全 文 ：RP-HPLC法测定白毛夏枯草中杯苋甾酮的含量
刘　斌1 ,马桂萍2 ,石任兵 1
( 1. 北京中医药大学中药学院 ,北京　 100102; 2. 宁夏康雅药业有限公司 ,宁夏 银川　 750002)
　　白毛夏枯草为唇形科筋骨草属植物白毛夏枯草
Ajuga decumbens Thunb.的干燥全草 ,在我国南方
诸省有广泛分布。该药始载于《本草拾遗》 ,具有清热
解毒、祛痰止咳、凉血止血的功效 ,可用于治疗肺热
咳嗽、咽喉肿痛、痈肿疮疖等症。 筋骨草属植物主要
含有二萜类、环烯醚萜类、植物蜕皮甾酮类和黄酮类
成分 [1 ] ,其中从白毛夏枯草中分离得到的杯苋甾酮
对由肿瘤细胞生长促进剂 12-O-tet radecanoylphorbol-
13-acetate( TPA)诱导产生的 Epstein-Barr病毒早
期抗原 ( EBV -EA)具有强烈的抑制作用 ,表现出潜
在的抗肿瘤活性 [2 ]。为充分利用白毛夏枯草这一资
源 ,更好地控制白毛夏枯草质量 ,本研究建立了 RP-
HPLC测定白毛夏枯草中杯苋甾酮含量的方法。
1　仪器与试药
1. 1　仪器: Waters 515高效液相色谱仪 , 2487紫外
检测器 , Millennium32化学工作站 (美国 Waters公
司 ) ; AE-240型 1 /104电子分析天平 (日本岛津公
司 ) ; Hi tachi U-2000型紫外可见分光光度计 (日本
岛津公司 ) ;超声波清洗器 ( 100 W ,无锡超声电子设
备厂 )。
1. 2　试药:白毛夏枯草药材购自浙江省长兴县 ,经
北京中医药大学中药资源研究室沈连生教授鉴定 ;
杯苋甾酮对照品: 从白毛夏枯草中分离得到 , TLC
及 HPLC检测均为单峰 ,经 UV、 IR、 1 HNMR、
13 CNMR鉴定为杯苋甾酮 , HPLC归一化测定纯度
为 99. 17% ,符合定量要求。乙腈为色谱纯 (美国
Fisher公司 ) ,水为重蒸水 ,其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: 十八烷基硅烷键合相
YWG - C18柱 (北京分析仪器厂 , 4. 6 mm× 250 mm ,
10μm) ,流动相: 乙腈 -水 ( 22∶ 78) ,流速: 1. 0 mL /
min,柱温: 室温 ,检测波长: 245 nm,灵敏度: 0. 08
AU FS。在此条件下杯苋甾酮与样品中其他组分能
达到基线分离。对照品与样品 HPLC色谱图见图 1。
2. 2　检测波长的选择:取杯苋甾酮对照品溶液 ,照
A-杯苋甾酮对照品　 B-样品　* -杯苋甾酮
图 1　HPLC图
分光光度法 ,在 200～ 700 nm波长内进行扫描 ,记
录紫外可见吸收光谱。 杯苋甾酮对照品在 245 nm
波长处有最大吸收 ,故确定 245 nm为检测波长。
2. 3　对照品溶液的制备:精密称取杯苋甾酮对照品
2. 14 mg ,置 100 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至
刻度 ,摇匀 ,备用。
2. 4　样品提取条件的筛选
2. 4. 1　提取溶剂的选择: 取同一样品 4份 ,每份约
1 g,精密称定 ,分别加入甲醇、 70%甲醇、 50%甲醇、
水 20 mL,超声处理 40 min,称重 ,用相应溶剂补足
减失质量 ,过滤 ,取续滤液测定含量 ,见表 1。结果表
明 ,用甲醇提取样品 ,杯苋甾酮含量最高 ,故选用甲
醇为提取溶剂。
表 1　提取溶剂的选择 ( n= 3)
提取溶剂 甲　醇 70%甲醇 50%甲醇 水
含量 (% ) 1. 25 1. 03 0. 72 0. 61
2. 4. 2　提取方法的选择: 取同一样品 3份 ,每份约
1 g ,精密称定 ,加甲醇 20 mL,称重 ,分别冷浸 24 h ,
回流提取 1 h和超声处理 40 min,称重 ,加甲醇补足
减失质量 ,过滤 ,取续滤液测定含量 ,见表 2。结果表
明 ,采用加热回流法与超声处理法提取 ,杯苋甾酮含
量相近。 为方便操作 ,选择超声提取方法。
2. 4. 3　提取时间的选择: 取同一样品 5份 ,每份约
1 g ,精密称定 ,加甲醇 20 mL,称重 ,分别超声处理
·898· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 10期
收稿日期: 2001-12-25作者简介:刘　斌 ( 1967-) ,男 ,硕士 ,副教授 , 1989年毕业于北京中医药大学 ,研究方向为中药活性成分及中药质量控制方法研究。
Tel: ( 010) 64286983　 E-mai l: liu binyn@ 263. net
20, 30, 40, 50和 60 min,称重 ,加甲醇补足减失质
量 ,过滤 ,取续滤液测定含量 ,结果见表 3。测定结果
表明超声提取 40 min即可提取完全。
表 2　提取方法的选择 (n= 3)
提取方法 冷浸过夜 加热回流 超声处理
含量 (% ) 0. 97 1. 20 1. 22
表 3　提取时间的选择 (n= 2)
提取时间 ( min) 20 30 40 50 60
含　　量 (% ) 1. 09 1. 15 1. 24 1. 24 1. 22
2. 5　线性关系考察:精密吸取杯苋甾酮对照品溶液
4, 8, 12, 16, 20μL注入液相色谱仪 ,按上述色谱条
件测定峰面积。以峰面积为纵坐标 ,杯苋甾酮量为横
坐标 ,绘制标准曲线 ,计算得回归方程为 Y =
17 182. 356X+ 241. 514, r= 0. 999 5。结果表明 ,杯
苋甾酮在 0. 085 6～ 0. 428μg内线性关系良好。
2. 6　精密度试验: 精密吸取上述对照品溶液 10
μL,重复进样 6次 ,测定 ,计算得峰面积 RSD=
1. 16% 。
2. 7　稳定性试验: 分别取对照品溶液和样品溶液 ,
于配制后 0, 1, 2, 4, 6, 12, 24 h,依法测定。结果表明
在 24 h内均保持稳定。
2. 8　重现性试验: 取一批样品 ,按样品含量测定项
下方法测定 5份 ,杯苋甾酮含量的 RSD= 2. 19%。
2. 9　回收率试验:取 1号样品 5份 ,每份约 0. 5 g ,
精密称定 ,分别精密加入上述杯苋甾酮对照品溶液
8 mL,再加甲醇 12 mL,称重 ,以下按样品含量测定
项下方法测定含量 ,计算杯苋甾酮平均回收率为
101. 59% , RSD= 1. 13% 。
2. 10　样品含量测定: 取白毛夏枯草样品约 1 g ,精
密称定 ,加甲醇 20 mL,称重 ,超声处理 40 min,称
重 ,加甲醇补足减失质量 ,过滤 ,取续滤液 ,微孔滤膜
过滤后作为样品溶液。分别精密吸取样品溶液和对
照品溶液各 10μL,进样 ,测定峰面积 ,计算含量。结
果见表 4。
表 4　白毛夏枯草中杯苋甾酮的含量测定 (n= 3,% )
样品 杯苋甾酮含量 R SD
1 0. 036 1. 46
2 0. 053 1. 81
3 0. 042 2. 25
3　讨论
3. 1　经试用乙腈 -水或甲醇-水的不同比例作为流
动相 ,结果以乙腈-水 ( 22∶ 78)分离最好。
3. 2　白毛夏枯草中含有较多叶绿素 ,易污染色谱
柱 ,为有效延长色谱柱寿命 ,提高分离效能 ,宜在色
谱柱前加装保护柱。
3. 3　本实验建立的含量测定方法精密度良好 ,回收
率合格 ,且操作简便 ,可用于白毛夏枯草中杯苋甾酮
的含量测定。
参考文献:
[1 ]　刘　斌 ,石任兵 ,葛小侠 ,等 . 筋骨草属植物化学成分与药理活
性 [ J] . 国外医药 -植物药分册 , 2001, 16( 3): 96-101.
[2 ]　 Tak asaki M , Tokuda H, Nishino H, et al . Cancer ch emop re-
ven tive agen ts ( anti tumor-promoters) f rom Aju ga decumbens
[ J ]. J Nat Prod, 1999, 62( 7): 972-975.
七种中药注射液与输液配伍后的不溶性微粒考察
张靖贤
(广西医科大学第一附院 药剂科 ,广西 南宁　 530021)
　　静脉输液中微粒过多会造成局部血管堵塞 ,供
血不足 ,产生静脉炎和水肿、肉牙肿、过敏反应、热源
样反应等 [1 ]。 静脉输液中不溶性微粒对人体的危害
已引起国内外的高度重视。 中药注射剂静脉给药起
效快、作用持久、副作用小 ,临床上常与输液配伍静
滴 ,而其与输液配伍后 ,配伍液的澄明度合格但不溶
微粒超标 ,潜在危害较大。 本研究对几种中药注射剂
与输液配伍后的配伍液进行了不溶性微粒检测 ,证实
了输液配伍后澄明度合格而不溶性微粒超标的可能
性 ,并观察到不同粒径的不溶性微粒倍增程度不同。
1　材料与仪器
1. 1　实验材料:葡萄糖注射液 ( GS, 250 mL∶ 12. 5
g ,批号: 20020205-A51,广西浦北制药厂 ) ,氯化钠
注射液 ( NS, 250 mL∶ 2. 25 g ,批号: 20020126-C24,
广西浦北制药厂 ) ,甘力欣注射液 ( A, 10 mL,批号:
200109193,连云港正大天晴药业有限公司 ) ,复方丹
参注射液 ( B, 2 mL,批号: 010947,上海第一制药
厂 ) ,清开灵注射液 ( C, 10 mL,批号: 01051403,北京
·899·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 10期
收稿日期: 2002-04-06