全 文 ：HPLC法测定心舒口服液中阿魏酸血浆浓度
及其在大鼠体内的药动学研究
夏东亚,郭 涛,潘文灏, 隋 因,党大胜
(沈阳军区总医院 药剂科,辽宁 沈阳 110016)
摘 要:目的 建立测定血浆中阿魏酸浓度的 HPLC 法,并用于心舒口服液中阿魏酸在大鼠体内的药动学研究。方
法 色谱柱为 Nucleo sil C18柱, 流动相为甲醇-水-冰乙酸( 35∶65∶0. 1) ,流速为 1. 0 mL / min, 检测波长为 320 nm。
以替硝唑为内标, 血浆样品酸化后用醋酸乙酯提取。结果 标准曲线线性范围 0. 25～16. 0 mg / L , r= 0. 999 2。阿魏
酸平均回收率 96. 9%～100. 6% ,最低检测浓度为 0. 2 m g/ L ,日内 RSD< 3. 0% , 日间RSD< 5. 3%。心舒口服液中
阿魏酸在大鼠体内的药-时曲线符合二房室模型, T 1/ 2为 12. 6 min, T 1/ 2为 305 min。结论 方法简便、快速、准确、重
现性好, 适用于阿魏酸血药浓度测定及药代动力学研究。
关键词: 心舒口服液;阿魏酸; 高效液相色谱;药动学
中图分类号: R285. 61; R286. 02 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2004) 01 0036 03
Determination of plasma level of ferulic acid in Xinshu Oral Liquid
by HPLC and its in vivo pharmacokinetics in rats
XIA Dong-ya, GU O T ao , PAN Wen-hao , SU I Yin, DANG Da-sheng
( Depar tment of Pharmacy , Gener al Hospital of Shenyang M ilitar y Region, Shenyang 110016, China)
Abstract: Object T o develop an HPLC method for the determination of plasma level o f fer ulic acid
and study the in vivo pharmacokinet ics in rats. Methods The used analyt ical column w as Nucleosil C18 .
The mobile phase w as methanol-water-acet ic acid ( 35∶65∶0. 1) . The f low rate w as 1. 0 mL/ min and de-
tection wavelength at 320 nm . Plasma samples w ere prepared fo r analysis by addit ion of internal standar d
( T inidazole) follow ed by ext ract ing w ith ethy l acetate. Results Linear caliration curve w as obtained by
plot ting concentrat ion vs peak area ratio over the rang 0. 25—16. 0 mg/ L w ith a corr elat ion coef ficient of
0. 999 2. T he aver age recovery of ferulic acid w as 96. 9%—100. 6%. T he minimum detectable concentra-
tion of ferulic acid w as 0. 2 mg / L . T he relative standard deviations for w ithin-day and betw een-day s were
less than 3. 0% and 5. 3% , respect ively. T he plasma concentrat ion-t ime cur ve of ferulic acid in Xinshu O-
ral Liquid ig g iv en to rats was found to fit a tw o-compartments model w ith T 1/ 2 of 12. 6 m in and T 1/ 2 of
305 m in. Conclusion The method is simple, rapid, accurate, and precise, w hich can be used for the de-
term inat ion of plasma level of ferulic acid and the study of it s pharmacokinetics.
Key words : Xinshu Oral Liquid; fer ulic acid; HPLC; pharmacokinet ics
阿魏酸( ferulic acid)是当归、川芎中的主要有
效成分之一, 具有抗氧化、抑制血小板聚集及抗血栓
形成等作用。我院研制的心舒口服液是由当归、川
芎、红花等组方,经科学方法提取有效成分精制而成
的中药复方制剂[ 1]。具有疏通心血管、降低血液黏滞
度、增加冠脉血流量、改善心肌缺氧、减轻心脏负荷
等作用。临床初步应用结果表明,治疗冠心病心绞痛
总有效率达 86. 9%。为配合该药的研制及开展中药
复方效应成分的药动学研究, 本实验建立了测定血
浆中阿魏酸浓度的 HPLC 法, 并用于心舒口服液中
阿魏酸在大鼠体内的药动学研究。
1 材料与方法
1. 1 仪器: Waters高效液相色谱仪, 包括 510型高
压泵、484 型紫外检测器 (美国 Waters 公司 ) ;
SC1100 色谱工作站(北京化工大学) ; YHK—Ⅱ型
液体快速混合器(江西医疗器械厂)。
1. 2 药品和试剂:阿魏酸对照品由中国药品生物制
品检定所提供;替硝唑精制品(湖北广济药业有限公
司) ; 心舒口服液, 由本院药剂科制剂室提供, 批号
980507,阿魏酸含量 0. 20 mg / mL; 水为亚沸蒸馏水,
·36· 中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 35 卷第 1 期 2004年 1月
收稿日期: 2003-04-23作者简介:夏东亚( 1953—) ,男,江苏省建湖人,主任药师,硕士生导师,主要从事临床药理研究,已发表研究论文 50篇。
T el: ( 024) 23051430
甲醇为色谱纯,醋酸乙酯、盐酸等试剂均为分析纯。
1. 3 动物: Wistar 大鼠由沈阳军区总医院医学动
物实验科提供, 编号 SZD980512, 雌雄兼用, 体重
220～330 g。
1. 4 方法
1. 4. 1 色谱 条件: 色谱柱为 Nucleosil C18柱
( 200 mm×5 mm, 7 m) , 流动相为甲醇-水-冰醋酸
( 35∶65∶0. 1) ,流速为 1. 0 mL/ min, 检测波长为
320 nm, 柱温为室温。
1. 4. 2 对照品储备液配制:精密称取阿魏酸对照品
适量,用甲醇溶解后,配成 1. 00 mg/ mL 的对照品储
备液,置冰箱 4℃保存,临用时将对照品储备液用甲
醇稀释至所需浓度。
1. 4. 3 血浆供试品处理:取大鼠血浆 200 L, 加内
标替硝唑液 10 L (甲醇溶解后定容为 0. 1 mg/
mL) ,涡旋 10 s, 再加入 0. 6 mo l/ L 盐酸 0. 1 mL 和
醋酸乙酯 2. 5 mL, 涡旋 5 min, 3 000 r / min离心 10
min,取有机相2 mL, 置60 ℃水浴氮气流吹干, 残留
物用流动相 100 L 溶解后进样 20 L。
1. 4. 4 大鼠体内的血药浓度及药动学参数测定:取
Wistar 大鼠 10 只, 禁食 12 h, 行颈静脉持久导管
术[ 2]。在乙醚麻醉下将大鼠颈部一侧锁骨上 0. 5 cm
处皮肤作 1 cm 纵切口,分离颈静脉,用常规插管法
插入长 12～15 cm 内含 9 g / L 氯化钠注射液的医用
硅胶管(内径 0. 51 mm, 外径 0. 94 mm) ,导管经皮
下从颈背部引出并固定。分别 ig 心舒口服液的浓缩
液 2 mL(含阿魏酸 1. 00 mg / mL ) , 于给药后 2, 5,
10, 20, 40, 60, 90, 120, 180, 240 m in 分别由颈静脉
取血 0. 5 mL, 置肝素化试管中,分离血浆,按 1. 4. 3
项下方法处理后进样测定。
2 结果
2. 1 色谱行为: 在上述色谱条件下,阿魏酸与空白
血浆中杂质峰及内标峰达到良好分离,内标和阿魏
酸的保留时间为 4. 5和 8. 6 min。色谱图见图 1。
2. 2 阿魏酸血浆标准曲线及最小检测浓度:在含有
200 L 空白血浆的具塞试管中分别加入不同量阿
魏酸对照品溶液, 使浓度分别为 0. 25, 0. 5, 1. 0,
2. 0, 4. 0, 8. 0和 16. 0 mg/ L, 按照 1. 4. 3项下操作,
经色谱分离, 计算样品峰与内标峰面积之比( A S/
A i)。以 A S / A i 为横坐标,阿魏酸浓度C( mg/ L )为纵
坐标进行回归, 得血浆中标准曲线。其回归方程为
C= 1. 875 5 A S / A i+ 0. 180 8, r= 0. 999 2,线性范围
0. 25～16. 0 mg / L。当S / N≥2时,最小检测浓度为
0. 2 mg / L。
A-空白血浆 B-给药后血浆 1-内标 2-阿魏酸
A-blank plasma B-plasma after dr ug admin ist rat ion
1-internal standard 2-ferul ic acid
图 1 大鼠血浆中阿魏酸的 HPLC图谱
Fig. 1 Chromatogram of ferulic acid in rat plasma
2. 3 精密度试验:在空白血浆中分别加入不同量的
阿魏酸对照品溶液,制备成阿魏酸血浆浓度分别为
1. 0, 4. 0 和 12. 0 mg / L 的供试品各 5 份, 按照
1. 4. 3项下操作, 测得低、中、高 3种阿魏酸浓度的
日内 RSD ( n= 5)分别为 1. 4%, 3. 0%和 3. 0%。另
取上述不同浓度的血浆供试品,同法处理,重复测定
5 d, 测得 3 种浓度的日间 RSD ( n = 5) 分别为
4. 1% , 5. 3%和 3. 1%。
2. 4 回收率试验:制备阿魏酸浓度分别为 1. 0, 4. 0
和 12. 0 mg/ L 的血浆供试品各 5份, 按照 1. 4. 3项
下操作, 进样测定,计算回收率。3种浓度的平均回
收率分别为 100. 6%, 96. 9%和 99. 0%, RSD 分别
为 1. 4% , 2. 9%和 3. 0%。
2. 5 药动学测定结果:用 3P87实用药动学程序对
10只大鼠 ig 心舒口服液后阿魏酸的血浆浓度-时间
数据进行曲线拟合, 经模型判断,符合一级吸收二房
室模型,拟合曲线见图 2,其药动学参数见表 1。
图 2 ig 给药后阿魏酸在大鼠体内的平均
血药浓度-时间曲线
Fig. 2 Mean blood concentration-time curve of
f erulic acid in rat after ig administration
·37·中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 35 卷第 1 期 2004年 1月
表 1 大鼠 ig给药后阿魏酸的药动学参数( n= 10)
Table 1 Pharmacokinetic parameter of ferulic acid
in rats aft er ig administration ( n= 10)
药动学参数 单 位 数 值
A mg/ L 4. 987±8. 220
min- 1 0. 263±0. 477
B mg/ L 1. 309±1. 580
min- 1 0. 002 73±0. 001 27
K a min- 1 0. 489±0. 609
V c/ F L/ kg 4. 793±3. 131
T 1/ 2 min 12. 62±12. 17
T 1/ 2 min 305. 04±137. 93
T 1/ 2K a min 6. 54±8. 69
K 21 min- 1 0. 070 5±0. 085 7
K 10 min- 1 0. 008 05±0. 008 60
K 12 min- 1 0. 187±0. 386
AUC min·mg·L 498. 89±482. 45
CL / F mL/ min 6. 38±3. 64
T max min 22. 39±28. 71
Cmax mg/ L 1. 504±1. 076
3 讨论
阿魏酸为弱酸, 在酸性条件下更易被有机溶剂
提取完全。曾试用血浆供试品沉淀蛋白直接进样,血
浆样品酸化后乙醚或醋酸乙酯提取等方法进行样品
处理。实验结果表明,血浆供试品酸化后用醋酸乙酯
提取的杂质含量少且阿魏酸提取效率高。本实验所
建立的方法可测定复方制剂给药后体内的阿魏酸浓
度,方法回收率高, 3个浓度下测得的回收率均大于
95%; 精密度好, 日内 RSD 小于 3. 0% , 日间 RSD
小于 5. 3%。方法灵敏, 阿魏酸的最小检测浓度为
0. 2 mg/ L , 故本法适用于阿魏酸的血药浓度测定及
药动学研究。
阿魏酸单体及单方中的阿魏酸在不同动物及人
体的药动学已有报道[ 3～5] , 多为一室模型, iv, ig 或
p o给药后血药浓度下降迅速, T 1/ 2较短,均小于 1 h。
复方中阿魏酸 po 后体内的分布与代谢为二室模
型[ 6]。实验结果表明,阿魏酸以方剂口服液形式进入
大鼠体内后,自胃肠道吸收迅速, ig 给药后平均 22
m in即达血药浓度峰值, 随后阿魏酸在大鼠体内迅
速分布, 其药-时曲线符合二室模型, T 1/ 2为 12. 6
m in, T 1/ 2为 305 min,与文献报道[ 6]川芎单方中阿魏
酸的 T 1/ 2 11. 5 min 比较,明显延长, 提示复方制剂
中多种成分可能对阿魏酸在大鼠体内的药动学过程
有显著影响。
给药后 5 h 阿魏酸的血药浓度已低于最低检出
浓度, 接近平均峰浓度的 1/ 10, 基本符合新药药动
学研究对采血时程的要求。
References:
[1] Guo T , Ma J W, Ding L X, et al . Studies on Xinsh u Oral Liq-
uid [ J] . Chin P harm J ( 中国药学杂志) , 1997, 32 ( 1) : 21-
23.
[2] M eng J R. Permanen t cath eteriz at ion of the jugular vein and
h epat ic portal vein in rats and it s applicat ion [ J] . A cta P harm
S in (药学学报) , 1987, 22( 5) : 326-327.
[3] Chang M X, Xu L Y, T ao J S, et al . Studies on metabolism
and pharmacokin et ics of fer ulic acid in mice [ J ] . China J Chin
Mater Med (中国中药杂志) , 1993, 18( 5) : 300-302.
[4] Chang M X, Xu L Y, T ao J S, et al . Studies on ph arm aco-ki-
net ics of ferulic acid in C huanxiong in rabb it s [ J] . Ch in P harm
J (中国药学杂志) , 1996, 31( 1) : 43.
[5] Shang G W, Huang X, Jiang Y P, et al . Pharmacok inet ics of
ferulic acid in healthy after adminis tering a s ingle dose of cl ini-
cal decoction of Chuanxion g [J ] . Phar macol Clin Ch in Mate r
Med (中药药理与临床) , 1996, 12( 6) : 38-40.
[6] Shang G W , Jian g Y P, Huang X, et al . Determ inat ion of f ree
ferulic acid in s erum of volunteers h ealthy after adm inistering
Com pound Chuan xiong Decoct ions by RP-HPLC [ J] . Chin
P harm J (中国药学杂志) , 1997, 32( 12) : 761-764.
多指标综合评分法优选葛根提取工艺
张 彤, 徐莲英,陶建生,姚震宇
(上海中医药大学中药学院,上海 201203)
摘 要: 目的 优选葛根提取工艺。方法 采用正交试验法考察乙醇提取葛根的各影响因素,以多指标综合评分法
进行数据分析, 优选工艺条件。结果 葛根乙醇提取的最佳条件为: 80%乙醇提取两次,第一次 12 倍量乙醇 ,提取
1 h, 第二次 10倍量乙醇提取 30 m in。结论 采用综合评分法优选葛根提取工艺能较好地保证制剂的质量。
关键词: 葛根;葛根素; 总黄酮;正交试验; 综合评分法
中图分类号: R284. 2; R286. 02 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2004) 01 0038 03
·38· 中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 35 卷第 1 期 2004年 1月
收稿日期: 2003-04-26基金项目:上海市教委基金资助( 01QN 80、02C Z24)作者简介:张 彤( 1972—) ,男,浙江省杭州市人,副教授, 1993年毕业于南京大学化学专业,获理学学士学位, 1996年—2003年获上海中医药大学医学学士、硕士、博士学位,现为上海中医药大学教学实验中心副主任,目前研究工艺对中药有效成分的影响,并在多项新药的研制中负责工艺优选和质量标准的制定。Tel: ( 021) 51322318、51322315 E-mail: zhangtdmj@sohu. com