全 文 ：a
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so i n hi bi t ed pl a t el e t t hro m bo na n e AZ r el a es ei nd u e ed by eo ll a g e n
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n o t a f f e e t t h e f o r m a t i o n o f a o r t ie
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P T S 5 0一 Z o o m g / k g s ig n if ie a n t l y in h i b i t e d e x p e r im e n t a l t h r o m b o s i s i n r a t s . T h e s e r e s u l t s s h o w e d
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一 t h r o m b o s i s a e t io n o f P T S m a y b e d u e t o it s i n h ib it o r y a e t i o n o n p l a t e l e t a g g r e g a t io n a n d T X A Z
r e le a s e
.
淫羊霍试的体外免疫调节作用研究△
山东医学科学院基础所免疫室 (济南 25 0 0 01 ) 赵 勇夸 张 玲 王 芸 毛海婷 崔正言
摘 要 淫羊霍贰是从朝鲜淫羊霍中提取的主要单体 。 采用依赖细胞株法和乳酸脱氢酶 h4 释放
法 , 分别检测 了淫羊霍贰协同诱生 I L 一 2 、 I L 一 3 、 I L 一 6 , 及对 N K 、 L A K 细胞杀伤活性的影响 。 结果表
明 :淫羊蕾贰可协同 P H A 诱导扁桃体单个核细胞产生 I L 一 2 、 3 、 6 呈剂量依赖关系 ,动力学观察表
明 : I L 一 2 、 I L一 6 的分泌高峰时相为作用后 4h8 , lL 一 3 的分泌高峰时相为作用后 7h2 。 淫羊着贰可以提
高扁桃体单个核细胞 N K 、 L A K 细胞杀伤活性 ;动力学观察表明 :在诱导第 5 天时 L A K 细胞杀伤
活性最强 。 提示淫羊蕾贰是一种有效的生物反应调节剂 。
关键词 淫羊霍贰 白细胞介素 2 白细胞介素 3 白细胞介素 6 N K 细胞 L A K 细胞
近年来 , 中药免疫调节作用的研究取得
了很大进展 ,人们对中药的化学成分 、 结构和
药效进行 了深入的研究 ,发现了许多活性多
糖和贰类物质〔` 〕 。 淫羊霍贰 ( ie a r ii n , I C A )是
从朝鲜淫羊蕾 (EP im e d i u m 走o er a n u m N a k a i )
中提取的主要单体成分 。 文献报道 〔, , 3 , : 淫羊
霍贰可以促进抗体的生成 ,对小 鼠 T s 细胞
的产生有减弱作用 。 关于淫羊蕾贰协同诱生
白细胞介素 2 、 3 、 6 ,及对 N K 、 L A K 细胞杀伤
活性的影响 , 尚未见文献报道 。 现报告如下 。
1 材料
1
.
1 淫羊蕾贰 : 从朝鲜淫羊茬 ( E . ko er a n u m
N a k a i ) 中提取 ,纯度在 9 6%以上 。
1
.
2 细胞因子 : lr L 一 2 , 军事医学科学院基础
所和 中化生物 技术研 究所联 合研 制 , 批号
94 0 2 05
。 r I L
一
3 购于北京 医科大学免疫学教
研室 。 rI L 一 6 , 由山东省医学科学院肿瘤生物
治疗中心田志刚博士赠送 。
1
.
3 细胞株 : C T L L 一 2 为 I L 一 2 依赖性细胞
株 ,本室常规传代培养 。 T F 一 1 为人 I L 一 3 依赖
性细胞株 ,引自北京医科大学免疫学教研室 。
M H 60
·
B S F Z 为 IL 一 6 依赖性细胞株 , 引自
日本大阪大学细胞工程中心 。 K 56 : 为人红 白
血病细胞 , 本室常规传代培养 。 H L 一 60 为人
急性早幼粒 白血病细胞 , 引自中国医学科学
院血液病研究所 。
1
.
4 试剂 : P H A 为广州医工所产品 。 M T T ,
3
一
( 4
,
5
一二甲基唾哇 一 2一 y l关 2 , 5一乙苯基一四哇
嗅 盐 〔3一 ( 4 , 5一 d im e t h y l t h i a z o l一 2一 y l 卜 2 , 5 -
d iP h e n y l t e t r a z o l iu m b r o m id e 〕 , S i g m a 。
2 方法
2
.
1 扁桃体单个核细胞的制备 : 扁桃体由山
东医科大学附属医院耳鼻喉科门诊提供 。 三
抗 (青霉素 Z 0 0 0 u /m l 、 链霉素 Z 0 0 0 u /m l 、 二
性霉素 B 25 拼g /m l) 常规处理后 ,取组织块置
于 2 0。 目不锈钢 网上研磨 ,细胞悬液层加于
淋巴细胞分离液上 , 分离 、 洗涤 ,用培养液调
细胞至适宜浓度 ,备用 。
2
.
2 不同剂量 IC A 协同 P H A 诱生 I L 一 2 、 3 、
6 的观察 : 取 24 孔板 , 加入扁桃体单个核细
,
A d d
r e s s : Z h
a o Y o n g
,
I n s t it u t e o f B
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n e ia l A e a d e m y o f M e d ie a l S e ie n e e s
,
Ji
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△ 山东省自然科学基金资助项 目
《中草药 》 19 9 6 年第 2 7 卷第 1 1 期 . 6 6 9 ·
胞悬液 ( 2. 5又 10 6 /m l )、 IC A和 H P A。 IC A的
终浓度为 4 0 、 20 、 1 0 、 5拜 g /m l, P H A 的终浓度
为 1 0 0产g /m l , 混匀后置 3 7℃ , 5% C O Z 培养箱
内培养 , 于 48 、 72 、 2 4 h 收集上清 , 分别检测
IL
一
2
、
IL
一
3
、 和 I L 一 6 的活性单位 。
2
.
3 IC A 协同 P H A 诱生 I L 一 2 、 3 、 6 的动力
学观察 : 分 3 组 ( P H A 组 , P H A + IC A 组 ,
IC A 组 )进行 , I C A 终浓度为 2 0拼g / m l , P H A
终浓度为 1 0 0拜g /m l , 分别于 1 2 、 2 4 、 4 8 、 7 2 、
84 h 收集上清 , 一 30 ℃保存 ,待测其活性 。
2
.
4 M T T 比色分析法检测 I L 一 2 、 3 、 6 的活
性单位 : 参考文献〔们 , 采用二 甲亚矾 ( D M S O )
溶解 甲腊 。 I L 一 2 、 3 、 6 的活性单位计算参考
G i l l i s 介绍的方法〔 5〕 。
2
.
5 靶细胞的制备 :取对数生长期的 K 562 和
H L
一
6。 细胞 ,用 H a n k s 液洗 3 次 , 以培养液
调细胞浓度为 l x 1 0 5 /m l 备用 。
2
.
6 L A K 细胞 的制备 : 方法 制备参考文
献 〔` 〕 。
2
.
7 N K
、
L A K 细胞杀伤活性的测定 : 取上
述靶细胞加入 96 孔 U 型底培养板 中 , 同时
加入效应细胞 ,使 E : T 比为 50 , 1 , 25 , 1 ,
1 2
.
5 : 1
,最大释放组为 1% N P 一 40 与靶细胞
作用 , 同时设靶细胞自然释放组 , 及效应细胞
自然释放组 。 乳酸脱氢酶活性测定及细胞毒
杀伤百分率的计算参考文献 〔 , 〕 。
3 结果
3
.
1 不同剂量 IC A 协同 P H A 诱生 IL 一 2 、 3 、
6 的观察 : 图 1一 3 结果表明 , 随着 IC A 剂量
增加协 同 P H A 诱生 IL 一 2 , 3 , 6 的作用增强 ,
呈剂量依赖关系 。
0 0
ǎ一已\曾à担胆巴。、二
5 10
剂址 ( , . 9 /二 、 I)
图 2 不同剂里 IC A
IL
一
3 的影响
2 0 4 0
协同 P H A 对诱生
nn
ǎ一`飞à刹电心l,二
刘址 ( 尸g / rn l )
图 3 不同剂量 IC A 协同 P H A 对诱生
I L
一
6 的影响
3
.
2 I C A 协同 P H A 诱生 I L 一 2 、 3 、 6 的动力
学观察 : 如图 4一 6 所示 , IL 一 2 , IL 一 6 的分泌高
6042ǎ一尸:、,à塑地Z! 、二
nUnù
ǎ,`、二à装也Z-曰一
时间 t ( h )
图 1
.
6 7 0
-
荆盆 (产` /耐 ) ·
不同剂量 CI A 协同 P H A 对诱生
I L
一
2的影响
图 4 I L一 2诱生动力学
1一 P H A + IC A Z
一
P H A 3
一
I C A
峰时相为 48 h , I L 一 3 的分泌高峰时相为作用
后 7 2 h。 I C A可以促进 H P A对 I L 一 2、 3、 6的
诱生效应 。 IC A有较弱的诱生 IL 一 2、 3、 6的作
用 。
T ~0 5
: 1 时杀伤活性最高 。
3
.
4不 同剂量 I C A协同 r I L 一 2对 L K A细
胞杀伤活性的影响 : 如图 8所示 , 随 IC A 剂
量增加 , L A K 细胞对 K 56 2和 H L 一 60 细胞 的
杀伤活性增强 ,呈剂量依赖关系 。
`一一一一刁 ’
拼升拼/ \ 3 减一俄 23021ǎ承à划胆又吠曰
相印20ǎ一已、曾à定划民·
、
12 2 4
时间
,
l之) 7 2 8 4
图 5 I L一 3诱生动力学
1
一
P H A + IC A Z
一
P H A 3
一
I C A
ǎ一已洛)划胆91曰
时间 r (! : )
图 6 1 厂 6诱生动力学
1 0 2 0 3 0
剂 址 (” 以闲 )
图 8 不同剂 t CI A 和 r IL 一 2 对 L A K 细
胞活性的影响 ( E : T 一 25 : 1 ;第 5
天检测 )
1一 H L
一
6 0 2
一
K s ` 2
3
.
5 I C A 协同 r I L 一 2对 L A K 细胞杀伤活性
的影响 : 如 图 9 所示 , I C A + r I L 一 2 对 K 5 6 2和
H L
一
6 0 细胞的杀伤活性以 E : T 一 50 : 1 时
明显 ,随效靶细胞比例降低 , L A K 细胞杀伤
活性也降低 。
40321
ǎ承à塑她匕哎曰
<ǐ .JC一液l养巧愁培!叨3021
ē求à塑也义Z
1 2
.
5 : 1 2 5
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E : T
1 2
.
5
:
_ 2 5 ,
E :
一
I
图 7 I C A 对 N K 活性的影响
I e ^
:
2 0拌g /m l ,培养 z d 后检测
3
.
3 I C A 对 N K 活性的影响 : 如 图 7 所示 ,
I CA 可显著提高 N K 细胞的杀伤活性 , 以 E :
图 , I C A + r I L一 2对 L A K 细胞活性的影响
3
.
6 L A K 细胞杀伤活性的动态观察 : 如图
10
,
n 所示 , cI A 可提高 L A K 细胞杀伤活
性 , 与 lr L 一 2 有协同作用 。 观察 1 、 3 、 5d 的
L A K 细胞杀伤活性 , 可见第 5 天时 L A K 细
胞对 K 56 2和 H L 一 60 细胞的杀伤活性最高 。
(中草药 ) 19 9 6 年第 2 7 卷第 1 1期 6 7 1
ǎ户à裂定公 V
图 1 0
1 3亏时间 (d )
L AK 细胞杀伤动力学 ( E:T 一
25
: 1靶细胞 :K “ 2第 5天检测 )
1一 r l l
J一 2+Z C AZ
一 r I L
一 3 2一I C A
0,`
ǎ争)塑也盆哎`
l ” 犷~ 一一一一亨
时 .f1 ( d )
图 1 L A K 细胞杀伤动力学 ( E , T -
2 5
:
1 靶细胞 : H L 一 6 0 ,第 5天检测 )
1一 r I L
一
I+ IC A Z
一r IL 一 2 3一 IC A
3 讨论
本文研究了淫羊霍贰对人扁桃体单个核
细胞产生 白细胞介素 2 、 3 、 6 及对 N K 、 L A K
细胞杀伤活性的影响 。结果表明 : 淫羊蕾贰有
协同 P H A 促进 I L 一 2 、 3 、 6 分泌的作用 , 还可
以提高 N K 、 L A K 细胞杀伤活性 。 由于细胞
因子的生物活性广泛 ,不 同细胞因子之间相
互作用 , 构成了细胞因子调节网络 〔的 。 I L 一 6
可以协 同 IL 一 3 支持多能造血干细胞的增
殖 〔” 。 淫羊霍贰能促进 I L 一 3 、 I L 一 6 的产生 。 因
此有促进造血的功能 。这与传统医学认为 ,淫
羊霍可以 “ 补肾壮阳 ” 、 “ 肾主骨藏精 , 生髓化
血 ” 的观点 〔 l0j 是一致的 。 同时 ,为临床应用淫
羊霍治疗再障及缓解化疗后骨髓造血功能抑
制提供了实验依据 。
目前 , I L 一 2 / L A K 细胞生物疗法 , 用于临
床治疗肿瘤取得了一定的疗效 , 因大量使用
IL
一 2 和 L A K 细胞 ,可引起发烧 、 毛细血管渗
漏综合征等一系列剂量限制性的毒副作用 ,
在一定程度上限制了其应用 。 淫羊蕾贰可促
进 IL 一 2 、 I L 一 6 的产生 ,增强 L A K 细胞的杀伤
活性 , 因此 , 为改进 IL 一 2/ L A K 细胞疗法 , 提
高其疗效 ,提供了一种较理想的生物反应调
节剂 。
本文为淫羊霍在免疫调节和提高造血功
能方面的研究和应用提供 了一定的理论依
据 。
参 考 文 献
l 赵 勇 ,等 . 中草药 , 1 9 94 , 2 5 ( 1 1 ) : 60 3
2 王天然 ,等 . 药学通报 , 19 8 7 , 2 2 ( 9 ) ; 53 3
3 王天然 ,等 . 中国免疫学杂志 , 1 9 86 , 2 ( 2) : 74
4 M o s m a n n T
, e t a l
.
J Im m u n o I M e t h o d s
,
1 9 8 3
,
6 5
:
5 5
5 G i lli s S
, e t a l
.
J Im m
u n o l
, 1 9 7 8
, 12 0
:
2 0 2 7
6 C u i ZY
, e t a l
.
B i o t h e r a p y
,
1 9 9 3
,
7
:
17 9 7
7 陈丙莺 ,等 . 上海免疫学杂志 , 1 9 8 9 , 9 : 2 18
8 曹雪涛 . 国外医学免疫学分册 , 1 9 90 , 13 : 2 38
9 W a n g G G
, e t a l
.
I m m u n o l T o d a y
,
1 9 88
,
9
:
1 3 7
10 杨医亚主编 . 中医学 . 北京 : 人民卫生出版社 , 1 98 7 . 27 、
1 9 7
( 1 9 9 5
一
0 4
一
1 9 收稿 )
S t u d i e s o n t h e I m m u n o M o d u l a t o r y A e t i o n o f I c a r r i n
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6 7 2
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.
南沙参多糖对小鼠免疫器官辐射损伤的防护
兰州医学院病理生理教研室 (7 3 0 0 0 0 )葛明珠 谁 赵亚莉 任少林 ”
摘 要 口服南沙参多塘 1 9 /kg 、 。. 59 /kg 一周后能明显对抗6U C 。 一 y 线所致小鼠外周血白细胞总
数降低和胸腺 、 脾脏重量减轻 ;使照射小鼠外周血酸性 a 一禁酚醋酸醋酶染色法 ( AN AE )显示淋巴
细胞 ( ANE A一 )比率升高 , T H / T s 比值升高 ,腹腔巨噬细胞吞噬功能明显增强 ;显著减轻小鼠胸腺 、
脾脏病理损伤 ,使修复加速 ,从而使 6 . 0 G y 照射小鼠 3d0 存活率提高 巧 % 。
关祖词 南沙参多糖 辐射损伤 免疫 淋巴细胞亚群 巨噬细胞 存活率
中等以上 `℃ o 一 y 剂量全身照射引起免疫
功能抑制 , 导致 内源性感染的发生和外源性
感染 的加重 ,合理应用抗生素是国 内七八十
年代研究治疗急性放射综合征有效方案重要
组成部分 〔 , 〕 , 近十多年来对 中药增强免疫功
能的报道较多 , 我们观察南沙参多糖对小鼠
免疫器官辐射损伤的防护作用 。
1 材料与方法
1
.
1 动物 : 昆明种小鼠 ,雄性 18 一 2 9 ,兰州
生物制品研究所提供 。
1
.
2 药 品 : 南 沙 参 多 糖 由 A de n oP ho ar
P o t a n i n i i K o r s h 中提得 , 分子量 9 9 0 0 一 5 9
3 6 2
, 棕黄色 ,溶于水 , p H 6 , 由兰州大学化学
系提供 。
1
.
3 方法
1
.
3
.
1 外周血 W B C 总数及胸腺 、 脾脏指数
测定 : 小鼠分 4 组 : 正常对照组 、 照射组 、 19 /
k g 南沙参多糖 + 照射组 、 0 . 59 / k g 南沙参多
糖+ 照射组 。 同等条件下饲养 ,除正常对照组
外 ,其余 3组每天灌 胃 1 次 ,分别给予盐水及
南沙参多糖 ,共 1 周 ,第 8 天用 `℃ o 一 y 线一次
性全射照射 ,总吸收剂量 6 . o G y , 照射后 3 h2
眼眶采血 ,做 W B C 计数 。 处死小鼠 ,取出胸
腺 、 脾脏 ,扭力天平称重 , 结果分别以胸腺指
数及脾脏指数表示 ( m g / 1鲍 体重 ) 。
1
.
3
.
2 免疫功能的测定 : 小 鼠分 4 组 ,饲 养
用药同前 , 第 8 天 3 组灌胃小鼠一次性 60 C o -
y 线全射照射 , 总剂量 4 . o G y ,照射后再饲养
l o d
,第 1 天按文献 〔幻的方法做腹腔巨噬细
胞功能测定 , 计腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬
指数 ; 同时眼眶采血 ,按文献〔 2〕的方法做外周
血淋巴细胞酷酶染色 ,油镜下计数 T 、 B 淋巴
细胞 ,计算 A N A E 一 百分率 , T H / T S 比值 ;最
后取胸腺 、 脾脏福尔马林固定 , H E 染色 , 光
镜下观察病理改变 。
1
.
3
.
3 3 d0 存活率观察 : 小鼠 60 只分 3 组 ,
不设正常对照组 ,饲养用药同前 ,第 8 天一次
性 6O C o 一下线全射照射 ,总剂量 6 . o G y , 照后再
饲养 3 o d ,观察各组存活率见表 1 。
表 1 各组小鼠 3d0 存活率
组别 小鼠数 (只 ) 30 d 存活率 (% )
照射组 2 0 0
南沙参多糖 ( 19 / k g ) + 照射组 20 巧
南沙参多糖 (0 . 5 9 / k g ) + 照射组 20 巧
数和正常小鼠相 比有显著降低 , 尸 < .0 01
2 结果
一
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,
L a n z h
o u
现在工作单位北京医科大学病理生理教研室
二 海南医学院附属医院中心药房
《中草药 ) 19 9 6 年第 2 7 卷第 11 期 . 6 7 3 .