全 文 ：银杏内酯 A、 B和白果内酯的分离与纯化△
天津大学化工学院 ( 300072)　　韩金玉 　褚巧伟　常贺英　王　华　王海静
摘　要　以银杏叶浸膏 EGb761为原料 ,通过预处理、制备色谱和重结晶过程 ,得到纯度达 98%以上的银杏内酯 A、 B
和白果内酯纯品。 建立了一种较简单的分离和纯化银杏内酯 A、 B和白果内酯的方法。
关键词　银杏内酯　白果内酯　制备色谱
Isolation and Purif ication of Ginkgolide A, B and Bilobalide
　　 School o f Ch emical Engineering and Technolog y , Tianjin Univ er sity ( Tianjin 300072)　 Han Jinyu, Chu Qiaowei,
Chang Heying , Wang Hua and Wang Haijing
Abstract　　 A simple method fo r the iso lation and puri fica tion of ginkgolide A, B and bi lobalide
(g inkgo terpene t rialctone) w as developed. A commercia lly available ex t ract of leav es of Ginkgo biloba L.
containing > 6% ginkgo terpene t rilactone was used as the raw ma terial. Af ter parti tio n in EtOAc, the
enriched ex t ract w as separated to giv e individual terpenes by preparativ e liquid chromatog raphy.
Ginkgolide A, B and bilobalide could be isolated w ith high puri ty by recrystalli zing in M eOH-H2O.
Key words　　 ginkgolide　 bilobalide　preparativ e liquid chroma tog raphy
　　银杏 Ginkgo biloba L. 为我国的特产植物 ,国
内外大量使用其叶子的标准提取物 EGb761 (主要有
效成分为黄酮苷和内酯类化合物 )治疗脑损伤后遗
症及老年性大脑、心血管系统机能衰退等症 [1 ]。
EGb761中的黄酮以山柰酚 ( kaempfera l )、槲皮素
( quercetin)、异鼠李素 ( i sohamnetin)的苷类化合物
为主 ,内酯主要有二萜内酯和倍半萜内酯 ,二萜内酯
有银杏内酯 ( ginkgo lides,主要有银杏内酯 A、 B、 C、
M和 J,简称 GA、 GB、 GC、 GM、 G J)等 ,倍半萜内酯
有白果内酯 ( bilobalide) (简称 BB)。银杏内酯具有
专属性的抗血小板活化因子 ( pla telet activa ting
facto r, PAF)活性 ,是天然的 PAF拮抗剂 ,其中尤
以 GB的活性最高。已引起了国际药学界的广泛关
注 ,有望成为治疗休克、烧伤、过敏性哮喘、中风、移
植排斥、血液透析等病症的一类新药 [2 ] ,目前在法
国、英国等国家已经分别进入Ⅱ和Ⅲ期临床。而 BB
则具有神经保护和抗水肿作用 ,有望成为治疗神经
系统疾病、脑炎、脑水肿等病症的新药。
银杏内酯和白果内酯在银杏叶中的含量低 ,而
许多其它伴生的代谢物的含量却很高 ,造成最有药
用前景的 GB和 BB的分离和纯化非常困难。以往只
能通过多次萃取、结晶或反复的柱色谱过程才能分
离 [3 ] ,存在着步骤多、过程复杂和生产成本高等问
题。 从创制我国银杏内酯类新药及产品质量控制等
考虑 ,必须建立比较简便有效的 GB与 BB的生产工
艺。 为此本文进行了制备色谱法分离纯化 GA、 GB
和 BB的研究工作。
1　实验方法
1. 1　主要原材料:从质量控制及实际生产考虑 ,本
文以市售 EGb761浸膏为原料 ,天津市金业植物纯化
制品厂生产。分析型 HPLC用试剂为色谱纯 ,其余
试剂均为化学纯。制备色谱所用溶剂在使用前要蒸
馏 1次。
1. 2　实验装置: 中压制备色谱: 法国 Gilson公司自
动制备仪 , 306泵 , 206型馏分收集器 , Unipoint
v1. 65色谱工作站 ;制备柱: 硅胶 H, 10～ 40μm, 40
mm× 300 mm,天津市科器高新技术公司 ;流动相:
乙酸乙酯 -石油醚= 8∶ 2。
1. 3　银杏内酯和白果内酯的 HPLC分析方法 [4 ]:
美国 TSP公司 P4000色谱仪 , Ch romQuest色谱工
作 站 ; 色 谱 柱: 美 国 M ICRA Scientific 公 司
SynCh ropak RP-P( C18 ) , 250 mm× 4. 6 mm , 5μm;
流动相: 水-甲醇 -四氢呋喃 ( 75∶ 20∶ 10) ;流速: 1. 0
mL /min; 进样量: 20 μL; 蒸发光 散射检测 器
·652· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 9期
Address: Han Jinyu, College of Ch emical Engineering and Technolog y, Tianjin University, Tianjin韩金玉　博士、副教授。现任《高校化学工程学报》编委 ,天津大学化工学院有机合成与高分子化工系主任 ,绿色化工技术中心主任。 主讲“化学工艺学”、“化工设计”课程 ,指导硕士生多名。主要研究方向为化学工艺绿色化学技术、天然产物工程和制药工程。近几年主要研究项目有紫杉醇原料药高效制备技术 ,药理作用靶点法分离天然抗癌物质紫杉醇的研究 ,天然药物银杏内酯 B生产工艺研究等国家、省部级科研项目 ,发表学术论文 20余篇。△天津市自然科学基金项目 ( No. 993606911)
( ELSD): 美国 All tech公司 500型 ,漂移管温度为
105℃ ,载气 (高纯氮 )流速为 2. 75 L /min。 GA、 GB
和 BB对照品为 Sigma公司产品。
1. 4　实验步骤
1. 4. 1　原料预处理:通过不同实验方案的比较 ,我们
确定了比较有效的预处理方案如下: 取一定量的浸膏
EGb761 ,溶解于石油醚中。然后加入一定体积的水 ,混
合均匀后静止分层 ,经过滤得到水相 ;再用石油醚和
水重复萃取、过滤所得的残余物两次并合并水相;然
后用乙酸乙酯萃取水相。乙酸乙酯层加入 1mol /L的
氯化钠溶液 ,不断搅拌 ,使其混合均匀后静止分层。去
掉水相。然后加水洗涤使乙酸乙酯层呈中性后分相取
乙酸乙酯层萃取液减压浓缩。 浓缩物用 MeOH-H2O
( 6∶ 3)多次溶解 ,合并收集溶解液 ,放入冰箱中冷却
过夜、结晶 ,经过滤得内酯混合物。
1. 4. 2　制备色谱分离纯化过程:将经过原料预处理
后得到含 GA、 GB和 BB的内酯混合物结晶 ,用制备
色谱进行分离。为在制备过程中进行在线检测 ,本文
采用一分流阀安装在色谱柱与收集器、检测器之间 ,
通过调整分流阀使进入 ELSD检测器的流动相的
流量为 1 mL /min。 进行在线检测时 , ELSD检测器
的参数设定与检测方法中的相同。
在制备柱进样之前对内酯混合物需做进一步的
处理。用流动相溶解含 GA、 GB和 BB的内酯混合物
结晶 ,并进行过滤 ,将得到的澄清亮褐色溶液用进样
器和 5 mL样品环进样 ,经制备柱进行分离。流动相
流速为 20 mL /min,通过 Unipoint v1. 65色谱工作
站设置收集器收集。
2　结果与讨论
2. 1　原料预处理:经过预处理后得到的内酯混合物
结晶的分析检测结果如图 1所示 ,从图中可以看出 ,
混合物的主要成分为 GA、 GB和 BB,已经去掉黄酮
类物质 ,但其它内酯的含量也很少 ,达到了预处理的
目的 ,为后续的分离减轻了负担。
2. 2　制备色谱分离:实验结果如图 2所示 ,银杏内
酯混合物的一次进样量为 86. 2 mg。由图 2可见对
GB、 GA和 BB的分离都可达到基线分离 ,通过收集
器可得到成分单一的 GA、 GB和 BB 3种产品。由预
处理和制备色谱的实验结果可知 ,此方法对 GA、
GB和 BB的选择性较好 ,所得产品中不含 GC、 GJ
和 GM ,这对于药物质量控制非常有利。
2. 3　产品的纯化:利用重结晶将制备色谱所得的成
图 1　 GA、GB和 BB分析谱图
份单一的 GA、 GB和 BB进行最后纯化。 GA、 GB分
别用 MeOH-H2O= 6∶ 4, M eOH-H2O= 4∶ 6重结
晶 , BB用 MeOH-H2O= 15∶ 85重结晶纯化。 最终
得到纯度在 98%以上的 GA、 GB和 BB各 31. 6,
42. 8和 4. 5 mg。
图 2　 GA、GB和 BB分离谱图
3　结论
以银杏叶浸膏 EGb761为原料 ,采用预处理、制
备色谱和重结晶过程进行银杏内酯 A、 B和白果内
酯纯品分离纯化方法研究 ,得出以下结论:
1)本法可以制得纯度达 98%以上的银杏内酯
A、 B和白果内酯纯品 ,达到了药用纯度要求 ;
2)本法简便有效 ,对银杏内酯 A、 B和白果内酯
的分离纯化具有较好的选择性 ;
3)由于采用以廉价的硅胶 H为固定相的制备
色谱柱 ,因而具有较高的应用价值 ,为大规模制备银
杏内酯 A、 B和白果内酯及开发相应的生产工艺奠
定了良好的基础。
参 考 文 献
1　陈仲良 .中国药学杂志 , 1996, 31( 6): 326
2　 Kaltai M , Hosford D, Guinnot P. Drugs, 1991, 42( 2): 643
3　 Campon ovo F F, Wolfender J L, Mai llard M P, et a l.
Ph ytoch em Anal, 1995, 6: 141
4　田南卉 ,王　勤 ,历进忠 . 药物分析杂志 , 1997, 17( 4): 282
( 1999-11-02收稿 )
·653·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 9期