全 文 ：高效液相色谱法测定凤仙透骨草中东莨菪素的含量＊
朱玲英 ,钱士辉 ,沈红 ,陈秀梅
(江苏省中医药研究院 , 南京 210028)
摘要　目的:建立高效液相色谱法测定凤仙透骨草中东莨菪素含量。方法:采用反相 AltimaC
18
(4.6 mm×250 mm, 5 μm)色
谱柱 , 流动相为甲醇 -0.1%醋酸溶液(30∶70),流速 1.0 mL· min-1 , 检测波长 345 nm,柱温 35 ℃,进样量 20 μL。结果:东莨
菪素线性范围为 39.4 ～ 591ng(r=0.9997),检测限(S/N=3)为 0.0748 ng, 平均回收率(n=9)为 98.05%。结论:该方法操作
简单 、准确 ,灵敏度高 , 可作为凤仙透骨草中东莨菪素含量的分析方法。
关键词:凤仙透骨草;东莨菪素;高效液相色谱法
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2010)05-0894-03
HPLCdeterminationofscopoletininImpatiensbalsuminaL.＊
ZHULing-ying, QIANShi-hui, SHENHong, CHENXiu-mei
(JiangsuProvincialInstituteofTraditionalChineseMedicine, Nanjing210028, China)
Abstract　Objective:ToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofscopoletininImpatiensbalsumina.
Methods:AltimaC18(250mm×4.6mm, 5μm)wasadopted;Themobilephasewasmethanol-0.1% aceticacid
(30∶70)attheflowrateof1.0mL· min-1;ThedetectionwavelengthofUVwas345nm, andthecolumntempera-
turewas35℃;Theinjectionvolumewas20 μL.Results:Thelinearrangeforthedeterminationofscopoletinwas
39.4-591 ng(r=0.9997);Thedetectionlimit(S/N=3)was0.0748 ng;Theaveragerecovery(n=9)was
98.05%.Conclusion:Theestablishedmethodissimple, accurate, sensitive, andcanbeusedtodeterminescopole-
tininImpatiensbalsumina.
Keywords:ImpatiensbalsuminaL.;scopoletin;HPLC
凤仙透骨草为凤仙花科植物凤仙花(Impatiens
balsuminaL.)的茎 ,别名:透骨草 、凤仙梗 、凤仙花梗
等 ,产于江苏 、浙江 、安徽 、湖北 、四川等地 。凤仙透
骨草入药具有祛风 、活血 、通经 、软坚 、消肿等功效 ,
被用于治疗风湿痹痛 、筋骨挛缩 、寒湿肢气 、疮癣肿
毒等[ 1, 2] 。我们对江苏产的凤仙透骨草进行了化学
成分的分离与提取 ,提取到东莨菪素(scopoletin)。
文献报道东莨菪素有很好的镇痛 、抗炎作用 [ 3, 4] 。
然而凤仙透骨草的含量测定方法报道极少 ,故本文
采用高效液相色谱法对不同产地凤仙透骨草进行东
莨菪素含量测定。该法简单 、准确 ,灵敏度高 ,为凤
仙透骨草提供了一种质量控制方法。
1　仪器与材料
1.1　仪器 Waters2695高效液相色谱系统 ,二极
管阵列检测器 , Empower色谱工作站 , Metler万分之
一 ,十万分之一电子天平 , Mili-Q纯水器 , KQ-
250E超声提取器 。
1.2　材料 甲醇为色谱纯(江苏汉邦科技有限公
司),其他试剂均为分析纯 ,东莨菪素对照品由江苏
省中医药研究院中药化学研究室提供 ,纯度达 98%
以上;药材来源:江苏品种采自江苏省盱眙县 ,其余
样品为市售商品 ,经本院中药资源化学研究室钱士
辉研究员鉴定均为凤仙透骨草。
2　方法与结果
2.1　对照品溶液的制备　精密称取东莨菪素对照
品适量 ,加入甲醇使之溶解并定容至刻度 ,摇匀 ,得
19.7 μg·mL-1对照品溶液 。
2.2　供试品溶液的制备 精密称取凤仙透骨草细
粉约 1.0g,置具塞 100mL三角烧瓶中 ,用 50mL甲
醇浸泡 20h,超声(功率为 250W)处理 20 min,上清
—894— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(5)
＊ 江苏省公益研究项目(BM2006104)
第一作者　Tel:(025)85639640;E-mail:zhuly818@ 163.com
DOI :10.16155/j.0254-1793.2010.05.018
液滤过 ,药渣继用甲醇 25 mL、20mL超声 2次 ,每次
超声 20 min,上清液滤过 ,最后用甲醇 5 mL洗涤药
渣并滤过 ,合并上述滤液 ,回收甲醇 ,残渣用甲醇转
移并定容至 5 mL量瓶内 ,过 0.45 μm滤膜 ,即得供
试品溶液。
2.3　色谱条件 色谱柱:AltimaC18 (4.6 mm×
250mm, 5 μm);流动相:甲醇 -0.1%醋酸溶液
(30∶70);流速:1.0 mL· min-1;检测波长:345 nm;
柱温:35℃;进样量:20 μL。在上述色谱条件下 ,对
照品及样品色谱图见图 1。
图 1 对照品(A)及 1号样品(B)HPLC图谱
Fig1 HPLCchromatogramsofreferencesubstance(A)andsample
No.1(B)
1.东莨菪素(scopoletin)
2.4　线性关系考察 精密吸取对照品溶液 2, 5,
10 , 15, 20, 25, 30μL,按 “ 2.3”项下色谱条件进行测
定 ,以峰面积值 Y为纵坐标 ,以东莨菪素进样量 X
(ng)为横坐标 ,绘制标准曲线 ,回归方程为:
Y=3.60×103X+1.20×104 r=0.9997
结果表明:东莨菪素进样量在 39.4 ～ 591 ng范围内
呈良好的线性关系。
2.5　精密度试验 精密吸取对照品溶液 20 μL,在
“ 2.3”项色谱条件下连续进样 6次 ,测得峰面积的
RSD(n=6)为 1.2%。
2.6　稳定性试验 取同一供试品溶液 ,分别在 0,
2, 4, 8, 12h进样测定 ,测得峰面积的 RSD(n=5)为
1.6%,表明供试品溶液在 12 h内基本稳定。
2.7　重复性试验 取同一批次凤仙透骨草药材细
粉 6份 , 按 “ 2.2”项下方法制备供试品溶液 , 在
“ 2.3”项色谱条件下进样测定 ,测得东莨菪素的平
均含量(n=6)为 2.20%, RSD为 2.6%,结果表明
本方法重复性良好。
2.8　回收率试验 取已测知含量的凤仙透骨草药
材 0.5g,分别精密加入相当于 0.5 g凤仙透骨草药
材中东莨菪素含有量的 80%, 100%, 120%的对照
品各 3份 , 按 “ 2.2”项下方法制备供试溶液 , 在
“2.3”项色谱条件下进样测定 ,计算回收率 。结果
低 、中 、高 3个浓度的回收率(n=3)分别为 97.19%
(RSD=2.0%), 99.51%(RSD=1.0%), 97.47%
(RSD=1.0%);平均回收率(n=9)为 98.05%。
2.9　样品含量测定结果 取不同产地各批次凤仙
透骨草药材 ,按 “2.2”项下方法制备供试品溶液 ,在
“2.3”项色谱条件下进样测定 ,计算东莨菪素含量。
各批次药材含量略有差异但均在线性范围内 ,结果
见表 1。
表 1 样品测定结果
Tab1 Contentsofscopoletininsamples
来源(source) 编号(No.) 含量(content)%
　江苏省盱眙县 (自采)
[ Xuyu, JiangsuProvince(pick-
ing- up by ourresearch
team)]
1 2.07
2 2.18
3 2.07
　浙江中药饮片厂 (商品)
[ Chinese Herbal Decoction
PiecesFactoryofZhejiangProv-
ince(commodities)]
4 1.79
5 1.64
6 1.77
　湖北中药饮片厂 (商品)
[ Chinese Herbal Decoction
PiecesFactoryofHubeiProv-
ince(commodities)]
7 3.66
8 3.31
9 3.66
　安徽亳洲徐重道中药饮片
厂(商品)[ TheXUZhong-
daoChineseHerbalDecoction
PiecesFactoryofBozhou, Anhui
Province(commodities)]
10 2.71
11 2.81
12 2.68
3　讨论
3.1　供试品溶液制备方法的确定 比较提取溶剂
甲醇 、80%甲醇 、无水乙醇 、80%乙醇 ,结果发现甲醇
提取效果较好 ,故确定甲醇作为提取溶剂;比较了浸
泡时间 、超声次数 ,发现浸泡 20 h再超声的效果较
好且简单 ,浸泡时间短影响含量 ,浸泡时间超过 20h
含量不再增加 。比较超声时间和超声次数 ,结果发
现超声 20 min×3次 ,比超声 60 min×1次效果好 ,
最终确定 “2.2”项所述的供试品溶液制备方法。药
渣按本文方法处理后进样测定未检出东莨菪素 ,证
明样品已提取完全 。
3.2　流动相的选择 本实验以甲醇 -水 、甲醇 -
0.1%醋酸溶液为流动相进行分离 ,发现在有酸条件
—895—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(5)
下峰形对称;考察甲醇 -0.1%醋酸溶液在不同比例
下东莨菪素分离情况 ,结果以甲醇 -0.1%醋酸溶液
比例为 30∶70,东莨菪素峰形对称 ,出峰时间理想并
无杂峰干扰 , 最后确定甲醇 -0.1%醋酸溶液
(30∶70)为本实验的流动相。
3.3　检测波长的选择 利用二极管阵列检测器的
特点 ,对东莨菪素成分进行 UV分析 。有文献报道
343 nm、347 nm为东莨菪素最大吸收波长 [ 3, 4] ,本
实验对东莨菪素对照品溶液和凤仙透骨草供试
品溶液进行光谱扫描 ,结果 344.6 nm为东莨菪
素最大吸收波长 , 对照品与样品的 UV光谱基本
一致 。所以本实验选择 345 nm作为东莨菪素检
测波长 。
参考文献
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lishers(上海科学技术出版社), 1977.485
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菪素及东莨菪苷的含量).ChinaJChinMaterMed(中国中药杂
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MaoKelibyHPLC(HPLC法测定白酱感冒颗粒中东莨菪素).
ChinTraditHerbDrugs(中草药), 2006, 37(4):553
(本文于 2009年 8月 27日收到)
全国医疗器械检测机构比对实验工作会议在西安召开
　　受国家食品药品监督管理局 (以下简称国家局)委托 ,由中国药品生物制品检定所(以下简称
“中检所”)主办 、陕西省医疗器械检测中心承办的全国医疗器械检测机构比对实验工作会议于 2010年
4月 27日至 29日在古城西安召开 。来自国家局医疗器械监管司 、中检所和全国 51个医疗器械检测机
构负责人及医疗器械比对实验专家 70余人参加了会议 。
无源专家组成员对 2010年比对实验方案达成了一致意见 ,并形成了实施方案。会议充分肯定了
2009年中检所组织实施的全国医疗器械检测机构球压比对试验工作所取得的成绩 ,强调了比对试验工
作的重要性 、必要性 。要求与会代表要统一思想 ,提高认识 ,进一步明确比对实验工作的目的 、意义和对
检测机构技术支撑的重要性 ,注重检测报告的规范性 ,提高可靠性 、一致性;要认真总结 2009年中检所
组织检测机构比对实验工作经验 ,充分利用比对实验成果 ,找出比对过程中存在的问题及其规律 ,努力
完成好 2010年比对实验任务。
详见 www.nicpbp.org.cn
—896— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(5)