全 文 ：HPLC法测定西洋参茎叶总皂苷降解物中
20(S )-人参皂苷 Rh2的含量
丁长江 ,孟　勤 ,李　政 ,张明恺
(吉林大学药学院 ,吉林 长春　 130021)
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 03 0229 02
　　 20( S ) -人参皂苷 Rh2对多种癌细胞具有较强
的抑制作用 ,且能使癌细胞在其增殖过程中产生一
种诱导作用 ,诱导癌细胞逆转为正常细胞。 但 20
( S ) -人参皂苷 Rh2在自然界存在甚少 ,红参中仅为
十万分之一。为了获得大量 20( S ) -人参皂苷 Rh2 ,一
般采用总皂苷提纯 ,制备二醇组皂苷 ,再进行降解制
备 20( S ) -人参皂苷 Rh2。本文采用 HPLC法测定西
洋参降解物中 20( S) -人参皂苷 Rh2的含量 ,取得满
意结果。
1　仪器与试药
美国 Waters高效液相色谱仪 ; Wa ter 2478双
波长紫外检测器 ; Ch romstation数据处理系统 ;对
照品 20( S ) -人参皂苷 Rh2由本室自制 ,经高效液相
色谱归一化法测定 ,其含量为 98%以上。甲醇为色
谱纯 ,水为双蒸水 ,其余试剂均为分析纯。
2　实验方法与结果
2. 1　色谱条件:色谱柱为惠普 Zorbax ODS柱 ( 4. 6
mm× 250 mm, 5μm);流动相: 甲醇 -水 -磷酸 ( 87∶
13∶ 0. 2) ;流速 0. 8 mL /min;柱温: 40℃ ;检测波
长: 203 nm。在此条件下 20( S) -人参皂苷 Rh2与其
它峰分开。见图 1。
2. 2　测定波长的选择: 取 20( S ) -人参皂苷 Rh2对
照品适量 ,经紫外分光光度计在 190～ 300 nm波长
下扫描 ,结果 20( S) -人参皂苷 Rh2在 203 nm处波
长有最大的吸收 ,故选择 203 nm作为测定波长。
2. 3　线性关系考察:精密称取 20( S) -人参皂苷 Rh2
6 mg置于 10 m L量瓶中 ,加甲醇配制成每毫升含
0. 6 mg的溶液。 精密吸取对照品溶液 1, 2, 4, 6, 8,
10μL,注入液相色谱仪中 ,按上述色谱条件测定 ,以
进样量 (μg )为横坐标 ,峰面积积分值为纵坐标 ,绘
制工作曲线。 回归方程为 Y = 740 967. 8X - 95
128. 7, r= 0. 999 9。进样量在 0. 6～ 6μg呈良好线性
关系。
Ⅰ -对照品　Ⅱ -样品　* -20( S )-人参皂苷 Rh2
图 1　 20(S )-人参皂苷 Rh2的 HPLC图
2. 4　稳定性实验:精密吸取同一样品溶液 10μL,
每间隔 1 h进样一次 ,共进样 6次。结果表明样品溶
液在 5 h内基本稳定 , RSD为 0. 72% (n= 6)。
2. 5　精密度试验:精密吸取上述对照品溶液 5μL,
重复进样 5次 , 20( S )-人参皂苷 Rh2峰面积的 RSD
为 0. 33%。
2. 6　重现性试验: 精密吸取同一批样品溶液 10
μL,依次平行测定 5次 ,结果其峰面积 RSD 为
0. 85%。
2. 7　回收率实验:精密称取已知含量的同一批样品
20 mg,分别加入对照品适量 ,依法测定 ,计算回收
率。平均回收率为 99. 62% , RSD为 0. 56% (n= 5)。
2. 8　样品测定:精密称取本品 10 mg ,置 10 mL量
瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,过滤 ,取续滤液为供
试品 ,吸取 10μL,注入高效液相色谱仪中进行分
析 ,结果 3批样品中 20( S ) -人参皂苷 Rh2的含量分
别为 28. 41% , 27. 84% , 29. 07% , RSD为 2. 16% 。
3　小结与讨论
本文试用过的流动相有: 85%的甲醇溶液 , 87%
甲醇溶液 ,甲醇-0. 04%磷酸溶液 ,甲醇-0. 2%磷酸
·229·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 3期
收稿日期: 2001-08-24
溶液 ,最终选用甲醇-水 -磷酸 ( 87∶ 13∶ 0. 2)为流动
相 ,结果 20( S ) -人参皂苷 Rh2峰与其它峰完全达到
基线分离 ,使定量结果准确。
RP-HPLC法测定翳障消胶囊中黄芩苷的含量
彭　勋 1 ,韩晓燕1 ,温　敏2 ,单国存 2 ,刘静洁 2
( 1. 秦皇岛市第三医院 ,河北 秦皇岛　 066000; 2. 秦皇岛市药品检验所 ,河北 秦皇岛　 066000)
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 03 0230 02
　　翳障消胶囊由柴胡、黄芩、菊花等中药制成 ,具
有疏散风寒、退赤消翳之功效 ,用于治疗角膜炎、角
膜溃疡等 ,疗效较好。 针对处方中的黄芩 ,本实验采
用高效液相色谱法进行了黄芩苷的含量测定 [ 1～ 3]。
1　仪器与试药
SP-8810高效液相色谱仪 , Spect ra 100型 UV-
Vis检测器 , TL9900色谱工作站。黄芩苷对照品 (含
量测定用 ,中国药品生物制品检定所 ,批号 715-
200010)。翳障消胶囊为秦皇岛市中医院生产。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: Kromasi l C18 ( 200 mm×
4. 6 mm, 5μm);流动相: 甲醇 -水 -磷酸 ( 50∶ 50∶
0. 3) ,流速为 1. 0 mL /min,检测波长为 280 nm,柱
温: 30℃ ,理论板数按黄芩苷峰计算应不低于 3
500。
2. 2　对照品溶液的制备:精密称取在 60℃减压干
燥 4 h的黄芩苷对照品适量 ,加甲醇制成每 1 mL含
60μg的溶液 ,作为对照品溶液。
2. 3　供试品溶液的制备: 取本品 10粒内容物 ,混
匀 ,精密称取 0. 75 g ,置 100 mL量瓶中 ,加 50%甲
醇适量 ,超声处理 30 min,放冷 ,加 50%甲醇稀释至
刻度 ,摇匀 ,滤过 ,弃取初滤液 ,取续滤液作为供试品
溶液。
2. 4　阴性对照液的制备:制不含黄芩的阴性制剂样
品 ,按供试品制备的方法制备阴性对照液。
2. 5　线性关系考察: 精密称取在 60℃减压干燥 4 h
的黄芩苷对照品 11. 30 mg ,置 100 mL量瓶中 ,加甲
醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,精密吸取此溶液用甲醇
稀释并配制成每 1 m L含黄芩苷 2. 26, 11. 3, 33. 9,
56. 5, 90. 4μg的对照品溶液。分别吸取 10μL,按上
述色谱条件测定 ,以峰面积积分值为纵坐标 ,黄芩苷
量为横坐标 ,绘制标准曲线 ,回归方程为: Y= 482
062. 8+ 592 681. 8X , r= 0. 999 8,线性范围 2. 26～
90. 4μg。 见图 1。
A-对照品　 B-样品　 C-阴性对照　* -黄芩苷
图 1　翳障消胶囊的 HPLC图谱
2. 6　精密度试验: 吸取对照品溶液 ( 56. 5μg /mL)
10μL,重复进样 5次 ,测定峰面积积分值 ,结果
RSD为 1. 48% 。
2. 7　稳定性试验:取供试品溶液 ,分别于制备后 0,
1, 2, 4, 6, 8, 12 h依法测定 ,结果 RSD为 1. 71%。
2. 8　加样回收试验:精密称取已知含量的供试品粉
末约 0. 1 g。精密称定 ,置 100 mL锥形瓶中 ,精密加
入对照品溶液 2 mL,在水浴中加热至对照品的溶剂
(甲醇 )挥尽 ,按供试品溶液制备方法制备 ,测定 ,计
算回收率 ,结果平均回收率为 99. 79% , RSD 为
1. 1% (n= 6)。
2. 9　空白对照液的制备与测定: 除黄芩外 ,按处方
比例称取其他各味药材 ,制成不含黄芩的制剂 ,与供
试品同法制成阴性对照液 ,测定 ,见图 1。 说明其他
药材及辅料均不干扰黄芩苷的测定。
2. 10　样品的测定:分别精密吸取供试品溶液各 10
μL,依上述色谱条件测定 ,结果见表 1。
·230· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 3期
收稿日期: 2001-08-07