全 文 ：也表现抑制作用。其中 SA 25mg / ( kg· d)的抑制作
用强于 SA 15 mg / ( kg· d)。关于 SA对移植排斥反
应的其它可能机制尚在进一步探讨中。
参考文献:
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人参皂苷对人体骨肉瘤细胞 U2OS增殖的影响
张有为 ,窦德强 ,陈英杰 ,姚新生
(沈阳药科大学天然药物化学教研室 ,辽宁 沈阳　 110015)
摘　要:目的　为寻找人参中抑制骨肉瘤细胞增殖的活性成分。方法　采用细胞计数法检测了 27种从人参中得到
的单体化合物对体外培养的人体骨肉瘤细胞 U2OS增殖的影响 ;以流式细胞术分析 DNA含量 ,选择有抑制肿瘤细
胞增殖作用的化合物对肿瘤细胞的细胞增殖周期的变化进行研究 ;另外 ,以荧光染色法检测了人参皂苷对细胞死
亡率变化的影响。 结果　对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用研究表明 ,在 5μmol / L浓度下 ,人参皂苷 -Ro , -Rh1 , -Rh2 ,
-F1和 -L8较明显地抑制了肿瘤细胞的增殖 ,人参皂苷 -Rg1 , -F3 , -Rf, PPT和 PT显著地抑制了肿瘤细胞的增殖 ;进
一步对骨肉瘤细胞有抑制作用的化合物检测其对细胞增殖周期影响发现: 人参皂苷 -Ro , -Rf, -Rg1 , -F1 , -Rh2 , PPT
和 PT使处于 G0 /G1期的细胞数目明显增多 ,伴随着 S期和 G2+ M期的细胞明显减少 ,说明这些化合物抑制了肿
瘤细胞增殖周期的进行 ;与对照相比人参皂苷 -Rf1 , -Rg1 , -F1和 PPT显著地促进了肿瘤细胞的细胞死亡现象。结论
人参皂苷是通过阻止细胞增殖周期的 G0 /G1期或促使细胞死亡两种方式抑制了肿瘤细胞 U2OS的增殖。
关键词: 人参皂苷 ;骨肉瘤细胞 U2OS;细胞增殖 ;细胞周期 ;细胞死亡
中图分类号: R285. 5; R979. 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 03 0232 05
Effect of ginsenosides fromPanax ginseng on proliferation of
human osteosarcoma cell U2OS
ZHAN G You-w ei, DOU De-qiang , CHEN Ying-jie , YAO Xin-sheng
　　 ( Depar tment o f Natur al Pharmaceutical Ch emistr y, Sh enyang Pharmaceutica l Univ e rsity , Shenyang Lia oning 110015,
China)
Abstract: Object　 To find out w hich o f the 27 ginsenosides isolated f rom Panax ginseng C. A. M ey
that may inhibit the proli feration of human osteosa rcoma cell line U2OS. Methods　 Effects of each individ-
ual ginsenoside on the proliferation of U2O S cell w ere studied by determining the viabili ty of cancer cells
during cul ture wi th or wi thout the presence o f the test compound. DN A assay w as determined by flow cy-
tometry. Results　 Ginsono sides -Ro , -Rh1 , -Rh2 , -F1 and -L8 at concentrations of 5μmol /L could obvious-
ly suppress the pro li feration o f U2OS cells w hi le ginsenosides -Rg1 , -F3 , -Rf , PPT and PT signi ficant ly in-
hibi ted the cancer cells. Flow cytometry rev ealed tha t ginsenosides -Ro , -Rg1 , -Rf, -F1 , -Rh2 , PPT and
PT induced cell cycle a rrest at G0 /G1 phase wi th obv ious decrease of cell count at S and G2+ M phase.
Mo reover, ginsenosides -Rf1 , -Rg1 , -F1 and PPT induced significantly high rates of cell death as compa red
w ith the control. Conclusion　 These data suggested tha t ginsenosides inhibi ted U2O S prolifera tion v ia cell
cycle arrest o r induction o f cell dea th.
Key words: ginsenosides; osteosarcoma U2O S; cell prolifera tion; cell cycls; cell death
　　近十余年来的研究表明人参有较好的抗癌抗肿
瘤效果 [1～ 3 ] ,而且这种作用大多是非器官特异性
的 [4 ]。人参的主要活性成分是人参皂苷 ,有关人参皂
苷抗癌作用的报道不少 ,但主要是针对 -Rh2而言 ,
它既能抑制肿瘤细胞的增殖 [5, 6 ] ,又能诱导肿瘤细胞
的分化 [ 7, 8 ]。另外 ,人参皂苷-Rh1 [8 ] , -Rb1 [9 ] , -Rb2和
·232· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 3期
收稿日期: 2000-06-26作者简介:张有为 ( 1972-) ,男 , 2000年在沈阳药科大学药物化学专业获得博士学位。目前在日本东京医科大学分子生物学专业攻读博士学位。 E-mai l: zyw lcell @ yahoo. com; Fax: 81-3-5694-4940
* 通讯联系人
-Rg3
[10 ]等也有抗癌的报道。 本文用细胞计数法 ,流
式细胞术和荧光染色法检测了 27种人参皂苷和皂
苷元对体外培养的人体骨肉瘤细胞 U2OS的增殖、
细胞周期和细胞死亡的影响。
1　材料和方法
1. 1　实验材料: PI和 Hoechst 33342购自 Sigma公
司 ; DMEM培养粉末从 GIBCO-BRL公司购买。胎
牛血清从 Bio science公司购买。
1. 2　化合物: 27种从人参中得到的单体化合物溶
于 DMSO中配成 50 mmo l /L的储备液 ,置于 - 20
℃中。使用浓度为 5μmo l /L。该培养液中 DMSO的
含量为 0. 01% ,此浓度的 DMSO对实验系统不发
生任何影响。
1. 3　细胞培养:人体骨肉瘤细胞株 U2O S购自美国
A TCC公司。在含 10%热灭活 ( 56℃ , 30 min)的胎
牛血清的 DM EM培养液中于 37℃、 5% CO2培养
箱中培养。
1. 4　细胞增殖的测定:以 Counter细胞计数仪测细
胞数目的方法来评估肿瘤细胞的增殖。第 1天于 24
孔板中植入 3. 6× 104个细胞 ,第二天加入终浓度为
5μmo l /L的各化合物处理 ,并于第 3, 5和 7天时测
定细胞的数目。
1. 5　细胞周期的分析: 以流式细胞术分析 DNA含
量来检测细胞周期的变化。于 60 mm直径的培养皿
中植入 4× 105个细胞 ,第 2天加入终浓度为 5
μmo l /L的化合物处理。第 7天时吸走培养基 ,以磷
酸盐缓冲液 PBS冲洗两次 ,加入 0. 25%胰酶于 37
℃消化 5 min , 500× g离心 ;弃去上清液 , PBS洗两
次 ,加入 50μg /mL的 PI液 (同时含有 0. 112%柠檬
酸钠 , 0. 15% Tri ton x-100,溶于 PBS) ,室温培养 1
min,离心 ,吸走上清液 , PBS洗两次 ,用同浓度的 PI
液 (只不含 Tri ton x-100) 300μL悬浮细胞 ,以
FACS荧光激活细胞分类仪 (流式细胞仪 )测定处于
不同细胞周期的细胞数目。 每次分析的细胞总数为
10 000个。
1. 6　细胞死亡的分析: 在底部为玻璃材料的 35
mm培养皿中植入 5× 104个细胞 ,第 2天加入终浓
度为 5μmol /L的化合物 ,处理 6 d后 ,吸走培养基 ,
以 PBS冲洗两次 ,加入含 20μg /mL PI和 6μg /mL
Hoechst 33342染料的 PBS 150μL,在 37℃孵育 30
min后 ,吸走培养基 , PBS冲洗两次 ,于荧光显微镜
下观察细胞的荧光。通过对死亡细胞数目的统计可
以得出细胞死亡率。
2　结果
2. 1　人对皂苷对 U2O S增殖的影响: 27种单体化
合物按苷元骨架类型分为三大类。 1至 12为人参二
醇型 , 13至 25为人参三醇型 , 26至 27为齐墩果酸
型 (图 1) ,对 U2O S增殖的影响见表 1。
1-人参皂苷 -Ra1　 R1= OGlc( 2-1) Glc; R2= OGlc( 6-1) Ara( p)
( 4-1) Xyl
2-三七参苷 -R4　 R1= OGlc( 2-1) Glc; R2= OGlc( 6-1) Glc( 6-1)
Xyl
3-人参皂苷 -Rb1　 R1= OGlc(2-1) Glc; R2= OGlc( 6-1) Glc
4--Rb2　 R1= O Glc( 2-1) Glc; R2= O Glc( 6-1) Ara( p)
5--Rb3　 R1= O Glc( 2-1) Glc; R2= O Glc( 6-1)Xyl
6--Rc　 R1= OGlc( 2-1) Glc; R2= OGlc( 6-1) Ara( f )
7--Rd　 R1= O Glc( 2-1) Glc; R2= O Glc
8--Rg3　 R1= OGlc( 2-1) Glc; R2= O H( 20R )
9--Rd2　 R1= OGlc; R2= OGlc( 6-1) Ara( p)
10-三七参苷 -Fe　 R1= OGlc; R2= OGlc( 6-1) Ara( f )
11-人参皂苷 -Rh2　 R1= OGlc; R2= OH
13-人参皂苷 -Re　 R1= OH; R2= OGlc( 2-1) Rh a; R3= OGlc
14--Rf　 R1= -O H; R2= OGlc( 2-1) Glc; R3= O H
15--Rg1　 R1= O H; R2= O Glc; R3= OGlc
16-20( R )-人参皂苷 -Rg2　 R1= -O H; R2= -OGlc( 2-1) Rha; R3
= OH ( 20 R )
17-人参皂苷 -Rg2　 R1= O H; R2= OGlc( 2-1) Rha;
R3= OH( 20 S )
18--F3　 R1= O H; R2= OH; R3= OGlc( 6-1) Ara( p)
19-竹节参苷 -L8　 R1= OH; R2= OH; R3= OGlc( 6-1) Ara( f )
20-人参皂苷 -Ia　 R1= OGlc; R2= OH; R3= OGlc
21-20 ( R )-人参皂苷 -Rh1　 R1 = OH; R2= OGlc; R3= O H( 20
R )
22--Rh1　 R1= O H; R2= OGlc; R3= O H( 20 S )
23-人参皂苷 -F1　 R1= O H; R2= O H; R3= OGlc
24-原人参三醇 ( PPT)　 R1= OH; R2= O H; R3= O H
12-人参二醇 ( PD)　 R1= OH; R2= H
25-人参三醇 ( PT)　 R1= O H; R2= O H
·233·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 3期
26-齐墩果酸　 R1= O H; R2= H
27-人参皂苷 -Ro　 R1= O Gluc A( 2-1) Glc; R2= Glc
图 1　人参皂苷及其苷元的结构
　　从表 1的结果可以看出 ,在 5μmo l /L的浓度
下 ,齐墩果酸 ( 26) ,人参皂苷 -Ra1 ( 1) , -R4 ( 2) , -Rb1
( 3) , -Rb2 ( 4) , -Rb3 ( 5) , -Rc4 ( 6) , -Rg3 ( 8) , -Rd2 ( 9) ,
-Fe( 10)和 20 R-Rg2 ( 16)在处理 1周的时间内几乎
不影响肿瘤细胞的增殖。人参皂苷 -Re( 13) , -Ia ( 20)
和 PD( 12)在初期 (第 3天 )对 U2O S增殖有明显抑
制作用 ,但随时间增长而迅速减弱。 人参皂苷 -Rh2
( 11)只有在较长时间 ( 7 d)时才对 U2O S的增殖显
示一定的抑制作用。人参皂苷 -Rg1 ( 15) , -F1 ( 23) ,
表 1　人参皂苷对人体骨肉瘤细胞 U2OS的影响 ( x± s ,n= 3)
样品号 第 1天 第 3天 第 5天 第 7天
对照 36 000 44 740± 4 449 　　　　 169 374± 11 239 　　　　 355 751± 30 337
1 36 000 55 468± 1 072 162 770± 11 078 338 045± 35 068
2 36 000 43 346± 4 999 137 939± 3 236 349 125± 28 760
3 36 000 45 136± 3 894 155 404± 21 265 322 722± 21 368
4 36 000 44 845± 3 868 146 602± 18 145 338 988± 33 534
5 36 000 44 502± 4 616 134 052± 15 028 368 084± 44 148
6 36 000 46 105± 2 134 168 834± 12 273 348 036± 20 486
7 36 000 41 304± 3 668 132 302± 17 271* * * 326 841± 22 775
8 36 000 40 212± 2 577 168 380± 20 326 375 142± 41 464
9 36 000 45 135± 1 838 150 183± 9 777 330 623± 27 663
10 36 000 52 463± 3 992 166 563± 11 658 362 932± 23 884
11 36 000 44 525± 4 424 152 867± 10 694 319 911± 21 961
12 36 000 30 051± 4 979* * * 151 958± 13 395 344 136± 23 466
13 36 000 33 920± 3 874* * * 150 197± 20 149 349 714± 12 336
14 36 000 21 510± 3 883* * * 117 693± 16 214* * * 258 446± 6 913* * *
15 36 000 43 098± 3 915 121 347± 5 571* * * 277 895± 26 539* * *
16 36 000 44 114± 3 461 158 530± 17 507 333 542± 21 357
17 36 000 38 277± 5 747* 142 891± 14 378* * 327 839± 29 512
18 36 000 32 433± 4 658* * * 149 928± 8 648 269 733± 20 207* * *
19 36 000 31 475± 1 842* * * 144 871± 9 951* * 318 382± 28 626
20 36 000 34 830± 4 680* * * 147 614± 24 793 335 508± 23 957
21 36 000 37 918± 5 870* 153 739± 16 570 315 886± 25 871*
22 36 000 34 923± 5 525* * * 157 282± 10 704 312 721± 37 272*
23 36 000 40 250± 3 841 141 454± 10 278* * * 295 662± 21 092* * *
24 36 000 43 957± 2 870 148 651± 9 985* 277 940± 23 593* * *
25 36 000 42 311± 8 458 156 894± 16 323 289 047± 13 607* * *
26 36 000 43 516± 2 070 141 965± 22 171 326 452± 20 002
27 36 000 40 030± 4 224* * 150 263± 22 344 310 204± 14 675* *
　　　　与同一天对照组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01　* * * P < 0. 001
PPT( 24)和 PT( 25)的作用与 -Rh2类似 ,但对 U2O S
增殖的抑制作用强于 -Rh2 ,与对照组间存在显著差
别。人参皂苷 -Rd( 7) , -Rg2 ( 17) , -L8 ( 19) , 20R-Rh1
( 21) , Rh1 ( 22)和 -Ro( 27)对 U2OS的增殖表现出较
明显的抑制作用 ,但与对照组的差别还不是很显著。
人参皂苷 -Rf ( 14)和 -F3 ( 18)自开始就抑制了 U2O S
的增殖 ,尤其是-Rf更明显。
2. 2　人参皂苷对 U2O S细胞周期的影响:根据 1周
后人参皂苷对 U2OS增殖的抑制效果选择人参皂苷
-Ro, -Rf , -Rg1 , -F1 , -F3 , -L8 , -Rh2 , -Rh1 , 20 ( R ) -
Rh1 , PPT和 PT研究了它们对 U2OS细胞周期的影
响 ,如图 2所示 ,通常情况下 U2O S细胞主要处于 S
期和 G2+ M期 ;处于 G0 /G1期的只占约 43%。人参
皂苷-Rh1和 20(R ) -Rh1处理 1周并不显著致变的
U2OS细胞周期 ,与对照组类似。 人参皂苷 -Rh2 ,
-F3 , -L8 , PPT和 PT明显地增加了 G0 /G1期细胞数
量 ,表明它们对 U2O S细胞周期的进行有一定的抑
制作用。人参皂苷 -Ro, -Rf, -F1和 -Rg1显著地促进
了 G0 /G1期细胞的增加 ,提示它们明显地抑制了
U2OS细胞周期的进行。
2. 3　人参皂苷对 U2OS细胞死亡的影响:由图 3可
见 ,除了 PT和-L8之外 ,其余的人参皂苷都或多或
少地促进了 U2OS细胞死亡现象。与对照相比 , -Rf,
-F1 , -Rg1和 PPT显著地诱导引起了 U2O S的细胞
·234· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 3期
死亡。
图 2　人参皂苷对骨肉瘤细胞增殖周期的影响
与对照组比较: * P < 0. 001
图 3　人参皂苷对骨肉瘤细胞死亡的影响
3　讨论
近年来有关人参皂苷抗癌方面的研究很受重
视。体外和体内实验结果表明人参皂苷对很多肿瘤
有抑制作用 ,比如黑色素瘤 [7 ]、畸胎瘤 [11 ]、子宫瘤 [5 ]、
大肠瘤 [10 ]、肺腺瘤 [12 ]、肝癌和胆管癌 [ 12]、乳房癌 [13 ]、
胃腺癌 [12 ]和白血病 [8 ]等等 ,对骨肉瘤还未见报道。
因此 ,本实验检测了 27种人参中得到的单体化合物
对体外培养的骨肉瘤细胞 U2O S增殖的影响。 结果
表明 ,在 5μmo l /L的浓度下 ,接近一半的人参皂苷
(化合物 1～ 6, 8～ 10, 16)对 U2O S的增殖无抑制作
用。 即 使象 -Ro , -Rd, -Re, -Rg2 , -Ia , -Rh1 , -Rh2 和
PD有一定的抑制活性 ,但作用较弱。 而人参皂苷
-Rf , -F1 , -F3 , -Rg1 , PPT和 PT表现出较强的活性 ,
尤其是-Rf , -Rg1和-F3非常强烈的抑制了 U2OS的
增殖。
一般来说 ,影响细胞增殖的因素有两个 ,一个是
调节细胞周期的进行 ,另一个是诱导细胞死亡。因
此 ,我们检测了有抑制活性的 11个化合物对 U2O S
细胞周期与细胞死亡的影响。 结果表明 ,人参皂苷
-Ro, -Rf , -F1 , -Rg1 , -Rh2 , PPT和 PT显著地抑制了
U2O S细胞周期的进行 ; -F3和-L8也有较明显的抑
制作用 ,但 -Rh1几乎无任何影响。在对细胞死亡现
象进行观察时 ,发现实际的细胞死亡率都很低 ,最大
不超过 5% 。但是从图 3的相对死亡率还是可以看
出 ,与对照相比 , -Rf , -F1 , -Rg1和 PPT显著的促进
了 U2OS的细胞死亡。 -Ro和 -Rh2有较明显的作用
( P < 0. 01) ,但 -Rh1 , -L8 , -F3和 PT则对 U2OS的细
胞死亡几乎无影响。 综合起来看 ,除了人参皂苷 -F3
之外 ,这些结果与化合物对 U2O S增殖作用的影响
是基本一致的 ,即各化合物通过抑制细胞周期或促
进细胞死亡或两者相加和来抑制了 U2OS细胞的增
殖。 至于 -F3的原因有待进一步探讨研究。
本文的结果与文献报道有不完全相同之处 ,如
-Rh2在文献报道中有很好的抗肿瘤活性 ;在本实验
里它的作用较弱。另外-Rb1 , -Rb2 , -Rb3等也有抗癌
报道 ,但在本实验里看不出它们对骨肉瘤有作用。原
因可能有两点 ,一是由于所用的瘤株细胞的种属不
同 ,还有就是检测方法的差异。 至于 -Rh1和 -Rg1与
文献一致 ,表现出抗肿瘤活性。本研究的结果显示
-Rf抗 U2OS增殖活性最强。
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五种维吾尔药的清除羟自由基及抗 DNA损伤作用研究
阿不都热依木 ,阿不都艾尼 ,哈木拉提 ,热孜万古丽
(新疆维吾尔医研究所 ,新疆 乌鲁木齐　 830001)
摘　要: 目的　研究 5种维吾尔药的清除羟自由基 (· O H)及保护 DNA氧化损伤的作用。 方法　采用现代生物化
学发光分析技术 ,以 CuSO4-V it C-H2O2-酵母菌发光体系测定药材对· OH的清除作用。结果　研究表明 , 5种维吾
尔药材对· O H具有不同程度的清除作用 ,并能保护 DNA的氧化损伤 ,而且它们清除· O H及抗 DN A氧化损伤的
作用与它们的浓度之间存在正比性依赖关系。 结论　 5种维吾尔药清 · OH及抗 DN A损伤的作用可能是它们抗
衰老、防治某些疾病的主要作用机制之一。
关键词: 羟自由基 ; DN A损伤 ;地锦草 ;琉璃苣 ;番泻叶 ;西青果 ;阿里红
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 03 0236 03
Studies on scavenge of hydroxyl radical and protection of DNA damage by
5 defferent Uighur medicinal herbs
Abudureyimu, Abuduaini, Hamulati, Re ziw anguli
　　 ( Institute of T raditional Uighur Medicine of Xinjiang , U rumqi Xinjiang 830001, China )
Abstract: Object　 To study the hydro xy l radical scavenging and DN A damage pro tecting activi ties of
5 Uighur herbal medicines-Euphorbia humifusa Willd. , Borago of f icinalis L, Cassia angustifol ia Vahl,
Term inal ia chebula Retz. and Fomes of f icinalis ( Vill. ex Fr. ) Bres. Methods　 The hydroxyl radical scav-
enging action and DN A damage pro tection action w ere determined by CuSO4-Vit C-H2O2 yeast and CuSO4-
Vit C-H2O2 -phen-DNA chemiluminescence systems respectiv ely. Results　 All 5 Uighur medicinal herbs
show ed hydroxyl radical scavenging and DN A damage pro tection activ ities in dose-dependent manners.
Conculsion　 The hydroxyl radica l scavenging and DN A pro tectiv e ef fects may po ssibly be the mechanisms
o f thei r antiaging and therapeutic effects ag ainst va rious diseases.
Key words: hydroxyl radical; DN A damage; Euphorbia humif usa Willd. ; Borage of f icinalis L. ;
Cassia angusti fol ia Vahl; Terminalia chebula Retz. ; Fomes of f icinalis ( Vi ll. ex Fr. ) Bres.
　　新疆维吾尔药地锦草 Euphorbia hum ifusa
Willd.、琉璃苣 Borago of f icinal is L.、番泻叶 Cassia
angust ifol ia Vahl、 西 青 果 Terminalia chebula
Retz.、阿 里红 Fomes of f icinal is ( Vill. ex Fr. )
Bres.是维吾尔医常用药材 ,在《中华人民共和国卫
生部药品标准维吾尔药分册》均有记载。虽然它们具
有广泛有效的防治疾病的作用 ,但它们的作用机制
尚未完全解释 ,它们清除· OH及抗 DNA氧化损伤
的作用也还未见国内外文献报道。本文采用生物化
学发光分析技术研究了 5种维吾尔药醇提物清除
· OH及抗 DN A氧化损伤的作用 ,从而解释它们防
治疾病的部分作用机制。
1　材料与方法
1. 1　药材和试剂:地锦草、琉璃苣、番泻叶、西青果、
阿里红由新疆维吾尔医医院中心药房提供。 小牛胸
腺 DNA、邻菲罗啉 ( Phen)为美国 Sigma产品。试剂
均为国产分析纯。
1. 2　仪器: SHG-1型生物化学发光仪 ,上海上立检
·236· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 3期
收稿日期: 2000-09-08基金项目:国家中医药管理局科研基金资助 ( No. 970040)作者简介:阿不都热依木 ( 1971年 -) ,男 ,维吾尔族 ,新疆喀什市人 ,助理研究员 , 1995年毕业于上海医科大学药学院 , 1999年获得新疆医科大学药理学硕士学位 , 1995年 7月至今在新疆维吾尔医研究所自由基医学研究室工作。 主要从事自由基医学和药理学研究。 电话: 0991-2562589(办 ) , 0991-2565663(传真 ) ;电子信箱: abdi ryim@ china. com
* 为指导老师