全 文 ：5, 10, 20, 25μg /mL标准溶液。 将标准溶液注入色
谱仪 ,以峰面积为纵坐标 ,浓度为横坐标进行线性回
归 ,获得线性方程为 Y = 9 953+ 25 036X ( r =
0. 999 9)。
3. 2　样品的含量测定:选取 3个已知含二氧化硫的
药材样本 ,分别用酸蒸馏碘滴定法及酸蒸馏离子色
谱法测定样本中二氧化硫含量 ,结果见表 3。
表 3　碘滴定法与离子色谱法测定结果比较 ( mg /g )
药材 碘滴定法 离子色谱法
沙参 2. 45 2. 39
无花果 1. 57 1. 48
冬瓜条 2. 64 2. 74
4　讨论
二氧化硫是食物中常用的防腐剂 ,主要用于饮
料和干果等类食物 ,作用在于保持食物的色泽和防
止霉变 [3 ]。 在检测方面 ,酸蒸馏是常用的提取方
法 [4 ] ,而结果显示 ,碘滴定法和离子色谱法对提取液
中二氧化硫含量测定没有显著差别。 但值得留意的
是 ,在离子色谱法中 ,当进行移除溶液中残留双氧水
的时候 ,溶液必须呈阴性 ,否则会造成硫酸变成三氧
化硫而挥发掉 ,导致定量结果的误差。
在西药中 ,二氧化硫也是容许使用的 ,其使用范
围为 0. 01% ～ 1. 0% [5 ]。 结果显示 , 42个中药材样
品中未发现有二氧化硫含量超出这过范围 ,但当中
有 9个样本含二氧化硫超过 500μg /g ,其中包括一
些直接泡茶饮用的药材如人参、参须、菊花等。
显然 ,按总体水平来看 ,中药材中二氧化硫的含
量并不算太高 ,但由于它可能会对人体健康或中药
材的质量和疗效造成影响 ,所以有必要监管二氧化
硫在中药材中的使用。经实验证明 ,酸蒸馏碘滴定法
应用于测定中药材中二氧化硫的含量 ,有很高的准
确性和重现性 ,而且此法有简单和快捷等优点 ,可以
考虑作为监察中药材中二氧化硫含量的标准测定方
法。
参 考 文 献
1　 Branen A F, et al . Antimicrobials in Foods. Marcel Dekk er Inc,
1985: 191
2　 Fu ria T E. Handbook of Food Additiv e. CRC Press , 1972: 163
3　刘　程 ,等 .食品添加剂实用大全 . 北京:北京工业大学出版社 ,
1993: 15
4　 Manuals of Food Quality Cont rol. Vol. 2, FAO, 1979. 7
5　 Mar tindale, The Ext ra Pharmacopoeia. Th e Pharmaceutical
p ress , 1993: 1139
( 1999-05-24收稿 )
西洋参 DNA导入大豆实现遗传转化的研究
Ⅱ . 导入后代异黄酮类成分的含量测定
湖南中医学院中药系 (长沙 410007)　　刘塔斯
湖南农业大学植物科技学院　　　　　 麻　浩　田森林
日本名城大学生药学教研室　　　　　 川村智子
日本岐阜药科大学药草园研究室　　　 田中俊弘
摘　要　用高效液相色谱法测定了西洋参 DNA导入大豆后代的异黄酮类成分、大豆苷 ( daidzin)、大豆黄素
( daidzein)、染料木苷 ( genistin)、染料木素 ( g enistein)的含量 ,采用 Unisil Q C18柱 , 4. 6 mm× 250 mm,流动相
乙腈 -0. 003 mol /L磷酸氢二钠 ( 17∶ 83) ,流速 1. 0 mL /min,检测波长 254 nm ,结果表明 , 4种成分分离效果
好 ,成分含量发生了广泛变异 ,从中可筛选出有效成分含量较高的新材料。
关键词　西洋参 DN A导入大豆后代　大豆苷　大豆黄素　染料木苷　染料木素　 HPLC法
Genetic Transformation of Soybeans by Soaking Its Seeds with the Total DNA of American
Ginseng (Panax quinquefol ium ) Ⅱ . Determination of Isoflavone Content by HPLC
Depar tment of Chinese Mate ria M edica, Hunan Colleg e of T raditional Chinese M edicine ( Chang sha 410007)　 Liu Tasi
Colleg e o f Plant Science and Techno lo g y, Hunan Ag ricultur e Univ e rsity　 Ma Hao and Tian Senlin
Depar tment of Pha rmacognosy , Meijo Univ e rsity , Meijo , Japan　 Tomoko Kawamora
Gifu Pharmaceutica l Univ er sity , Japan　 Toshihir o Tanaka
Abstract　　 A method fo r the determination of isoflav one content in the t ransfo rmed progenies of
soybean by HPLC was reported. Using unisil Q C18 column ( 4. 6 mm× 250 mm , 5μm) , w ith a mobi le
·99·中草药　 Ch inese Tradi tional and Herbal Drugs　 2000年第 31卷第 2期
Address: Liu Tasi , Department of Chinese Materia Medica, Hunan College of Tradi ti onal Chines e Medicin e, Ch angsha
pha se of CH3 CN-0. 003 mo l /L Na2 HPO4 ( 17∶ 83) , a detecting waveleng th at 254 nm , and f low rate of 1. 0
m L /min, it w as found that the contents of daidzein, g enistein, daidzin and genistin in the t ransformed
progenies o f so ybean changed g reat ly and could be separated ef fectiv ely , w hich makes i t po ssible to
cultiva te and develop the best progeny for further development.
Key words　　 the t ransfo rmed progenies o f soybean wi th the total DN A of American Ginseng　
daidzin　 daidzein　 genistin　 genistein　 HPLC
　　我们已知道了将西洋参 DNA导入大豆后代的
形态性状变化 [1 ] ,本文主要讨论导入基因大豆后代
的品质评价 ,首先报道对其 4种有效成分:大豆苷、
大豆黄素、染料木苷 ,染料木素的含量测定。大豆苷
等成分具有降低心肌耗氧量 ,增加冠脉、脑血管流
量 ,缓解心绞痛 ,抗氧化 [2 ]等药效作用 ,染料木苷类成
分据日本癌学会和国内资料显示 [3, 4 ] ,对前列腺癌等
1-大豆黄素　 2-染料木素
3-大豆苷　 4-染料木苷
图 1　标准品色谱图
1-大豆黄素　 2-染料木素
3-大豆苷　 4-染料木苷
图 2　 Y10-12-2样品色
谱图
有一定的抑制作用 ,导入
后代中异黄酮类成分含量
如何 ,我们采用高效液相
法测定了 4种成分的含
量 ,以期望培育出有一定
药用价值或保健作用的栽
培大豆新材料和新品系 ,
以利开发应用。
1　仪器与试药
1. 1　仪器: Unisil Q C18
高效液相色谱仪 , Wa ter
510泵 ,检测器: 484可变波长
紫外检测器 ; 712自动注入装
置。测试地点:日本名城大学
生药学教研室。
1. 2　试药: 所有试剂为分析
纯或色谱纯。对照品:大豆苷
( daidzin ) , 大 豆 黄 素
( daidzein ) , 染 料 木 苷
( g enistin ) , 染 料 木 素
( genistein ) 购 于 日 本
Funakoshi Co. ,西洋参 DNA
导入大豆材料来自于湖南农
业大学 ,由课题组麻浩提供。
以上 4种保留时间: 大豆
黄素 5. 5 min,染料木素 7. 5
min,大豆苷 9. 8 min,染料木
苷 19. 0 min,色谱图见图 1～
3。
1. 3　色谱条件: Unisi l Q C18
1-大豆黄素　 2-染料木
素　 3-大豆苷　 4-染料
木苷
图 3　 Y10-30-1样品
色谱图
色谱柱 4. 6 mm× 250 mm , 5
μm,流动相: 乙腈 -0. 003 mol /
L磷酸氢二钠 ( 17∶ 83) ,流速
1. 0 m l /min,柱温 35℃ ,检测
波长 254 nm ,灵敏度 0. 020
AU FS,进样量 10μL。
2　方法与结果 [ 5]
2. 1　线性实验: 精密称取以上
4种对照品 ,用甲醇溶解 ,制成
浓 度 为 0. 01, 0. 02, 0. 03,
0. 04, 0. 05 mg /mL的标准溶
液。吸取溶液各 10μL分别进
样 ,测定峰面积 ,并以峰面积
( y )对样品浓度 (x )进行线性回归分析 ,分别得回归
方程为:
大豆苷: y = 6. 249 5× 105x - 188. 055, r =
0. 999 9,在 2. 588 0～ 33. 000 0μg /mL间呈线性关
系。
大豆黄素: y= 3. 461 2× 106x - 105. 476 7, r=
0. 999 9,在 6. 438 0～ 38. 627 0μg /mL间呈线性关
系。
染料木苷: y= 3. 479 3× 106x - 320. 547 6, r=
0. 999 8,在 3. 255 0～ 41. 500 0μg /mL间呈线性关
系。
染料木素: y= 2. 389 1× 106x - 911. 285 9, r=
0. 999 9,在 2. 011 0～ 17. 091 0μg /mL间呈线性关
系。
2. 2　稳定性实验: 准确分别吸取 4种对照品溶液
10μL,分别于 30, 60, 120 min进样测定 ,考察其稳
定性 ,结果表明 1 h内峰面积积分值稳定。
2. 3　回收率及精密度实验:精密吸取 4种对照品溶
液 ,在上述色谱条件下 ,直接测得其峰面积 ,重复测
定 4次 ,并计算回收率 ,测得结果见表 1。
2. 4　样品测定: 取大豆研磨粉碎 ,约 200 mg ,精密
称定 ,置具塞锥瓶中 ,加入甲醇 2 m L密封 , 35℃超
声处理 30 min,取出 ,静置 10 min,取上清液 ;残渣
加入甲醇 2 mL,照上法重复处理 ,合并滤液至刻度 ,
·100· 中草药　 Ch inese Tradi tional and Herbal Drugs　 2000年第 31卷第 2期
测试 ,进样量各为 10μL,分析结果见表 2。
表 1　回收率实验结果
样　品
进样浓度
( mg /mL)
峰面积
回收率
(% )
平均值
(% )
RSD (% )
(n= 4)
大豆苷 0. 038 6 23 894 23 869 23 919 23 892 99. 74 0. 085 5
大豆黄素 0. 016 5 56 530 57 006 57 489 57 008 100. 01 0. 686 8
染料木苷 0. 017 1 58 682 59 732 59 137 59 184 100. 08 100. 05 0. 726 4
染料木素 0. 041 5 98 595 98 465 98 724 98 593 100. 36 0. 107 2
表 2　导入基因大豆后代的异黄酮的含量 (mg /100 mg)
样品 大豆黄素 染料木素 大豆苷 染料木苷
Y10 -10-3 0. 000 5 0. 001 3 0. 009 5 0. 017 6
Y10 -12-1 0. 001 2 0. 001 5 0. 011 7 0. 010 4
Y10 -12-2 0. 010 2 0. 012 5 0. 057 3 0. 056 8
Y10 -15-3 0. 001 2 0. 001 9 0. 007 2 0. 012 0
Y10 -15-13 0. 001 1 0. 002 0 0. 018 3 0. 028 7
Y10 -30-1 0. 005 7 0. 008 4 0. 027 9 0. 030 1
Y10 -30-2 0. 004 8 0. 005 6 0. 018 8 0. 020 8
Y10 -30-3 0. 002 0 0. 003 8 0. 019 8 0. 032 4
Y10 -42-1 0. 000 8 0. 001 2 0. 011 1 0. 015 2
Y10 -43-2 0. 001 5 0. 002 4 0. 021 5 0. 031 4
Y10 -53-1 0. 001 0 0. 002 3 0. 011 5 0. 021 1
湘春豆 10号 0. 001 2 0. 001 7 0. 015 3 0. 018 5
3　小结
3. 1　对 12批样品 4种异黄酮类成分含量测定结果
表明 ,导入西洋参 DNA基因后的大豆异黄酮类含
量发生了广泛的变异 ,与样本湘春豆 10号比较 ,就
大豆黄素成分而言 ,高于受体亲本的样品数有 5个 ;
染料木素成分 ,有 8个样品明显高于亲本 ,大豆苷成
分 ,有 6个样品 ;染料木苷成分 ,有 7个样品。 其中
Y10-30-2, Y10-30-3, Y10-12-2, Y10 -30-1样品的 4种
成分含量大大的高于亲本湘春豆 10号。此结果也表
明 ,西洋参 DN A导入大豆后 ,提高了大豆的有效成
分含量 ,从中可望筛选出有效成分含量较高的株系
进一步栽培 ,培育出大豆新的种资源。
3. 2　经反复实验 ,此 HPLC法能同时测定大豆中
的 4种异黄酮类成分的含量 ,分离良好 ,方法比较简
便 ,快速。
参 考 文 献
1　麻　浩 ,等 .中草药 , 2000, ( 1): 51
2　郭建平 ,等 .中草药 , 1995, 26( 3): 163, ( 6): 298
3　白井智之 ,等 .第 57回日本癌学会总会 ,横滨 , 1998, 92
4　国家医药管理局中草药情报中心站编 .植物药有效成分手册 .
北京:人民卫生出版社 , 1986: 493
5　早川顺子 ,等 .药学杂志 , 1984: 104( 1): 50
( 1999-02-09收稿 )
SFE-HPLC测定银杏叶粗提物中黄酮类化合物的含量
第二军医大学药学院药物分析教研室 (上海 200433)　　 佳红 　柳正良
摘　要　采用超临界流体萃取法提取银杏叶粗提物中总黄酮苷 ,确定最佳萃取条件为: 压力 41 364 Pa;温度
60℃ ;静态萃取时间 4 min;动态萃取体积 4 m L;改性剂加入量 0. 2 m L乙醇 ;用 HPLC测定含量 ,结果表明:
本法简便快速 ,萃取完全 ,为银杏叶粗提物的分离、纯化、测定提供了一种有效可靠的方法。
关键词　超临界流体萃取法　银杏叶粗提物　黄酮类化合物　 HPLC法
　　银杏叶为银杏科植物银杏 Ginkgo biloba L.的
叶子 ,经现代药理和临床研究表明 [1 ] ,银杏叶提取物
可软化血管 ,增加冠状动脉血流量 ,对心绞痛 ,脑血
管疾病具有显著疗效 ,并广泛用于临床。而黄酮类化
合物为其主要有效成分之一 ,其制剂质量通过测定
黄酮含量来控制 [2, 3 ]。传统的提取方法均采用有机溶
剂提取 ,费时且残留有害溶剂 ,超临界流体萃取
( SFE)因其特有的高选择性、高效性及低毒害的优
点 ,在中草药的提取方面具有广泛应用 [4～ 6 ]。我们采
用 SFE技术萃取银杏叶粗提物中的黄酮类成分 ,用
HPLC测定含量 ,提取效率高 ,杂质少 ,具有一定的
优点。
1　试剂与仪器
1. 1　仪器: ISCO 100DX, 100DM泵 , SFX2-10M超
临界流体萃取仪 (美国 ISCO公司 ) , Wa ters高效液
相色谱仪 (美国 Waters) , N EC pow ermate 433电子
计算机 (日本 N EC公司 )
1. 2　试剂: 槲皮素对照品 (中国药品生物制品检定
所 ) ,山柰素对照品 ( Sigma公司 ) , CO2 ( 99% ) (上海
酒精总厂 ) ,甲醇为色谱纯 ,水为重蒸水 ,其余试剂均
为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: μ BondapakTM C18 ( 300
mm× 3. 9 mm , Waters) ;流动相: 甲醇 -0. 4%磷酸
·101·中草药　 Ch inese Tradi tional and Herbal Drugs　 2000年第 31卷第 2期
Address: She Jiahong , Department of Analysi s Materia M edica, College of Pharmacy, Second Mili tary Medical University, Shanghai