全 文 ：象 ,但同时必须考虑到酸性增强对分析柱损坏也增
加。通过对文献资料中记载的多个流动相 [2, 3 ]的比
较 ,本实验采用 0. 1%乙酸即可使甘草酸峰得到较
好分离。
3. 3　甘草酸具有酸性 ,在煎煮过程中可以和处方中
的生物碱反应成盐 ,实验结果显示合煎液甘草酸含
量高于分煎液 ,是由于合煎液中多种药材成分产生
的助溶作用引起的 ,还是由于单味中药浓缩颗粒在
制备过程中提取不完全等因素引起的 ,还有待研究。
参考文献:
[ 1 ]　北京中医医院、北京市中医学校编 .实用中医学 [M ] . 上册 .
北京:人民出版社 , 1975.
[2 ]　吕归宝 ,刘　军 . 高效液相色谱法测定甘草及其制剂中甘草酸
的含量 [ J] .药物分析杂志 , 1998, 8( 3): 137-139.
[3 ]　荣志芬 ,张慰青 ,胡文洁 ,等 . 复方止咳冲剂中甘草酸和绿原酸
的高效液相色谱法测定 [ J] .中草药 , 1995, 26( 4): 181-182.
RP-HPLC法测定显齿蛇葡萄中杨梅素的含量
张友胜 ,杨伟丽 ,龚雨顺⒇
(湖南农业大学食品科技学院 ,湖南 长沙　 410128)
摘　要: 目的　测定显齿蛇葡萄中杨梅素的含量。方法　采用 RP-HPLC法测定 ,色谱柱为 Nova-Pak C18不锈钢柱 ,
检测波长为 254 nm ,用甲醇 -水= 40∶ 60为流动相。结果　方法的变异系数为 2. 763% ,平均回收率为 97. 4% ,最低
检测量为 15 ng。湖南显齿蛇葡萄植物中不同部位的杨梅素含量为 1. 57% ～ 2. 17%。 结论　方法简单、快速、精确 ,
可作为显齿蛇葡萄植物质量检测方法之一。
关键词: RP-HPLC法 ;显齿蛇葡萄 ;杨梅素
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 11 0983 02
Determination of dihydromyricetin inAmpelopsis grossedentata by RP-HPLC
ZHANG You-sheng , YAN G Wei-li, GON G Yu-shun
( Co lleg e of Food and Tech no lo gy , Hunan Ag ricultura l Univ ersity, Chang sha Hunan 410128, China )
Abstract: Object　 To establish a method for the assa y o f my ricetin in Ampelopsis grossedentata
( Hand. -Mazz. ) W. T. Wang . Methods　 The determination w as car ried out w ith RP-HPLC on Nova-pak
C18 stainless steel co lumn ( 150 mm× 3. 9 mm) wi th methano l∶ water ( 40∶ 60) as the mobi le phase, and
detected at a UV wave leng th of 254 nm. Results　 The coef ficient o f v ariation was 2. 763% with average
recoveries= 97. 4% . The minimal detectable limi t w as 15 ng. Contents of myricetin in dif ferent pa rts of A.
grossedentata f rom Hunan Province va ried f rom 1. 57% to 2. 17% . Conclusion　 The method is rapid, sim-
ple, accurate and good fo r the determina tion o f my ricetin in A. grossedentata.
Key words: RP-HPLC; Ampelopsis grossedentata ( Hand. -Mazz. ) W. T. Wang; my ricetin
　　显齿蛇葡萄 Ampelopsis grossedentata ( Hand.
Mazz. ) W. T. Wang是葡萄科蛇葡萄属的一种野
生藤本植物 ,亦称 “茅岩莓茶”、“藤茶”、“甘露茶”
等 [1, 2 ] ;全株药用 ,味甘、淡、性凉 ,具有清热解毒、祛
风湿、强筋骨等功效 ,民间将其嫩茎叶制成保健茶 ,
用于治疗感冒发热、咽喉肿痛、黄疸型肝炎、疱疖等
症 [3, 4 ]。目前对显齿蛇葡萄作为药材的质量控制标准
尚未标准化 ,仍依赖于比较传统的识别方法 [5 ] ,因
此 ,作者用 RP-HPLC法对显齿蛇葡萄植物不同部
位杨梅素的含量进行了测定 ,提供了对显齿蛇葡萄
进行质量控制的依据和方法。
1　实验部分
1. 1　仪器与试剂材料: System Gold系列高效液相
色谱 ( Beckman公司 ,美国 ) ;水: 三重蒸馏水 ;甲醇、
乙腈:色谱纯 ;杨梅素对照品自制 ,经核磁共振测定
其纯度> 99. 5% ;显齿蛇葡萄由湖南江华县林科所、
张家界市永定区科委提供 ,经作者按文献 [1, 2 ]鉴定。
1. 2　操作条件: 检测波长: UV-254 nm;色谱柱:
Nova-Pak C18不锈钢柱 ( 3. 9 mm× 150 mm);流动
相: 甲 醇 -水 ( 40∶ 60, 用磷 酸 调 pH ) ; 流速:
·983·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 11期
⒇收稿日期: 2001-03-29基金项目:湖南省教委重点资助项目 ( 4420-128326)作者简介:张友胜 ( 1965-) ,男 ,博士生 ,讲师。 研究方向为天然植物活性成分提取。 Tel: ( 0731) 4617040
1. 0 mL /min;进样量: 10μL;柱温: 30℃。
1. 3　标准溶液的配制: 准确称取杨梅素对照品
10 mg (准确至 0. 01 mg )于 10 mL容量瓶中 ,用流动
相定容至 50 mL,充分摇匀备用。
1. 4　样品溶液的配制
1. 4. 1　样品前处理:取一定量的显齿蛇葡萄植物样
品放在 105℃的烘箱中 ,烘 20 min后 ,转入 70℃下
烘 24 h(同时测定水分 ) ,取出置于干燥器内冷却 ,用
高速粉碎机粉碎 ,过 60目筛装于棕色广口瓶中 ,置
干燥器中贮藏。
1. 4. 2　样品溶液制备:精确称取一定量的样品 ,置
索氏提取器中 ,用石油醚适量加热回流 2 h,脱脂后
的样品 ,加适量醇加热回流 ,提取 4 h趁热过滤 ,定容
至 50 mL。
1. 5　测定:标准曲线的制作: 精密配制杨梅素标准
甲醇溶液 ,用 HPLC流动相稀释成一定的浓度梯度
(μg /mL) ,经色谱测定 ,以峰面积 ( Y )与杨梅素浓度
(X )做标准曲线 ,求得回归方程为 Y= - 1. 786 6+
0. 143 2X , r= 0. 998 75。按上述色谱条件 ,待仪器稳
定后分别对标准溶液和样品溶液进行测定。若样品
溶液有微量不溶物 ,可静置 ,离心后 ,取上清液进样。
2　结果
2. 1　条件的选择: 杨梅素的甲醇液紫外图谱表明 ,
在 254 nm处有最大吸收且干扰较少 ,因此选择测定
波长为 254 nm。色谱柱的选用 ,在相同流动相下对
比了 C18和 C8柱 ,发现前者的对称性及拖尾情况比
后者好。在色谱柱均为 C18柱情况下 ,对比了甲醇-水
系统与乙腈 -水系统 ,两者均能较好的检测杨梅素 ,
选择甲醇-水系统作为流动相。流动相中加入适量的
磷酸缓冲液 ,可使色谱峰对称 ,不拖尾。经过对流动
相极性、流速作反复摸索 ,确定上述色谱操作条件为
杨梅素检测的最佳条件。
2. 2　精密测定:精密吸取标准溶液 10μL,连续进样
5次 ,结果 RSD为 2. 763%。
2. 3　添加回收试验: 精密称取 1 g显齿蛇葡萄不同
部位的样品 ,分别加入适量杨梅素对照品 ,按样品溶
液制备办法脱脂、回流、过滤、定容 ,然后测定其含
量 ,计算回收率 ,结果平均回收率为 97. 4% , RSD=
3. 53% (n= 5)。
2. 4　最低检出量测定:降低待测物浓度 ,使样品峰
高为机器噪声高度的 2倍 ,进样为 10μL,计算出最
低检测限为: 15 ng。
2. 5　分析图谱:由图 1可看出 ,杨梅素得到了良好
的分离 ,干扰物质少。
A-杨梅素对照品　 B-显齿蛇葡萄样品
图 1　样品 HPLC图
2. 6　生药样品测定:精密称取各样品 1 g ,按样品溶
液制备办法 ,测定杨梅素峰面积 ,按回归方程计算其
含量 ,结果如表 1。
表 1　样品测定结果
样品 植物部位 采样地点和时间 含量 ( mg /g )
1 叶 张家界 , 1999-04 18. 7
2 叶 张家界 , 1999-07 21. 7
3 茎、叶 张家界 , 1999-04 15. 3
4 茎 江华 , 1998-05 15. 7
5 叶 江华 , 1998-05 18. 7
茎、叶 江华 , 1998-05 15. 7
3　讨论
3. 1　检测样品时 ,色谱柱温高低对分离速度影响较
大 ,以 30℃为宜。
3. 2　不同时间不同产地采集的同类样品成分类似 ,
但含量有异。文献报道和本项目组的研究证实 ,湖南
显齿蛇葡萄 (江华、张家界 )植物药用成分中总黄酮
含量大于 40% ,其中主要由二氢杨梅素和杨梅素组
成 ,二氢杨梅素含量接近或超过 30% (二氢杨梅素
的检测方法另文报道 ) ,杨梅素含量在 2%左右 [6, 7 ]。
因此 ,重视和加强显齿蛇葡萄植物的研究和开发工
作 ,具有很大的社会和经济意义。
参考文献:
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