
113　主要仪器: FA CS 流式细胞仪 (BD , 美国) ,
KDC—160HR 高速冷冻离心机, OL YM PU S 倒置
显微镜 (CKX41) , T hera tron 7802C 60Co2Χ射线照
射仪 (河南省肿瘤医院提供) ,W H—2 微型涡旋混
合仪, H ZS—H 水浴振荡器。
114　卷柏水部位的制备: 称取 2 kg 新鲜卷柏 (采
自河南省西峡县, 由河南中医学院生药学科董诚明
副教授鉴定) , 自来水冲洗干净, 用 10 倍量水煎煮
115 h, 滤过, 滤渣用 8 倍量水煎煮 1 h, 滤过, 合并两
次滤液, 低温减压浓缩得浸膏。再将浸膏用适量水溶
解, 依次用乙醚、醋酸乙酯和正丁醇萃取, 将所剩水
部位低温减压浓缩、真空干燥, 得水部位干燥物 300
g (其中含多糖 24108% ) , 备用。
2　方法
211　分组、照射及给药: 将 72 只昆明种小鼠随机
分为正常组、模型组、雌激素 (阳性对照) 组和卷柏
组, 每组 18 只, 雌雄各半; 卷柏组和雌激素组分别
·052· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月
① 收稿日期: 2007205223
基金项目: 国家自然科学基金资助项目 (30371775, 30510403202) ; 河南省新世纪优秀人才支持计划 (2006HAN CET 208)
作者简介: 郑晓珂 (1961—) , 女, 河南省郑州市人, 博士, 教授, 硕士生导师, 从事中药活性成分及作用机制研究。
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