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枇杷花提取物止咳作用研究
王静波1 ,杨必坤1 ,张 　宏1 ,2 3 ,李 　琪1 ,张晓喻1 ,刘　刚1
(11 四川师范大学生命科学学院 ,四川 成都 　610068 ; 21 四川师范大学植物资源应用与开发研究所 ,四川 成都 　610068)
摘 　要 :目的 　研究枇杷花 95 %、75 %、50 % 乙醇提取物 ,水提取物和混合提取物的止咳作用。方法 　分别采用小
鼠氨水引咳法和枸橼酸豚鼠引咳法观察枇杷花各提取物的止咳作用。结果 　与对照组比较 ,枇杷花 95 % 乙醇提
取物 ,混合提取物高、中剂量组及 50 % 乙醇提取物 ,水提取物高剂量组对小鼠和豚鼠均有明显的止咳作用 ,并与阳
性对照组相当。75 % 乙醇提取物高、中剂量组和各提取物低剂量组均无明显止咳作用。结论 　枇杷花 95 % 乙醇
提取物和混合提取物具有明显止咳作用 ,50 % 乙醇提取物和水提取物具有一定止咳效果 ,75 % 乙醇提取物无明显
止咳效果。各提取物中三萜化合物可能具有明显止咳作用 ,总黄酮具有一定止咳作用。
关键词 :枇杷花 ; 止咳 ; 总黄酮
中图分类号 :R28515 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0721106204
　　枇杷花为枇杷 Eriobot ry a j a ponica ( Thunb. )
Lindl. 的干燥花蕾及花序 ,气味香醇独特 ,性温 ,可
入肺散寒 ,化痰止咳 ,治疗伤风感冒[1 ,2 ] 。枇杷花主
要的化学成分是三萜类化合物[3 ] 和黄酮类化合物。
文献报道枇杷叶中三萜类和黄酮类化合物均具有较
好的抗炎和镇咳作用[4 ,5 ] ,在临床上多用于治疗急、
慢性呼吸道疾病[ 6 ] 。而枇杷花的相关研究较少。本
实验采用分光光度法和 HPL C 法测定枇杷花中的
总黄酮、齐墩果酸和熊果酸的量 ,用小鼠和豚鼠模型
进行枇杷花不同溶剂提取物的止咳药效实验 ,探讨
枇杷花不同溶剂提取物的止咳效果 ,以及止咳物质
基础 ,为枇杷花资源的开发利用提供科学的依据。
1 　材料
111 　药材 :枇杷花 ,2006 年 10 月采于四川蒲江 ,经
本校生命科学学院植物教研室鉴定为枇杷 Eriobo2
t ry a j a ponica ( Thunb. ) Lindl . 的花 ,采后置于
50 ℃下烘干备用。
112 　药物与试剂 :复方磷酸可待因口服溶液 (415
mg/ mL) ,香港奥美制药厂生产 ,批号 20070005 ;京
都念慈菴蜜炼川贝枇杷膏 ,京都念慈菴总厂有限公
司生产 ,批号 L2710061 ;蛇胆川贝枇杷膏 ,广州潘高
寿药液股份有限公司生产 ,批号 G05013 ;神奇枇杷
止咳颗粒 ,贵州神奇药液股份有限公司生产 ,批号
20071015 ;急支糖浆 ,太极集团重庆涪陵制药厂有限
公司生产 ,批号 88070500028 ;氨水 (分析纯) 、枸橼
酸 (分析纯) 、羧甲基纤维素钠 ( CMC2Na) 均由成
都市科龙化工试剂厂生产。
113 　仪器 :W H —2000 超声波雾化器 ,汕头市粤华
医疗器械厂有限公司生产 ;Buchi Syncore Analyst
R —12 多功能平行浓缩仪 ; Shimadzu2UV21700 型
紫外可见分光光度计 ;Dionex2Summit P680A D GP2
6 型双三元高效液相色谱仪。
114 　动物 :小鼠 ,昆明种 ,雌雄各半 ,体质量 (20 ±2)
g ,由四川省医学科学院实验动物研究所提供 ,动物合
·6011· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
3 收稿日期 :2008209225　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :四川省教育厅青年基金项目 (2006B035) ; 四川省攀枝花市科技局重点项目 (2008CY2S21)
作者简介 :王静波 (1982 —) ,女 ,辽宁省辽阳市人 ,硕士研究生 ,主要从事天然产物研究工作。
E2mail : wangjingbo8299 @163. com3 通讯作者　张　宏　E2mail : zhanghong651 @yahoo. com. cn
格证号为 SCXK (川) 2004215 ;豚鼠 ,英国种 ,雌雄各
半 ,体质量 (250 ±50) g ,由四川省实验动物专委会养
殖场提供 ,动物合格证号为 SCXK (川) 2004214。
2 　方法
211 　提取液的制备
21111 　枇杷花 95 % 乙醇提取液 :称取枇杷花粉末
50 g ,加 10 倍量 95 % 乙醇 ,回流提取 1 h ,滤过 ,重
复 3 次 ,合并滤液 ,浓缩得浸膏 ,加入 015 % CMC2
Na 超声溶解 ,定容至 500 mL ,得枇杷花 95 % 乙醇
提取物高剂量组。稀释 2、4 倍即得本实验所用中、
低剂量组。
21112 　枇杷花 75 % 乙醇提取液 :称取枇杷花粉末
50 g ,制法同 21111 ,定容至 500 mL ,得枇杷花 75 %
乙醇提取物高剂量组。稀释 2、4 倍即得本实验所用
中、低剂量组。
21113 　枇杷花 50 % 乙醇提取液 :称取枇杷花粉末
50 g ,制法同 21111 ,定容至 500 mL ,得枇杷花 50 %
乙醇提取物高剂量组。稀释 2、4 倍即得本实验所用
中、低剂量组。
21114 　枇杷花水提液 :称取枇杷花粉末 50 g ,加 10
倍量蒸馏水浸泡 30 min 后 ,强火煮沸 ,微沸 30
min ,重复 3 次 ,合并滤液 ,浓缩得枇杷花水提物浸
膏 ,加入 015 % CMC2Na 超声溶解 ,定容至 500
mL ,得枇杷花水提物高剂量组。稀释 2、4 倍即得本
实验所用中、低剂量组。
21115 　枇杷花混合提取液 :称取枇杷花粉末 50 g ,
先加 10 倍量 95 % 乙醇 ,制法同 21111 ,再以同样方
法用 50 % 乙醇提取 ,合并 6 次滤液 ,浓缩得浸膏 ,加
入 015 % CMC2Na 超声溶解 ,定容至 500 mL ,得枇
杷花混合提取物高剂量组。稀释 2、4 倍即得本实验
所用中、低剂量组。
212 　总黄酮、熊果酸及齐墩果酸定量测定 :对以上
供试药液高剂量组 ,用分光光度法进行总黄酮定量
测定[ 7 ] ,用高效液相色谱法进行熊果酸、齐墩果酸定
量测定[8 ] 。
213 　小鼠氨水引咳法[ 9 ] :小鼠 170 只 ,雌雄各半 ,
随机分为对照组 ,阳性对照组 (415 mg/ mL 复方磷
酸可待因口服液) ,枇杷花 95 % 乙醇提取物高、中、
低剂量组 ,75 % 乙醇提取物高、中、低剂量组 ,50 %
乙醇提取物高、中、低剂量组 ,水提物高、中、低剂量
组 ,混合提取物高、中、低剂量组 ,各提取物高、中、低
剂量均相当于生药 5、215、1125 g/ kg。每组 10 只 ,
ig 给药 ,每天 1 次 ,连续 6 d ,对照组则给予等体积
溶媒 (015 % CMC2Na) 。末次给药后 1 h 进行氨水
引咳实验 ,即逐只将小鼠放入钟罩内后用超声波雾
化器以恒定压力匀速将 13 % 氨水喷入箱内 ,喷雾
时间 70 s ,观察其咳嗽潜伏期 (从开始喷雾到引起
小鼠第 1 次咳嗽的时间) 和 3 min 内咳嗽次数 (以
小鼠腹肌收缩 ,张大口并同时伴有咳嗽声为准) 。并
对此实验进行两次验证。
214 　枸橼酸豚鼠引咳法[ 10 ] :筛选豚鼠 :将豚鼠放入
5 L 特制喷雾箱内 ,待其稳定后 ,用超声波雾化器以
恒定压力匀速将 175 g/ L 枸橼酸喷入箱内 ,持续喷
雾 10 s 后 ,立即拔出喷雾管 ,以豚鼠出现响亮的咳
嗽声为标准 ,记录豚鼠咳嗽潜伏期及 5 min 内咳嗽
次数 ,5 min 之后 ,立即揭开保鲜膜 ,迅速将豚鼠转
移至正常环境中 ,再观察其后 5 min 内动物的咳嗽
总数 ,咳嗽次数 < 10 次和 > 50 次者或潜伏期 <
10 s 和 > 120 s 弃除。
　　次日将挑选筛选合格的豚鼠 170 只随机分组 ,
分组方法同 213 项 ,各提取物高、中、低剂量均相当
于生药 3、115、0175 g/ kg。每组 10 只 ,ig 给药 ,每
天 1 次 ,连续 4 d ,对照组则给予等体积溶媒 (015 %
CMC2Na) 。末次给药 30 min 后按上述筛选方法重
复引咳实验。
215 　与常用止咳药效果比较 :采用小鼠氨水引咳法
将具有较好止咳效果的枇杷花提取物分别与 5 种常
用止咳药 (复方磷酸可待因、京都念慈菴蜜炼川贝枇
杷膏、蛇胆川贝枇杷膏、枇杷止咳颗粒、急支糖浆)
进行药效比较。
216 　统计学处理 :应用 SPSS 1310 软件进行统计
分析 ,结果以 x ±s 表示 ,组间比较采用单因素方差
分析。
3 　结果与分析
311 　供试药液总黄酮、熊果酸及齐墩果酸定量测
定 :结果见表 1。总黄酮 :枇杷花 50 % 乙醇提取
物 > 水提取物 > 75 %乙醇提取物 > 混合提取物 >
95 %乙醇提取物。熊果酸和齐墩果酸 :枇杷花 95 %
乙醇提取物 > 混合提取物 > 75 % 乙醇提取物 >
50 % 乙醇提取物 ,水提取物未检出。
表 1 　枇杷花提取物总黄酮及两种三萜化合物定量
Table 1 　Contents of total flavanoid and two kinds of triter2
penoid in extracts from flowers of E. j a ponica
枇杷花提取物
总黄酮/
(mg ·L - 1)
齐墩果酸/
(mg ·L - 1)
熊果酸/
(mg ·L - 1)
95 % 乙醇提取物 4281 806 751072 1851 528
75 % 乙醇提取物 3 0541 500 121261 241 082
50 % 乙醇提取物 5 0481 389 71622 161 554
水提取物 3 9791 333 未检出 未检出
混合提取物 2 1641 904 321642 741 834
·7011·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
312 　供试药液对氨水诱发小鼠咳嗽的影响 :结果见
表 2。3 次实验结果表明 ,枇杷花 95 % 乙醇提取物
高、中、低剂量组 ,50 % 乙醇提取物高剂量组、水提
取物及混合提取物高、中剂量组可显著延长氨水引
起小鼠咳嗽的潜伏期 ( P < 0105、0101) 。其中 95 %
乙醇提取物及混合提取物高、中剂量组 ,50 % 乙醇
提取物及水提取物高剂量组可显著减少小鼠 3 min
内咳嗽次数 ( P < 0101) 。混合提取物低剂量组 , 75 % 乙醇提取物各剂量组 ,50 % 乙醇提取物中、低剂量组及水提取物低剂量组在延长小鼠咳嗽潜伏期及减少小鼠 3 min 内咳嗽次数上均无显著作用。95 % 乙醇提取物低剂量组、水提取物中剂量组虽在延长小鼠咳嗽潜伏期方面有显著作用 ,但在减少小鼠 3 min 内咳嗽次数方面却无统计学意义 ,即无明显止咳作用。313 　供试药液对枸橼酸诱发豚鼠咳嗽的影响 :结果
表 2 　枇杷花提取物对氨水引起小鼠咳嗽的影响 ( x ±s , n = 10)
Table 2 　Effect of extracts from flowers of E. j a ponica on cough of mice induced by ammonia ( x ±s , n = 10)
组别
剂量/
(g ·kg - 1 )
第 1 次止咳实验
潜伏期/ s 3 min 内咳嗽次数
第 2 次止咳实验
潜伏期/ s 3 min 内咳嗽次数
第 3 次止咳实验
潜伏期/ s 3 min 内咳嗽次数
对照 - 531 07 ± 71 42 271 73 ±5176 491 38 ±10199 271 31 ±51 75 521 00 ± 71 91 27155 ±31 88
阳性对照 - 651 58 ±111 49 3 3 151 67 ±4112 3 3 681 25 ±10175 3 3 111 83 ±31 86 3 3 621 60 ± 51 36 3 3 11140 ±31 86 3 3
枇杷花 95 % 乙醇提取物 5 631 05 ± 81 45 3 3 141 23 ±3186 3 3 661 58 ± 7170 3 3 121 40 ±31 84 3 3 641 30 ± 61 34 3 3 12140 ±31 67 3 3
215 621 86 ± 91 05 3 3 141 43 ±3137 3 3 651 79 ± 6153 3 3 131 29 ±11 90 3 3 631 58 ± 71 70 3 3 12108 ±41 03 3 3
1125 601 88 ± 51 69 3 181 89 ±7165 611 82 ± 9193 3 3 191 58 ±61 34 591 10 ± 81 55 3 19188 ±21 70 #
枇杷花 75 % 乙醇提取物 5 591 67 ± 51 74 231 08 ±5113 # 541 00 ± 8158 # # 231 71 ±41 91 # # 531 29 ± 91 02 # # 23118 ±41 26 # #
215 521 33 ± 51 19 # # 281 25 ±8109 # # 551 36 ± 5165 # # 231 71 ±61 47 # # 521 32 ± 81 92 # # 24109 ±41 02 # #
1125 551 62 ±101 03 # # 251 00 ±6187 # 491 83 ± 9137 # # 251 33 ±61 47 # # 511 36 ± 51 50 # # 25111 ±31 99 # #
枇杷花 50 % 乙醇提取物 5 621 67 ± 71 28 3 3 151 73 ±4152 3 3 631 58 ± 9137 3 3 151 08 ±41 03 3 3 601 07 ± 51 09 3 3 14107 ±31 71 3 3
215 591 27 ± 61 31 201 73 ±3140 591 10 ± 6109 191 50 ±51 26 561 23 ± 61 82 # 19177 ±41 36
1125 551 53 ± 91 11 # # 241 00 ±5123 # 571 60 ± 5193 # # 221 08 ±51 12 # 531 00 ± 91 58 # # 23164 ±41 50 # #
枇杷花水提取物 5 631 00 ± 71 71 3 3 171 18 ±3131 3 3 601 27 ± 9112 3 3 141 91 ±31 56 3 3 611 27 ± 71 37 3 3 12164 ±21 84 3 3
215 631 33 ± 91 06 3 3 221 58 ±4106 # 651 00 ± 6138 3 3 211 17 ±51 34 # 581 10 ± 81 80 3 21190 ±31 76 # #
1215 601 69 ± 91 04 # # 261 54 ±7109 # # 571 75 ± 8165 # # 221 58 ±51 33 # # 521 85 ± 81 12 # # 23146 ±31 21 # #
枇杷花混合提取物 5 631 86 ± 91 97 3 3 141 93 ±4107 3 3 701 64 ± 5109 3 3 141 64 ±31 23 3 3 661 42 ± 81 67 3 3 10108 ±21 02 3 3
215 641 27 ± 81 70 3 3 151 82 ±2193 3 3 661 23 ± 6195 3 3 111 69 ±31 59 3 3 591 67 ± 91 09 3 3 12167 ±21 77 3 3
1125 581 27 ± 91 92 # 201 45 ±4116 581 83 ± 7169 # # 231 17 ±51 41 # # 561 11 ±111 33 23133 ±21 74 # #
　　与对照组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101 ; 　与阳性对照组比较 : # P < 0105 　# # P < 0101 ; 下表同
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs cont rol group ; 　# P < 01 05 　# # P < 01 01 vs positive cont rol group , following tables are same
见表 3。枇杷花 95 % 乙醇提取物及混合提取物高、
中、低剂量组 ,50 % 乙醇提取物及水提取物高、中剂
量组可明显延长枸橼酸引起的豚鼠咳嗽潜伏期
( P < 0105、0101) ,其中 95 % 乙醇提取物及混合提
取物高、中剂量组 ,50 % 乙醇提取物及水提取物高
剂量组可显著减少豚鼠 5 min 内咳嗽次数 ( P <
0101) 。75 % 乙醇提取物各剂量组、50 % 乙醇提取
物及水提取物低剂量组在延长豚鼠咳嗽潜伏期及减
少豚鼠 5 min 内咳嗽次数上均无显著作用。95 %
乙醇提取物及混合提取物低剂量组、50 % 乙醇提取
物及水提取物中剂量组虽在延长豚鼠咳嗽潜伏期方
面有显著作用 ,但在减少豚鼠 5 min 内咳嗽次数方
面却无统计学意义 ,且与阳性对照有显著差异 ( P <
0105、0101) ,即无明显止咳作用。同时 ,此实验也验
证了氨水引发小鼠咳嗽实验的结果。
314 　有效供试药液与 5 种常用止咳药药效比较 :结
果见表 4。枇杷花 95 % 乙醇提取物及混合提取物
高 、中剂量组、50 %乙醇提取物及水提取物高剂量
表 3 　枇杷花提取物对枸橼酸引起豚鼠咳嗽的影响
( x ±s , n = 10)
Table 3 　Effect of extracts from flowers of E. j a ponica
on cough of guinea2pig induced by citric acid
( x ±s , n = 10)
组 　别 剂量/ (g ·kg - 1 ) 潜伏期/ s 5 mim 内咳嗽次数
对照 - 39130 ±11169 26190 ±4179
阳性对照 - 83110 ±12191 3 3 10160 ±2122 3 3
枇杷花 95 %乙醇提取物 3 79182 ±12157 3 3 10191 ±3101 3 3
115 79173 ±11121 3 3 12191 ±3101 3 3
0175 52150 ±11156 3 # # 24161 ±4160 # #
枇杷花 75 %乙醇提取物 3 43145 ±11110 3 # # 23191 ±4146 # #
115 40156 ±12168 3 3 26144 ±3188 3 3
0175 39145 ±11180 # # 25173 ±4147 # #
枇杷花 50 %乙醇提取物 3 76150 ±12120 3 3 11130 ±3120 3 3
115 56160 ±10185 3 3 # # 23170 ±4122 # #
0175 40150 ±11182 # # 24192 ±4156 # #
枇杷花水提取物 3 70150 ±10165 3 3 # 11190 ±2169 3 3
115 60110 ±11118 3 3 # # 24110 ±3198 # #
0175 42130 ±12144 # # 26100 ±4103 # #
枇杷花混合提取物 3 78100 ±12159 3 3 10136 ±2138 3 3
115 80191 ±12105 3 3 11173 ±3188 3 3
0175 51160 ±12130 3 # # 23160 ±4162 # #
·8011· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
表 4 　有效供试药液与常用止咳药效果比较 ( x ±s , n = 10)
Table 4 　Comparision between effective extract solution
and common cough remedy ( x ±s , n = 10)
组 　别 剂量/ (g ·kg - 1 ) 潜伏期/ s 3 mim 内咳嗽次数
对照 - 50120 ± 9107 25191 ±7157
枇杷花 95 %乙醇提取物 5 70118 ± 7170 3 3 12103 ±4136 3 3
215 69107 ± 8109 3 3 12100 ±3170 3 3
枇杷花 50 %乙醇提取物 5 68123 ± 8172 3 3 14177 ±5163 3 3
枇杷花水提取物 5 67122 ± 7136 3 3 12179 ±5156 3 3
枇杷花混合提取物 5 71127 ± 7196 3 3 11107 ±5118 3 3
215 70101 ± 8103 3 3 11155 ±4100 3 3
复方磷酸可待因口服溶液 512 mL ·kg - 1 68180 ± 8172 3 3 12110 ±4123 3 3
京都念慈菴蜜炼川贝枇杷膏 518 64177 ± 6127 3 13115 ±4169 3 3
蛇胆川贝枇杷膏 816 67171 ± 9171 3 3 14179 ±6161 3 3
枇杷止咳颗粒 112 62154 ±14196 14169 ±6133 3 3
急支糖浆 1117 mL ·kg - 165156 ± 9149 3 12122 ±4182 3 3
组在延长小鼠咳嗽潜伏期及减少小鼠 3 min 内咳嗽
次数方面均与对照组有显著性差异 ( P < 0101) ,且
与其他 5 种常用止咳药效果相当。
3 　讨论
　　文献报道[11 ] ,氨水引起的小鼠咳嗽模型及枸橼
酸引起的咳嗽模型均是由于吸入刺激性化学药物的
气雾后 ,刺激呼吸道感受器 ,引起支气管平滑肌收
缩 ,兴奋传入神经和传出神经 ,从而引发咳嗽。本实
验结果表明 3 次小鼠氨水引咳实验和 1 次枸橼酸豚
鼠引咳实验所示枇杷花提取物在延长咳嗽潜伏期及
减少咳嗽次数上结果趋于一致 ,即两种模型所示枇
杷花不同溶剂提取物止咳规律基本相同。
本实验通过小鼠氨水引咳实验和枸橼酸豚鼠引
咳实验得知枇杷花 95 % 乙醇提取物和混合提取物
具有明显止咳作用 ,50 % 乙醇提取物和水提取物具
有一定止咳作用 ,75 % 乙醇提取物无明显止咳作
用。枇杷花 95 % 乙醇提取物中三萜化合物及 50 %
乙醇提取物中总黄酮的量均明显高于其他各组。因
此 ,枇杷花提取物中三萜化合物可能起明显止咳作
用 ,总黄酮具有一定作用。由于混合提取物具有明
显止咳作用 ,其中三萜化合物的量少于 95 % 乙醇
提取物 ,且水提取物具有一定止咳作用 ,其中总黄酮
量少于 50 % 乙醇提取物 ,由此推断 ,除以上两类物
质外可能还有其他物质起止咳作用 ,这有待于进一
步研究。
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海洋真菌 Halorosellinia oceanicum 新化合物 JL2 对豚鼠离体心房肌的作用
王正濂1 ,许实波1 ,冯 　星2 3 ,姜广策1 ,林永成1
(11 中山大学化学与化学工程学院 ,广东 广州 　510275 ; 21 湖南师范大学医学院 ,湖南 长沙 　410006)
摘 　要 :目的 　以豚鼠离体心房肌为材料 ,研究海洋真菌 H alorosel l inia oceanicum 中分离得到的新化合物 JL2
(hypoxylin A) 对离体心房肌的作用。方法 　采用豚鼠离体心房肌 ,测定给药前后心房的心率、心肌收缩力、左心
房静息后增强作用 ( PRP) 及正性阶梯现象。结果 　JL2 (终浓度为 115 ×10 - 5 、115 ×10 - 6 mol/ L) 能明显降低豚
鼠离体右心房肌的收缩力 ,同时减慢其心率 ;显著抑制左心房肌的 PRP 作用 ;显著抑制豚鼠离体左心房肌的正性
阶梯作用。结论 　JL2 对豚鼠离体心房肌有负性肌力和负性频率作用。
关键词 : H alorosel l inia oceanicum ; hypoxylin A (JL2) ; 心房肌 ; 负性肌力 ; 正性阶梯
中图分类号 :R28612 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0721109204
·9011·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
3 收稿日期 :2008209211　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (20072058) ; 广东省自然科学重点基金资助项目 (021732) ; 国家科技攻关“863”资助项目
(2003AA624010)
作者简介 :王正濂 (1965 —) ,男 ,湖南道县人 ,博士 ,现于广州斯威森科技有限公司工作。3 通讯作者　冯　星　Tel : (0731) 8652216 　Fax : (0731) 8912417 　E2mail : fengxing01 @hot mail . com