全 文 :第 10卷第 24期·总第 152期
2012 年 12 月·下半月刊
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紫外分光光度法测定参须中人参总皂苷的含量
※
万玉华
1 戴 洁 2 黄春静 1 刘家星 2 冯爱珍 2 刘 坤 2 何金泽 2
(1 霸王(广州)有限公司,广州 510440; 2 广州中医药大学,广州 510006)
摘 要:目的 建立参须中人参总皂苷的含量测定方法。方法 采用紫外可见分光光度法,以香草醛∶高氯酸∶冰乙酸(2∶8∶50)为
显色剂,于波长 555nm 处测定其吸光度。结果 人参总皂苷的线性范围为 24.12~193.00μg (r=0.9996);平均加样回收率为 102.3%,
RSD=2.8%。测定三批参须(批号:20100111、20100823、20100824)干燥品中人参总皂苷的含量分别为 81.1mg/g、101.1mg/g和 100.1mg/g。
结论 该方法简单、灵敏、准确可靠、重现性良好,可用于参须药材中人参总皂苷的含量测定。
关键词: 参须;人参皂苷;紫外分光光度法;含量测定
doi:10.3969/j.issn.1672-2779.2012.24.113 文章编号:1672-2779(2012)-24-0146-02
人参(Radix Ginseng)为五加科植物人参(Panax
ginseng C. A. Mey.)的干燥根,中国药典记载,人参性
平,味甘、微苦。归脾、肺、心经。具有大补元气,复
脉固脱,补脾益肺,生津,安神的功效[1]。根据传统用
药经验,人参主根和须根均作为人参入药,随着人参炮
制加工方法的发展,市场上逐渐出现人参主根和须根两
个不同的用药部位,经验普遍认为人参主根的人参皂甙
含量相高于参须,主根的市场价格也高于须根。目前研
究人参的药用部位多为其主根,对须根的研究比较少。
本研究建立参须中人参总皂苷含量测定的方法,实验结
果表明该方法准确、快速,为参须的深入研究及质量控
制提供了更加可靠的方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器 紫外分光光度计(Bluestar-A 北京莱伯泰科
仪器有限公司);旋转蒸发器(RE-52A 巩义予华仪器有
限责任公司);分析天平(万分之一, SARTOIUSAG
BS110S 北京赛多利斯天平有限公司);高速匀浆机
(A200-18G,上海昂尼仪器仪表有限公司);恒温水浴
锅(HH-S型 巩义市予华仪器有限责任公司);超声波清
洗器(KQ3200B 昆山市超声仪器有限公司);循环水式
多用真空泵(SH-B 巩义市仪器有限责任公司)。
1.2 试药 参须药材(购买于广州市清平药材批发市
场,批号:20100111、20100823、20100824)由广州中
医药大学中药学院赖小平教授鉴定为参须药材;人参皂
苷 Re 对照品(中国食品药品检定研究院,批号:
11041201)。香草醛(批号:20100315,天津市百世化工
有限公司);高氯酸(批号:20100904,天津市百世化工
有限公司);冰醋酸(批号:20090320,天津市百世化工
有限公司);乙醇(批号 20100806,天津市百世化工有限
公司),均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液与供试品溶液的制备 对照品溶液的
制备:取干燥的人参皂苷 Re对照品 6mg,精密称定,置
5ml 容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得
人参皂苷 Re对照品储备液。再精密移取储备液 2ml至
※基金项目:广东省白云区战略性新兴产业项目[No:2011-KZ-103];
广东省广州市白云区科技计划课题[No:2009-SZ-44]
10ml量瓶中,加甲醇定容,摇匀,即得浓度为 0.2412mg/
ml的人参皂苷 Re对照品溶液。
供试品溶液的制备:分别取 20100111 批样品约
0.05g,0.1g,0.2g,置圆底烧瓶中,加 75%乙醇 50ml,
加热回流 1.5h,放冷,滤过,滤渣用乙醇洗涤 2~3次,
收集滤液,减压浓缩至无醇味,用 20ml的蒸馏水溶解,
转移至分液漏斗中。加乙醚萃取 3次(20ml/10ml/5ml),
弃去乙醚层。水层加入水饱和正丁醇萃取 4 次
(30ml/20ml/15ml/10ml),合并正丁醇萃取液,减压回
收正丁醇至干,用甲醇分次洗涤、转移至 25ml 容量瓶
中,甲醇定容。
2.2 测定波长的选择 精密吸取人参皂苷 Re 对照品溶
液 0.6ml,加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸
0.8ml,在 60℃下水浴加热 15min,冰水冷却 10min,加
入冰醋酸 5ml,摇匀即得待测定对照品溶液[4]。同时取供
试品溶液 0.6ml,按待测对照品溶液的显色方法进行显色
制备即得待测定供试品溶液。
照紫外-可见分光光度法(2010版药典附录 V A )[5]
测定。结果:人参皂苷与香草醛-高氯酸试剂显色后,于
540-560nm处有明显紫外吸收,而且在 555nm处有最大
吸收,所以选择测定波长为 555nm。
图 1 测定波长的选择
2.3 线性关系考察 精密吸取人参皂苷 Re 对照品溶液
0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml 、0.8ml,水
浴蒸干,加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸
0.8ml,在 60℃下水浴加热 15min,冰水冷却 10min,加
入冰醋酸 5ml,摇匀[2],于波长 555nm 处测定各溶液的
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吸光度。以人参皂苷 Re重量(mg)为横坐标,以吸光度为
纵坐标,绘制标准曲线。实验结果显示人参皂苷在
24.12~193.00μg 范围内呈良好的线性关系,相关系数 r
为 0.9996,回归方程为 Y=4.997X+0.002809。
2.4 精密度试验 精密吸取浓度为 0.2412mg/ml人参皂
苷 Re 对照品溶液 0.6ml,加入 5%的香草醛醋酸溶液
0.2ml和高氯酸 0.8ml,在 60℃下水浴加热 15min,冰水
冷却 10min,加入冰醋酸 5ml,摇匀,于 555nm 处连续
测定吸光度 5 次。结果测定值的 RSD 为 1.8%,提示仪
器精密度良好。
2.5 稳定性试验 取 20100111 批样品约 0.1g,精密称
定,按“2.1”项中供试品溶液的制备方法制备,精密量
取 0.3ml,加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸
0.8ml,在 60℃下水浴加热 15min,冰水冷却 10min,加
入冰醋酸 5ml,摇匀,在显色后 20min、25min、30min、
35min、45min、60min,于 555nm 处测定吸光度。结果
显示:在 60min 内测定值的 RSD 为 1.5%,表明溶液在
1h内稳定,故本实验确定在显色后 1h内测定。
2.6 重复性试验 取 20100111批样品约 0.1g ,取 6份,
精密称定,按“2.1”项中供试品溶液的制备方法制备。
分别精密量取供试品溶液各 0.3ml,水浴蒸干,加入 5%
的香草醛醋酸溶液 0.2ml和高氯酸 0.8ml,在 60℃下水浴
加热 15min,冰水冷却 10min,加入冰醋酸 5ml,摇匀,
于 555nm处测定吸光度,计算各份供试品溶液中人参皂
苷含量。结果参须中人参总皂苷含量为 81.47mg/g,SD
为 2.0,RSD为 2.5%,提示本试验重复性良好。
2.7 加样回收率试验 人参皂苷 Re 对照品储备液的制
备:精密称取人参皂苷 Re对照品 0.04004g,置 10ml容
量瓶中,加甲醇定容,摇匀,即得浓度为 4.004mg/ml的
人参皂苷 Re对照品溶液。
取 20100111批样品约 0.05g,6份,精密称定,再
分别精密量取人参皂苷 Re 对照品储备液 1ml,按照供
试品制备方法制备,分别精密量取供试品溶液 0.3ml,
水浴蒸干,加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸
0.8ml,在 60℃下水浴加热 15min,冰水冷却 10min,加
入冰醋酸 5ml,摇匀,于 555nm处测定吸光度,计算每
份溶液人参总皂苷含量。结果表明平均加样回收率为
102.3%,RSD 为 2.8%,提示该测定方法准确度高,结
果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果
样品
编号
取样量
(g)
加入量
(mg)
吸光度 测得量
(mg)
加样回收率
(%)
±s ,D RSD
(%)
1 0.0501 4.004 0.4172 7.948 105.2
2 0.0502 4.004 0.4116 7.880 103.3
3 0.0501 4.004 0.4181 7.959 105.5
4 0.0498 4.004 0.3941 7.666 98.74
5 0.0505 4.004 0.4032 7.777 100.2
6 0.0501 4.004 0.4020 7.763 100.6
102.3±2.8
2.8
2.8 测定各批次参须中人参总皂苷的含量 分别取批
号为 20100111,20100823,20100824参须药材约 0.1g,
精密称定,按“2.1”项中供试品溶液的制备方法制备。
分别精密吸取待测溶液 0.3ml至刻度试管中,水浴蒸干,
加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml和高氯酸 0.8ml,在 60
℃下水浴加热 15min,冰水冷却 10min,加入冰醋酸 5ml,
摇匀,于 555nm处测定吸光度。人参总皂苷百分含量按
干燥品算,依次为 0.81%,1.01%,1.00%,均符合药典
人参总皂苷不得低于 0.8%的要求,结果见表 2。
表 2 不同批次药材含量测定结果 (n=3)
药材批号 人参皂苷含量(mg/g)
20100111 81.1±0.9
20100823 101.1±1.1
20100824 100.1±2.3
3 讨论
本项目以人参总皂苷为指标性成分,采用 5%香草醛
-高氯酸对溶液进行显色处理,显色的原理为高氯酸使皂
苷的羧基脱水,增加双键结构,再经双键位移,双分子
缩合等反应生成共轭双键系统,又在酸的作用下形成阳
碳离子盐而显色,从而可用紫外-可见分光光度法(比色
法)测定总人参皂苷的含量。
本研究采用紫外分光光度法测定参须中人参皂苷的
含量,该方法简便,准确度高,重现性好,可以作为参
须中人参皂苷含量的测定方法。
参考文献
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(本文校对:收稿日期:2012-10-21)
中医养生词释
1. 运行气血多运动
释义:人之气血,贵在升降出入有常,运行不息。故善养生者,
必调和气血,使之周流不息,而运行气血的一个重要途径就是多运
动。中医运动养生的内容极为丰富,种类甚广,方法极多,如气功、
导引、五禽戏、八段锦、太极拳、按摩、散步、慢跑、登山等。中
医对运动养生锻炼讲求意、息、行动的和谐统一,即意守、调息、
行动的协调统一。同时,强调运动养生也要讲究适量,不可过劳,
否则会有害于健康。
2. 平性怡神养天年
释义:人之情志活动,与气机密切相关。情志调畅,有助于气
机平顺;情志不舒,则气机紊乱或郁闷。养生旨在静神,怡情养神、
清心宁神、逐扰安神、怡情畅神、平性怡神。