全 文 ：HPLC法测定狗爪豆中的左旋多巴
赵永成
(昭通地区药品检验所 ,云南 昭通　 657000)
摘　要: 目的　建立 HPLC法测定狗爪豆中左旋多巴含量的方法。 方法　采用 ODS柱 ,以甲醇 -0. 01 mol /L
K H2PO4( 25∶ 75, p H3. 0)作为流动相 ,巯嘌呤为内标 ,检测波长 280 nm。结果　实现色谱分离 ,左旋多巴浓度在 100
～ 1 000 mg /L范围内线性良好 ,r= 0. 999 9,加样回收率在 100. 81% ～ 101. 42%之间。结论　本法简便 ,准确 ,重现
性好。
关键词: HPLC法 ;狗爪豆 ;左旋多巴
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 06 0512 02
Quantitative determination of leveodopa in Gouzhaodou
(Stizolobium capitatum) by HPLC
ZHAO Yong-cheng
　　 ( Zhaotong Institute fo r Drug Contro l in Yunnan Province , Zhao tong Yunnan 657000, China)
Key words: HPLC; seed of Stizolobium capi tatum ( Sweet ) O. Kuntze ( Gouzhaodou) ; lev odopa
　　狗爪豆俗称毛毛豆、猫豆 ,是黎豆属植物头花黎
豆 Stizolobium capitatum ( Sw eet ) O. Kuntze的种
子 ,在我区有栽培。黎豆属植物的主要有效成分是左
旋多巴 [1 ] ,也是提取和利用左旋多巴的药用植物资
源。左旋多巴在临床上适用于帕金森氏病等 [2 ]。文献
报道测定黎豆属种子中左旋多巴含量方法有紫外分
光光度法 [ 3]、薄层扫描法 [4 ]、氨基酸分析仪测定
法 [1 ] ,本文以巯嘌呤为内标物质建立 HPLC法测定
了狗爪豆中的左旋多巴含量 ,该法简便、准确、重现
性好 ,其它成分无干扰。
1　仪器与试药
　　日本岛津 LC-10 Avp液相色谱仪 , SPD-10
Avp紫外检测器 , CTO-10 Avp柱温箱 , Class-V P
色谱处理系统。
左旋多巴 ,巯嘌呤对照品 (中国药品生物制品检
定所 ) ,甲醇为分析纯 ,盐酸为优级纯 ,其他试剂为分
析纯。
狗爪豆植物于 1999年 9月采自云南省永善县 ,
经中科院昆明植物所鉴定为 Stizolobium capi tatum
Kuntze。
2　实验方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: Shim-pack CLC-ODS柱
( 6. 0 mm× 150 mm× 5μm) ,流动相为甲醇-0. 01
mo l /L磷酸二氢钾缓冲液 ( 25∶ 75, pH3. 0) ,流速 1
mL /min,柱温 30℃ ,检测波长 280 nm,进样量
20μL。
2. 2　内标物的选择: 在选定的色谱条件下 ,对内标
物进行筛选 ,结果采用巯嘌呤为内标物较为合适 ,虽
然巯嘌呤λmax= 325 nm ,但由于 E1%1 cm较大 ( 1131) ,在
280 nm检测波长处仍有良好的峰形和响应灵敏度 ,
在样品色谱图中 ,内标峰位置处未出现杂质峰的干
扰 ,左旋多巴与内标物保留时间分别为 3. 37和
4. 27,理论塔板数大于 8 000,分离度大于 5. 0,分离
色谱图见图 1。
A-样品　 B-标准品与内标物　 1-左旋多巴　 2-巯嘌呤
图 1　色谱图
2. 3　内标溶液的制备: 准确称取巯嘌呤 25 mg置
50 mL量瓶中 ,加 0. 1 mo l /L盐酸约 40 mL于水浴
·512· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 6期
收稿日期: 2000-06-12作者简介:赵永成 , 1982年毕业于昭通师专化学系 ,后考入云南大学化学系 ,本科毕业 ,理学学士学位 ,副主任药师。从事化学药品检定 ,药检新技术的应用研究和天然药物的研究工作 ,先后在省部级、国家级核心期刊发表论文 10余篇 ,其中“ HPLC法测定粗茶精中咖啡因含量研究”、“ HPLC法测定杜仲叶中的绿原酸”同时被美国化学文摘 ( C A)、英国分析化学文摘 ( AA)转摘 ,分获地区科技进步 3等奖和 1等奖。 Tel: ( 0870)2220942　　 E-mail: m rzhaoyc@ sina. com.
中微温使溶解 ,待冷至室温后加 0. 1 mol /L盐酸至
刻度 ,摇匀 (含巯嘌呤 0. 5 mg /mL)。
2. 4　样品的制备:取 40℃干燥并粉碎过 100目的
狗爪豆粉 160 mg ,精密称定 ,置 10 mL量瓶中加酸
性乙醇 ( 9 mL盐酸加 85%乙 醇至 1000 mL)到刻
度 ,摇匀后浸渍 2 h,于超声提取器中超声提取 40
min,离心 ,取上清液 5. 0 m L于蒸发皿中 45℃水浴
上挥干 ,加入内标溶液 5. 0 mL溶解残渣 ,经 0. 45
μm微孔滤膜过滤制得样品溶液供 HPLC分析用。
2. 5　线性关系及校正因子的测定:取左旋多巴对照
品 25 mg精密称定 ,置 25 mL量瓶中 ,用内标溶液
溶解并稀释到刻度 ,摇匀 ,精密量取 1. 0, 2. 0, 4. 0,
6. 0, 8. 0 mL分别置于 10 mL容量瓶中 ,用内标溶
液稀释到刻度 ,摇匀 ,连同本液在上述色谱条件下分
别进样 20μL,测定峰面积 ,以峰面积比为纵坐标 ,
对应左旋多巴浓度为横坐标进行线性回归 ,结果左
旋多巴含量在 100～ 1 000 mg /L范围内呈良好的线
性关系 ,回归方程为:
Y= ( 6. 304+ 1. 863X )× 10- 3 , r= 0. 999 9。
根据 6种不同浓度溶液进样后的峰面积计算校
正因子为 1. 069 0, RSD= 0. 67% 。
2. 6　样品及回收率的测定:吸取样品制备液 20μL
注入色谱仪 ,根据峰面积计算含量 ,结果狗爪豆种子
中左旋多巴含量为 3. 61% ,RSD= 0. 63% (n= 3)。
　　取已知含量的样品粉末 0. 1 g ,共 3份 ,精密称
定 ,置 10 mL量瓶中 ,分别加入左旋多巴对照品
2. 0, 2. 5, 3. 0 mg ,加酸性乙醇至刻度 ,按 2. 4项提
取制备 ,并进行加样回收测定 ,计算回收率 ,结果在
100. 81% ～ 101. 42%之间 , RSD小于 0. 68% 。
2. 7　稳定性试验: 取校正因子测定用对照液 ( 0. 5
mg /mL)于 50℃水浴中加热 1 h放冷至室温 ,分别
于 0(当时 ) , 12 , 24 h进样分析 ,结果左旋多巴与内
标峰面积比值与 2. 5项测得比值基本一致。
3　小结和讨论
3. 1　狗爪豆种子中富含脂肪与蛋白质 ,用酸性水溶
液提取时易形成乳浊液而难分离 ,为防止污染柱子 ,
经多次分离实验 ,结果以 0. 1 mol /L盐酸的 85%乙
醇溶液分离效果最好 ,且经浸渍并超声提取 40
min,再于 4 000 r /min离心 10 min,左旋多巴可全
部提出。
3. 2　酸性乙醇提取液直接进样对左旋多巴和巯嘌
呤的峰形均有干扰 ,因此须在 45℃水浴中挥去乙
醇 ,残渣用等量的内标溶液溶解 ,可消作干扰 ,峰形
较好。
3. 3　建立的高效液相色谱法 ,可使杂质、内标物与
左旋多巴实现良好的分离 ,准确测定了狗爪豆种子
中左旋多巴含量 ,用该法还同时测定了狗爪豆茎中
左旋多巴含量为 0. 59% ,豆荚中为 0. 094%。
参考文献:
[ 1 ]　蔡　军 ,朱兆仪 .黎豆属植物中左旋多巴资源的研究 [ J] . 中
草药 , 1990, 21( 3): 7-8.
[2 ]　卫生部药典委员会编 . 临床用药需知 [M ]. 北京:化学工业出
版社 , 1995.
[3 ]　北京医学院药学系 74届学员 . 黎豆中左旋多巴的提取和含量
测定 [ J] .中草药通讯 , 1974, ( 4): 20-22.
[4 ]　陈　勇 ,甄汉深 ,许学健 ,等 . 薄层扫描法测定猫豆和黎豆中左
旋多巴的含量 [ J] .中草药 , 1993, 24( 6): 294-295.
HPLC法对天麻素及其制剂中天麻素的定量分析
谢笑天 1 ,郑　萍 1 ,杨明惠 2 ,徐树光 3
( 1. 云南师范大学 化学系 ,云南 昆明　 650092;　 2. 大理师范高等专科学校 ,云南 大理　 671000;　 3. 昆明制药
股份有限公司 ,云南 昆明　 650100)
摘　要:目的　测定天麻素及各制剂中的含量。 方法　采用 RP-HPLC法 , Shim-pack CLC-CN柱 ( 150 mm× 6. 0
mm, 5μm) ,咖啡因为内标物 ,乙腈 -水 ( 10∶ 90)为流动相 ,检测波长 270 nm。结果　从天麻素对照品及原料中分离
出一种未知物 ,建立了 HPLC法 ,加样回收率为 99. 87% , R SD= 0. 46% ( n= 5) ,天麻素在 1～ 10μg内与峰面积呈
良好线性关系 , r= 0. 999 9。 结论　方法准确、精密、快速、简便 ,可用于天麻素及制剂中天麻素的含量测定。
关键词: 天麻素 ;制剂 ; HPLC;含量测定
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 06 0513 03
·513·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 6期
收稿日期: 2000-08-14作者简介:谢笑天 ( 1962-) ,男 ,硕士 ,云南师范大学化学系副教授。从事天然有机化学、药物分析及精细化工的研究。参加或主持多项国家自然基金项目、云南省省院省校合作项目、云南省教委自然科学基金项目及企业委托项目。