全 文 ：2. 9　稳定性实验 取供试品溶液 (050111)在室温下放置 , 精密
吸取上述溶液 , 测定 1次 /h,记录峰面积。结果表明 , 样品在 8 h
内稳定。
表 1　回收率实验结果
编
号
样品量
C /μg m l- 1
加入量
C /μg m l- 1
回收量
C /μg m l- 1
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1 39. 147 21. 440 21. 483 100. 2
39. 147 42. 880 44. 252 103. 2
39. 147 64. 320 66. 185 102. 9
2 40. 889 21. 440 21. 562 100. 4 101. 6 1. 1
40. 889 42. 880 43. 995 102. 6
40. 889 64. 320 65. 478 101. 8
3 41. 111 21. 440 21. 547 100. 5
41. 111 42. 880 43. 395 101. 2
41. 111 64. 320 65. 542 101. 9
2. 10　样品测定 为同一厂家的市售药(批号 050111, 050112,
050113), 按 2. 3 项下制备 , 按上述色谱条件进样 , 结果均在
90. 0% ～ 110. 0%的范围内 , 批内相对偏差均小于 0. 5%。 结果
见表 2。
表 2　样品含量测定结果 %
批号 含量*　1　　　　　　2　 平均含量 相对偏差
050111 97. 95 98. 62 98. 3 0. 34
050112 100. 69 100. 77 100. 7 0. 04
050113 101. 16 101. 21 101. 2 0. 02
　　*为标示量的百分比
3　讨论
3. 1　 取对照品溶液 , 在 200 ～ 400范围内扫描 ,虽然对乙酰氨基
在 246 nm处有最大吸收 , 但实验结果证明 , 以 246 nm作为检测
波长 , 保留时间为 2. 9 m in,不理想 , 经不断调整流动相配比 , 保留
时间无明显改变 ,所以本实验以 254nm作为检测波长 [ 2] 。
3. 2　 采用高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚栓的含量 ,方法简
便 、快速 、准确。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会. 中国药典 , Ⅱ部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:172.
[ 2 ] 　国家药典委员会.国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准 ,
第 10册 [ S] . 2002:96.
收稿日期:2005-08-08;　修订日期:2006-03-19
作者简介:张　锐(1976-),男(汉族),江西进贤人 ,现任江西省药物研究
所助理研究员 ,硕士学位 ,主要从事中药化学成分及质量评价工作.
高效液相色谱法同时测定
杏香兔耳风中 3种活性成分的含量
张　锐1, 2 , 张爱华 1 , 张正行2
(1.江西省药物研究所 ,江西 南昌　330029;　2. 中国药科大学 ,江苏 南京　210009)
摘要:目的 建立同时测定杏香兔耳风中原儿茶酸 、原儿茶醛和绿原酸含量的方法。方法 采用反相高效液相色谱法 , 以
ALL tech C18(4. 6 mm ×250 mm , 5 μm)为色谱柱 , 甲醇-1%冰醋酸水溶液(7∶93)为流动相 , 检测波长 280 nm , 流速:1. 5m l m in-1 , 柱温 40℃。结果 原儿茶酸 、原儿茶醛和绿原酸的线性范围分别为 0. 022 11 ～ 0. 442 2μg(r=0. 999 8), 0. 015 01
～ 0. 210 2 μg(r=0. 999 9), 0. 098 32 ～ 1. 966 4μg (r=0. 999 9);回收率分别为 98. 39% (RSD =1. 90%), 97. 89% (RSD
=2. 11%), 98. 27% (RSD =2. 22%)。结论 该法简便 、准确 、重现性好 , 适用于杏香兔耳风中 3种成分的同时测定。
关键词:杏香兔耳风;　原儿茶酸;　原儿茶醛;　绿原酸;　高效液相色谱法
中图分类号:R284. 2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2006)07-1209-01
HPLC Determ ination of 3 Active Components inA insliaea fragrans Champ
ZHANG Ru i
1, 2 , ZHANG A i-hua1 , ZHANG Zheng -xing2
(1. J iangxiP rovincia l Institute ofMateria Medica , Nanchang 330029, China;2. China Pharmaceutica lUn i-
versity, Nan jing 210009, Ch ina)
Abstract:Objective AnH PLC m ethod was estab lished to de te rm ine the conten ts o fAinsliaea fragrans Champ, 3, 4-d ihydroxy-
benzo ic acid, 3, 4-dihydroxybenza ldehyde and ch lo rogenic ac id in Ainsliaea fragrans Champ. Methods The sam ples we re sepa ra ted
on aALL tech C18 co lum n(4. 6 mm ×250 mm , 5 μm)w ith them ob ile pha se o fm e thano l-1% ace tic acid(7∶93). The flow ra te wa s
1. 5 m l m in-1 , the co lumn tem pe ra turew as 40℃ and the de tec tion wave leng th was set at 280 nm. Resu lts The linear ranges of 3,
4-dihydroxybenzoic ac id, 3, 4-d ihyd roxybenzaldehyde and ch lo rogenic acid we re 0. 022 11 ～ 0. 442 2 μg (r=0. 999 9), 0. 015 01
～ 0. 210 2μg(r=0. 999 9), 0. 098 32～ 1. 966 4 μg (r=0. 999 9) respective ly. The average recove ry ratew ere 98. 39% (RSD
=1. 90%), 97. 89% (RSD =2. 11%), 98. 27% (RSD =2. 22%) re spective ly. Conclusion The m ethod is sim ple and qu ick
w ith good reproduc ibility, it is suitab le for the de te rm ina tion o f the con tents of 3 active com ponents.
Key words:Ainsliaea fragrans Cham p;　 3, 4-dihydroxybenzo ic acid;　 3, 4-dihydroxybenza ldehyde;　 Ch lo rogenic acid;　HPLC
　　杏香兔耳风为菊科兔耳风属植物杏香兔耳风 Ainsliaea fra-
grans Champ.的干燥全草, 具有清热 、利湿 、凉血 、解毒的功效 [ 1] ,
《上海市药材标准》《江西省中药材标准》均有收载, 但仅有理化鉴
别项 ,目前尚未有杏香兔耳风含量测定的报道, 我们对杏香兔耳风
进行了系统的化学成分研究 , 分离得到了原儿茶酸 、原儿茶醛和绿
原酸等成分(另文发表)。这 3种成分具有广泛生物活性 , 为更全
面的考察药材的质量 , 本研究建立了 HPLC法同时测定杏香兔耳
风中原儿茶酸、原儿茶醛和绿原酸的高效液相色谱法。本方法简
单 、灵敏 、准确 ,为该中药的质量评价提供了科学依据。
1　器材
1. 1　仪器 W ate rs高效液相色谱系统 , 515泵 , 2487紫外检测器 ,
1209
LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2006 VOL. 17 NO. 7 时珍国医国药 2006年第 17卷第 7期
岛津 CTO-10AS VP柱温箱 , HS色谱数据工作站。M ettleM3型电
子天平。
1. 2　试剂与样品 甲醇为色谱纯。 醋酸乙酯 、冰醋酸均为分析
纯。水为二次重蒸水。原儿茶醛 (中国药品生物制品检定所提
供 , 批号 810-200205)、原儿茶酸 (自制 , 含量按面积归一化法测
定纯度 99. 3%)、绿原酸 (中国药品生物制品检定所提供 , 批号
753-200111)。杏香兔耳风药材购于各地药材市场 , 由江西省药
物研究所朱良辉副研究员鉴定为菊科兔耳风属植物杏香兔耳风
Ainsliaea fragrans Cham p. 的干燥全草。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件 色谱柱为 ALL tech A lltim aTM (填料为 C18 , 4. 6 mm×250 mm , 5 μm);流动相为甲醇-1%冰醋酸水溶液(7∶93),临
用前以微孔滤膜滤过并经超声脱气处理;紫外检测波长 280 nm;
流速 1. 5 m l /m in;柱温 40℃;进样量为 10μl。理论塔板数按原儿
茶酸计 , 应不低于 6 000;按原儿茶醛计 ,应不低于 7 000;按绿原
酸计 , 应不低于 5 500。色谱图见图 1。
a-对照品　　 b-样品
1.原儿茶酸　　2.原儿茶醛　　 3.绿原酸
图 1　HPLC图
2. 2　标准曲线的制备 精密称取原儿茶酸对照品 2 m g, 原儿茶
醛对照品 1 mg, 绿原酸对照品 10 m g,置于 25 m l棕色量瓶中 ,加
甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 制成混合对照品储备溶液。精密
吸取混合对照品储备溶液 0. 25, 0. 5, 1. 0, 2. 0, 4. 0, 5. 0 m l分别置
于 10 m l棕色量瓶中 , 加入甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,制成系列浓度
的混合对照品溶液。微孔滤膜滤过 , 取续滤液按上述色谱条件进
行分析 , 测定峰面积。以峰面积 Y 对进样量 X(μg)绘制标准曲
线 , 原儿茶酸 、原儿茶醛和绿原酸回归方程 、相关系数 、线性范围
分别为:
原儿茶酸:Y = 652 473. 7X - 1 161. 1 ( r =0. 999 8)
0. 022 11 ～ 0. 442 2μg
原儿茶醛:Y =2 023 629. 9X +2 261. 8 ( r=0. 999 9)
0. 015 01 ～ 0. 210 2μg
绿原酸:Y = 694 030. 4X +2 508. 8 (r=0. 999 9) 0. 098 32
～ 1. 966 4 μg
2. 3　检测限的测定 在该色谱条件下 , 以信噪比为 3计 , 原儿茶
酸 、原儿茶醛和绿原酸的最小检测量分别为 2, 1, 10 ng。
2. 4　供试品溶液的制备 精密称取本品粉末 0. 5 g[同时另取本
品测定水分(2005版药典附录Ⅸ H第一法)] , 精密称定 , 置 250
m l烧瓶中 ,加水 100 m l, 回流提取 3次 , 2 h /次 , 滤过 , 合并滤液 ,
浓缩至约 90 m l, 定量转移至 100 m l容量瓶中 ,用稀盐酸调 pH 为
2,加水稀释至刻度。摇匀 ,滤过 , 精密量取续滤液 50 m l至分液
漏斗中 , 用醋酸乙酯提取 4次(50, 30, 30, 30m l),合并醋酸乙酯提
取液 , 蒸干 ,残渣加甲醇溶解并转移至 10 m l量瓶中 , 加甲醇至刻
度 , 摇匀 ,用 0. 45μm滤膜过滤即得。
2. 5　精密度实验 精密称取杏香兔耳风样品 0. 5 g,按 2. 4项下
方法制备后 ,在上述色谱条件下进行分析 , 连续进样 6次 ,计算原
儿茶酸 、原儿茶醛 、绿原酸的峰面积 ,结果其 RSD 分别为 0. 79%,
1. 43%, 1. 32%。表明精密度良好。
2. 6　重复性实验 精密称取同一批样品 6份 , 每份 0. 5 g, 按 2. 4
项下方法制成供试品溶液 ,按上述色谱条件测定 , 计算原儿茶酸 、
原儿茶醛 、绿原酸的含量。结果其 RSD 分别为 2. 05%, 1. 74%,
2. 25%。表明重复性良好。
2. 7　稳定性实验 取同一供试品溶液在室温下放置 , 每隔 2 h测
定 1次 , 记录色谱峰面积 , 结果表明样品溶液在 10 h内稳定性
良好。
2. 8　回收率实验 精密称取已测知含量的样品适量共 6份 ,精密
加入混合对照品溶液 ,按照 2. 4项下方法制备后 ,在上述色谱条
件下分析 ,计算回收率。结果见表 1。原儿茶酸的平均回收率为
98. 39%, RSD 为 1. 90%;原儿茶醛的平均回收率为 97. 89%, RSD
为 2. 11%;绿原酸的平均回收率为 98. 27%, RSD 为 2. 22%。
表 1　方法回收率的测定
序
号
成
份
样品中含量
m /mg
对照品加入量
m /mg
测得量
m /mg
回收率
(%)
1 原儿茶酸 0. 196 5 0. 211 4 0. 399 8 98. 02
原儿茶醛 0. 102 3 0. 101 3 0. 205 8 101. 07
绿原酸 0. 546 5 0. 587 5 1. 145 7 101. 03
2 原儿茶酸 0. 201 4 0. 211 4 0. 418 4 101. 36
原儿茶醛 0. 104 9 0. 101 3 0. 204 3 99. 09
绿原酸 0. 560 2 0. 587 5 1. 137 9 99. 15
3 原儿茶酸 0. 200 0 0. 211 4 0. 409 8 99. 62
原儿茶醛 0. 104 1 0. 101 3 0. 201 4 98. 04
绿原酸 0. 556 2 0. 587 5 1. 132 9 99. 06
4 原儿茶酸 0. 198 2 0. 211 4 0. 399 2 97. 46
原儿茶醛 0. 103 2 0. 101 3 0. 199 8 97. 70
绿原酸 0. 551 3 0. 587 5 1. 108 4 97. 33
5 原儿茶酸 0. 202 0 0. 211 4 0. 404 8 97. 91
原儿茶醛 0. 105 2 0. 101 3 0. 198 3 96. 03
绿原酸 0. 562 0 0. 587 5 1. 132 3 98. 50
6 原儿茶酸 0. 200 5 0. 211 4 0. 395 3 95. 96
原儿茶醛 0. 104 4 0. 101 3 0. 196 3 95. 42
绿原酸 0. 557 8 0. 587 5 1. 082 7 94. 53
　　n =6
2. 9　样品的测定 按 2. 4项制备的供试品溶液 , 按上述色谱条件
测定 , 计算各批药材原儿茶酸 、原儿茶醛 、绿原酸的含量。每种样
品测定 2次。结果见表 2。
表 2　样品分析结果 %
产地 原儿茶酸 原儿茶醛 绿原酸 总量
1号药材(湖南) 0. 026 61 0. 010 90 0. 037 5 0. 074 98
2号药材(湖南) 0. 056 88 0. 024 54 0. 226 5 0. 307 92
3号药材(安徽) 0. 024 82 0. 007 85 0. 070 2 0. 102 87
4号药材(贵州) 0. 038 46 0. 016 78 0. 136 0 0. 191 24
5号药材(安徽) 0. 065 41 0. 030 44 0. 180 7 0. 276 55
平均含量 0. 042 44 0. 018 10 0. 130 1 0. 190 71
3　讨论
3. 1　 因为 3个活性组分中原儿茶醛的含量最低 , 为了提高对其
的灵敏度 , 我们用光电二极管阵列检测器测定了对照液及样品溶
液的 H PLC的三维谱图和等高线谱图 , 由谱图确定以 280 nm 作
为检测波长时 ,对 3种组分的灵敏度相当 , 干扰少 ,样品的色谱图
图形良好。
3. 2　 用反相柱进行样品的 H PLC分析 , 首选甲醇-水二元系统。
因为 3个活性成分均含有酚羟基 , 经样品实验测定 , 必须加大流
动相中酸的比例 ,改善峰形 , 以利于准确进行定量测定。经实验
1210
时珍国医国药 2006年第 17卷第 7期 LISH IZHEN MED IC INE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2006 VOL. 17 NO. 7　
优化 , 得到甲醇 - 1%冰醋酸水溶液 (7∶93)体积比时分离效果
最佳。
3. 3　 本研究采用 40℃柱温 , 可减少流动相的黏度 , 在样品实际
分析中可实现降低柱压 , 改善分离效果 , 而并不影响柱寿命 ,得到
的色谱图分离情况良好 。为了加快分析速度 , 本研究采用 1. 5
m l /m in的流速 , 可减少分析时间并改善峰形。
3. 4　 对于提取方法的选择 , 本文分别考察了冷浸提取 、回流提
取 、超声提取等方法 , 其中 , 冷浸法提取效率低 , 用回流法提取最
为完全。另外比较用水 、50%乙醇 、无水乙醇作为提取溶剂 ,水的
提取效果最好 , 系统分析提取溶剂量 、提取时间 、提取次数后 , 采
用 200倍水提 3次 , 2 h /次效果最好。
3. 5　 分析结果表明 ,各地生药样品中均含有原儿茶酸 、原儿茶
醛和绿原酸 , 但不同地区样品含量有较大差异。这可能是因为杏
香兔耳风生药受生长环境 、生长时间及加工储存条件等因素的
影响。
参考文献:
[ 1 ] 　江苏新医学院. 中药大辞典 [M ] .上海:上海人民出版社 , 1977.
收稿日期:2005-08-08;　修订日期:2006-03-12
作者简介:李玉英(1964-),女(汉族),广东韶关人 ,现任广东省河源市药
品检验所主管药师 ,主要从事药品检验工作.
紫外光线法测定气阴养骨片中丹皮酚含量
李玉英 , 吴俊贤 , 谢雄瑞
(广东省河源市药品检验所　517000)
摘要:目的 为控制气阴养骨片的质量 , 建立气阴养骨片中丹皮酚含量测定方法。 方法 用水蒸气蒸馏法提取制剂中丹
皮酚 , 并定容至规定量。 检测波长 274 nm, 吸收系数(E1%1 cm )862。结果 丹皮酚线性范围 2. 4 ～ 12. 0 μg /m l, r=
0. 999 9,平均回收率为 99. 98%, RSD 为 0. 1% (n=5)。结论 该法能准确测定丹皮酚含量。
关键词:紫外分光光度法;　气阴养骨片;　丹皮酚;　含量
中图分类号:R284. 2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2006)07-1211-01
　　牡丹皮为毛茛科植物牡丹 Paeonia suffruticosa Andr的干燥根
皮。秋季采挖根部 , 除去细根 ,剥取根皮 , 晒干。干燥牡丹皮的主
要成分丹皮酚。丹皮酚有镇静 、催眠 、镇痛 、抗惊厥 、解热 、抗炎 、
抗过敏作用 , 并能减少毛细血管的通透性 , 丹皮酚对体外痢疾杆
菌 、伤寒杆菌 、绿脓杆菌 、白喉杆菌 、金黄色葡萄球菌 、百日咳杆菌
等均有较强的抑菌作用 ,对流感病毒及常见致病性皮肤真菌亦有
抑制作用。鉴于上述 ,气阴养骨片作为医院制剂 ,为对其进行质
量控制 , 实验采用紫外光线(UV)法测定气阴养骨片中丹皮酚的
含量。
1　仪器与试药
UV-1601日本岛津可见紫外分光光度计;丹皮酚对照品 (中
检所生产 批号 708-9003);气阴养骨片(广东省河源市中医院提
供 批号为 040720、041103、050226 )
2　方法与结果
2. 1　气阴养骨片处方及制备 杜仲 220 g, 续断 180 g,枸杞子 300
g, 熟地黄 300 g,山茱萸 100 g,白芍 220 g ,山药 300 g,牡丹皮 150
g, 五味子 100 g , 太子参 300 g, 麦冬 150 g , 茯苓 220 g, 女贞子
300 g , 丹参 150 g, 五指毛桃 300 g, 飞天禽罗 250 g。依法制成
10 000片。
2. 2　贮备液的制备 精密称丹皮酚对照品 15. 0 mg置 250 m l的
量瓶中 , 加适量水超声使溶解后 , 加水稀释至刻度 , 即得 60 μg /
m l的贮备液。
2. 3　测定波长的选择 精密量取贮备液 2. 0 m l置 25 m l量瓶中 ,
加水至刻度;另采用水蒸气馏法配制阴性对照溶液。以水为空
白 , 于 200 ～ 350 nm波长范围内扫描 ,在 274 nm波长处有最大吸
收 , 而阴性对照溶液在 274 nm 波长处无干扰吸收。因此确定
274 nm 为测定波长。
2. 4　标准曲线的制备 用水将贮备液稀程成 2. 4, 4. 8, 7. 2, 9. 6,
12 μg /m l的对照品溶液 ,以水作空白 , 分别在 274 nm波长处测定
吸光度 A。 将浓度 C对吸光度 A 回归 , 得回归方程为 Y =
20. 577 8X -147. 583 8,相关系数 r为 0. 999 9。
结果表明在 2. 4 ～ 12 μg /m l的浓度范围内 ,丹皮酚吸光度与
浓度线性关系良好。
2. 5　稳定性实验 将上述溶液室温下放置 6 h后测定吸收度 , 结
果几乎无变化。
2. 6　回收率实验 精密量取贮备液 1, 2, 3, 4, 5 m l分别置 25 m l
的量瓶中 ,用样品液稀至刻度 , 以水为空白 , 分别在 274 nm波长
处测定吸光度 A、计算含量 , 求得平均回收率为 99. 98%, RSD 为
0. 1% (n =5)。结果见表 1。
表 1　回收率测定结果
加样前样品
液 A值
加入丹皮
酚 A值
测得 A
值
测得 A值减
去样品 A值
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
0. 246 2 0. 192 9 0. 439 0 0. 192 8 99. 95%
0. 246 2 0. 380 5 0. 626 0 0. 379 8 99. 82
0. 246 2 0. 581 4 0. 827 3 0. 581 1 99. 95 99. 98 0. 1
0. 246 2 0. 771 7 1. 017 8 0. 771 6 99. 99
0. 246 2 0. 956 8 1. 205 0. 957 0 100. 21
　　n =5
2. 7　样品测定 取本品 60片 ,除去包衣后 , 精密称定重量 , 研细 ,
精密称取适量 (约相当于 20片)用水蒸气蒸馏 , 收集馏出液约
450 m l, 置 500 m l的量瓶中 , 加水至刻度。同时做空白实验 , 以空
白实验馏出液为空白 ,在 274 nm波长处测 A。按吸收系数(E1%
1 cm )为 862计算含量。结果见表 2。
表 2　气阴养骨片中丹皮酚含量测定结果
序号 批号 含量 m /mg
1　　2 平均含量 m /mg RSD(%)
1 040720 0. 141　0. 137 0. 139 1. 4
2 041103 0. 136　0. 139 0. 137 0. 7
3 050226 0. 148　0. 144 0. 146 1. 4
　　n =3
3　讨论
气阴养骨片是疗效确切 , 深受患者欢迎的医院制剂 , 但一直
以来医院制剂质量缺乏有效 、科学 、规范的控制。为保证药品安
全 、有效 、质量可控 ,特制定气阴养骨片中丹皮酚含量测定方法。
该法能准确测定制剂中丹皮酚的含量。
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LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2006 VOL. 17 NO. 7 时珍国医国药 2006年第 17卷第 7期