全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月·523·
HPLC法测定灌胃当归胡椒复方小鼠血浆中阿魏酸的含量
裴瑾1，杨祖贻孙，刘荣敏2，陈 佳2，万德光1，胡 荣1
(1．成都中医药大学药学院，四川成都610075；2．四川省肿瘤研究所，N)lI成都610041)
摘要：目的建立灌胃当归胡椒复方小鼠的血浆中阿魏酸的分析方法。方法采用HPLC法，以甲醇一水一冰醋酸
(36·4：63：0．6)为流动相，色谱柱KromasilC18(250mm×4．6mm，7pm)为固定相，体积流量1．0mL／min，紫外
检测波长322nm。采用外标法定量。结果阿魏酸与血浆中其他组分能很好分离，阿魏酸在1．88～188．00ng／pL
线性关系良好(，一0．999)，最低检测浓度0．47ng／弘L，平均回收率为94．85％。结论本方法具有准确、灵敏、专一
性高等特点，适于阿魏酸的血药浓度测定及药动学研究。
关键词：当归胡椒复方；阿魏酸；高效液相色谱；血药浓度
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)04—0523—03
Determinationofferulicacidinplasmaofmiceplasma
administeredwithDangguiH jiaoDecoctionbyHPLC
PEIJinl，YANGZu—yi2，LIURong—rain2，CHENJia2，WANDe—guan91，HURon91
(1．CollegeofPharmacy，ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine，Chengdu610075，China；
2·SichuanCancerInstitute，Chengdu610041，China)
Abstract：ObjectiveToestablishananalyticalmethodfor eterminationofferulicacidinDanggui
Hujiao(RadixAngelicaeSin nsisandFructusPiperis)Decoctioninmouseplasma．MethodsHPLC
methodwasused．Theconditionsofchromatography：KromasilC18(250m ×4．6mm，7扯m)wasused
witha mobilephaseofCH30H—H20—CH3COOH(36．4：63：O．6)．Flowratewas1．0mL／min．The
detectingwavelengthwas322nm．Externalstandardmethodwasquantitativeanalysismethod．Results
Theferulicacidcouldbetotallyseparatedfromotheringredientsnplasma．Thelinearrangewas1．88—
188·00ng／pL(r=0．999)，thelowesdetectabilitywas0．47ng／pL。andtheaveragerecoverywas
94．85％．ConclusionTh smethodprovidesanaccuratendsensitivewayindetectingblood
concentrationofferulicacidandstudyinginpharmacokinetics．
Keywords：DangguiHujiao(RadixAngelicaeSinensisandFructusPipeHs)Decoction；ferulicacid
HPLC；bloodconcentration
当归胡椒复方是中药活血温里复方中的一种基
本配伍形式，该配伍通过温里药胡椒增加活血药当
归的临床疗效。为说明活血药与温里药配伍的药效
物质基础及作用机制，建立适合于该复方主要活性
成分的体内分析方法尤为重要。阿魏酸是当归的主
要有效成分之一，具有增加冠脉血流量、保护缺血心
肌、抗血小板聚集、抗血栓形成、抗脂质过氧化等生
理活性。本研究建立的灌胃当归胡椒复方小鼠体内
阿魏酸的血药浓度分析方法为活血温里复方药物配
伍机制的进一步深入研究奠定了药动学基础。
1仪器与试药
岛津IOA高效液相色谱仪，N2000浙江智达色
谱工作站。阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定
所，批号0773—9910，纯度为99．4％)，所用甲醇为色
谱纯，其余试剂为分析纯，水为重蒸去离子水。当归、
胡椒药材购自四川省中药材公司，经成都中医药大
学万德光教授鉴定。当归提取物、当归胡椒复方提取
物由四川省肿瘤研究所制备。
2方法与结果
2．1色谱条件：色谱柱：KromasilC18柱(250mmx
4．6mm，7弘m)；流动相：甲醇一水一冰醋酸(36．4：
63：0．6)；体积流量：1．0mL／min；检测波长：322
nm；柱温：室温；灵敏度：0．05AUFS。
2．2 血浆样品的制备：将小鼠随机分为空白对照
组、对照组和实验组，每组10只。空腹14h后，根据
小鼠体重按剂量ig给药，给予空白对照组水、对照
收稿日期：2004—08—20
摹拿塑旱：邑家中医药管理局科研基金资助项目(02一03ZP50)；四川省中医药管理局科研基金资助项目(200217)
作者简介：裴瑾(1970)，女，四川成都人，中药学博士，副教授，主要从事中药质量研究工作。Tel：(028)66683824
*通讯作者Tel：(028)85420350E—mail：chianghm@163．corn
万方数据
·524· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月
组当归提取物(以阿魏酸计100mg／kg)、实验组当
归胡椒复方提取物(以阿魏酸计100mg／kg)。ig后
0．5h眼眶取静脉血0．5mL，用肝素血液抗凝，离心
取上清液获得血浆。用微量加样器取100肛L血浆，
置于0．5mL高速离心管中，加入3倍体积的乙醇，
电动混匀器充分混匀后经5OOo～100 0r／min离
心15～20min，取上清液置于0．5mL试管中，置于
37℃水浴挥干，用50pL甲醇重溶，再次5000～
10000r／min离心15～20min，取上清液置微量进
A
{：
fi
jL
r————1—————]——————r
C
样管中，备用。
2．3方法专属性考察：取小鼠空白血浆、空白血浆
加入对照品、对照组、实验组血浆各5份，按血样处
理方法处理，分别进样、测定。在上述色谱条件下，阿
魏酸与血浆中蛋白质杂峰、内源性物质均能很好的
分离，当归、当归胡椒提取物的其他成分以及这些成
分的体内代谢物和结合性成分均无干扰。通过二维、
三维色谱图对其吸收峰定性，其保留时间均与对照
品一致，见图1。
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O 5 10 15
A一阿魏酸对照品 B一空白血浆 C一空白血浆+阿魏酸D一对照组 E一实验组 *阿魏酸
AferulicacidreferencesubstanceB—blankplasmaC—blankplasma一-ferulicacidD—controlgroupE—experimentgroup+一ferulicacid
图1小鼠血浆样品的HPLC色谱图
Fig．1HPLCchromatogramsofmouseplasmasample
2．4 标准曲线的绘制：精密称取阿魏酸对照品，加 表1方法回收率试验结果(一一5)
甲醇溶解，制成0．47mg／mL的对照品溶液。分别取
对照品溶液0．2、0．5、1．0、5．0、10．0、20．0,aL，室温
下挥干，分别加入空白血浆100,uL，按血浆样品的
制备方法处理、测定。以阿魏酸峰面积与对应进样量
进行线性回归，得此条件下阿魏酸的回归方程为
C一8．10368×105A一9．9842，r一0．999。结果表
明血浆中阿魏酸在1．88～188．00ng／t-L线性关系
良好。
2．5最低检测浓度的测定：取0．047mg／mL阿魏
酸对照品溶液0．1、0．2、0．5、1．0、1．5、2．0、5．0弘L
分别加入到100弘L空白血浆中，按血样预处理方法
处理后，进样、分析。以信噪比(S／N)为3时的阿魏
酸质量浓度作为本法的检测限，结果最低检测限为
0，47ng／,uL。
2．6精密度试验：阿魏酸对照品溶液，对照组、实验
组血浆样品在1d内连续进样测定5次，以峰面积
计其日内RSD分别为2．31％、3．53％、4．08％；另
连续测定5d，日间RSD分别为3．05％、4．66％、
3．83％。
2．7方法回收率试验：精密量取阿魏酸对照品溶液
5、10、20”L，室温下分别加入空白血浆100／-L，摇
Table1 Resultsofrecoverytest(n一5)
匀后按血样预处理项下处理、测定。结果见表1。可
见，不同质量浓度下均有大而稳定的回收率。
2．8血药浓度的测定：取制备的血浆样品，按上述
色谱条件测定，由标准曲线计算出阿魏酸的血药浓
度。对照组小鼠血浆中阿魏酸质量浓度为(62．10±
5．35)ng／t-L(咒一10)，实验组小鼠血浆中阿魏酸质
量浓度为(115．87±9．40)ng／弘L(咒一10)。
3讨论
目前我国研究中药的体内代谢及中药主要有效
成分体内检测方法是一个比较薄弱的环节。人、大鼠
血清中阿魏酸的HPLC法测定已有相关文献报
道[1~3]，但多采用以香豆素为内标的内标法进行，可
消除一部分由于预处理过程中造成的误差。经反复
对比试验，本实验建立了外标法直接测定小鼠血浆
中阿魏酸的质量浓度，操作相对简便，平均回收率为
94．85％，符合体内药物浓度测定的要求。
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万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月·525·
筛选了适宜的流动相甲醇一水一冰醋酸(36．4：
63：0．6)，在此条件下，阿魏酸与血浆中蛋白质杂
峰、内源性物质、当归提取物的其他成分以及这些成
分的体内代谢物和结合性成分均能很好的分离，峰
形良好，且阿魏酸保留时间适宜(约10min)，最低
检测质量浓度1．49ng／pL，精密度好。
本检测方法的建立为活血温里复方中活血药主
要有效成分阿魏酸血药浓度和生物利用度的研究提
供了可靠的检测方法。
References：
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(中草药)，2004，35(1)：36—38．
从枳壳中分离纯化新橙皮苷对照品
许永兴，瞿海斌，程翼宇+
(浙江大学中药科学与工程学系，浙江杭州 310027)
摘要：目的从枳壳提取物中分离纯化高纯度新橙皮苷。方法枳壳提取物经大孔树脂处理后，用正丁醇萃取分
离、浓缩，将浓缩物重结晶3次。正丁醇萃取物的浓缩是关键。结果优化的枳壳提取物中分离新橙皮苷的工艺使
新橙皮苷的纯化得率达48．6％，纯度达98．7％。结论该方法简单易行，为制备高纯度的新橙皮苷提供了一种经
济的、可行的方法。
关键词：枳壳；新橙皮苷；分离；纯化
中图分类号：R284．2；R286．02文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)04—0525—03
Isolationandpurificationofne hesperidinreferencesubstancefromFructusA rantii
XUYong—xing，QUHai—bin，CHENGYi—yu
(DepartmentofChineseMedicineScienceandEngineering，ZhejiangUniversity，Hangzhou310072，China)
Abstract：ObjectiveToisolatendpurifyhigh—purityneohesperidinf omFructusA rantiiextract．
MethodsFructusA rantiiextractwastreatedbymacroporousresina dextractedby卵一butanol，then
concentratedandsomesolidwasprecipitated．Aftercrystallizingtheprecipitatethreimes，neohesperidin
wasobtained．Theconcentrationof孢一butan01extractwasoptimized。whichwasofgreatimportanceinthe
wholepreparation．ResultsTheyie dofneohesperidinwas48．6％andpurityofneohesperidinwasupto
98．7％inFructusA rantiiextract．ConclusionHigh—purityneohesperidincouldbepreparedfeasiblyand
economicallybyproposedmethod．
Keywords：FructusAurantii；neohesperidin；isolation；purification
新橙皮苷属于黄酮体化合物中的二氢黄酮类，
通常在酸橙、枳实、枳壳、陈皮中含量较高。新橙皮苷
经氢化处理后形成新橙皮苷二氢查耳酮，是一种特
殊的甜味剂，其甜度是蔗糖的1000倍。而且新橙皮
苷具有较好的耐热性和耐酸性，在食品的杀菌和加
工过程中很稳定，可广泛应用于热处理的食品。目
前，新橙皮苷在欧美一些国家已开始应用，但由于生
产成本较高，使用受到限制。另外，也有报道新橙皮
苷二氢查耳酮是一种前景广阔的新型药用赋型剂。
新橙皮苷多从柑橘类植物中提取，但柑橘类植
物中除了新橙皮苷之外，往往还含有柚皮苷、橙皮苷
等理化性质非常接近的黄酮苷类物质，这使得从柑
橘类植物中分离新橙皮苷非常困难。DelRio等研究
了西班牙产的不同品种、不同季节的柑橘中的新橙
皮苷、柚皮和橙皮苷的含量，选择了一个新橙皮苷含
量很高，而柚皮和橙皮苷含量很少的柑橘品种来提
收稿日期：2004—06—04
基金项目：国家自然科学基金重大研究计划资助项目(90209005)
作者简介：许永兴(1976一)，男，浙江东阳人，硕士研究生，研究方向为制药工程。
*通讯作者E—mail：chengyy@zju．edu．en
万方数据
HPLC法测定灌胃当归胡椒复方小鼠血浆中阿魏酸的含量
作者： 裴瑾， 杨祖贻， 刘荣敏， 陈佳， 万德光， 胡荣， PEI Jin， YANG Zu-yi， LIU Rong-
min， CHEN Jia， WAN De-Guang， HU Rong
作者单位： 裴瑾,万德光,胡荣,PEI Jin,WAN De-Guang,HU Rong(成都中医药大学药学院,四川,成都
,610075)， 杨祖贻,刘荣敏,陈佳,YANG Zu-yi,LIU Rong-min,CHEN Jia(四川省肿瘤研究所
,四川,成都,610041)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(4)
被引用次数： 2次
参考文献(3条)
1.Liu W J;Yang L;Qin W J Determination of ferulic acid in rat serum by HPLC after oral
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200504017.aspx