全 文 ：书犇犗犐：１０．１１６８６／犮狔狓犫２０１５１３８ 犺狋狋狆：／／犮狔狓犫．犾狕狌．犲犱狌．犮狀
陶雅，李峰，高凤芹，孙启忠．短芒大麦草青贮微生物特性研究及优良乳酸菌筛选．草业学报，２０１５，２４（１２）：６６７３．
ＴＡＯＹａ，ＬＩＦｅｎｇ，ＧＡＯＦｅｎｇＱｉｎ，ＳＵＮＱｉＺｈｏｎｇ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆ犎狅狉犱犲狌犿犫狉犲狏犻狊狌犫狌犾犪狋狌犿ｓｉｌａｇｅａｎｄｓｃｒｅｅｎｉｎｇｆｏｒｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａ
ｗｉｔｈｈｉｇｈｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１５，２４（１２）：６６７３．
短芒大麦草青贮微生物特性研究及优良乳酸菌筛选
陶雅１，２，李峰１，高凤芹１，２，孙启忠１，２
（１．中国农业科学院草原研究所，内蒙古 呼和浩特０１００１０；２．农业部牧草资源与利用重点实验室，内蒙古 呼和浩特０１００１０）
摘要：以短芒大麦草为研究对象，利用传统培养法从叶围和青贮发酵体系中分离出乳酸菌、大肠杆菌、好氧细菌、酵
母菌和霉菌，并计数；结合细菌形态学、生理生化特征及１６ＳｒＤＮＡ序列分析鉴定分离出的乳酸菌菌株；通过研究
乳酸菌的生长曲线、产酸特性及耐酸性，筛选优质乳酸菌。以期探明短芒大麦草叶围及青贮发酵体系中微生物菌
群特性及青贮料中乳酸菌多样性，筛选出具有促发酵效果的乳酸菌菌株，为有益微生物饲料研发奠定基础。试验
结果表明，短芒大麦草经青贮发酵后各微生物菌群数量发生不同程度变化，乳酸菌数量由０ｃｆｕ／ｇＦＭ 增加到
４．００×１０８ｃｆｕ／ｇＦＭ，酵母菌数量由８．５０×１０５ｃｆｕ／ｇＦＭ增加到１．０２×１０８ｃｆｕ／ｇＦＭ，而好氧细菌、大肠杆菌和霉
菌数量变化不明显；从短芒大麦草青贮发酵体系分离得到４株乳酸菌，经鉴定Ｌｘ３６为犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊狆犲狀狋狅狊狌狊，Ｌｘ３７
为犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊犫狉犲狏犻狊，Ｌｘ５３为犘犲犱犻狅犮狅犮犮狌狊狆犲狀狋狅狊犪犮犲狌狊，Ｌｘ５４为犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊狆犪狉犪犫狌犮犺狀犲狉犻；筛选得到１株益于青
贮的乳酸菌株Ｌｘ３６，约在２０ｈ后进入稳定生长期，犗犇值达到４．２１，且发酵１２ｈ的ｐＨ仅为４．０８，并可以在ｐＨ＝
３．０环境条件下生长。综上所述，青贮发酵是体系中各种微生物相互作用的过程，微生物菌群的数量及变化直接影
响青贮饲料发酵品质。短芒大麦草青贮饲料中乳酸菌种类较丰富，筛选得到的戊糖乳杆菌繁殖速度快、产酸能力
强同时表现出了较强的耐酸性，具有潜在的生产应用价值，适宜用作促发酵的青贮添加剂菌种。
关键词：短芒大麦草；青贮；微生物特性；乳酸菌
犕犻犮狉狅犫犻犪犾犮犺犪狉犪犮狋犲狉犻狊狋犻犮狊狅犳犎狅狉犱犲狌犿犫狉犲狏犻狊狌犫狌犾犪狋狌犿狊犻犾犪犵犲犪狀犱狊犮狉犲犲狀犻狀犵犳狅狉犾犪犮狋犻犮
犪犮犻犱犫犪犮狋犲狉犻犪狑犻狋犺犺犻犵犺犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀狆犲狉犳狅狉犿犪狀犮犲
ＴＡＯＹａ１，２，ＬＩＦｅｎｇ１，ＧＡＯＦｅｎｇＱｉｎ１，２，ＳＵＮＱｉＺｈｏｎｇ１，２
１．犌狉犪狊狊犾犪狀犱犚犲狊犲犪狉犮犺犐狀狊狋犻狋狌狋犲，犆犺犻狀犲狊犲犃犮犪犱犲犿狔狅犳犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲，犎狌犺犺狅狋０１００１０，犆犺犻狀犪；２．犓犲狔犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犌狉犪狊狊
犾犪狀犱犚犲狊狅狌狉犮犲狊犪狀犱犝狋犻犾犻狕犪狋犻狅狀，犕犻狀犻狊狋狉狔狅犳犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犲，犎狌犺犺狅狋０１００１０，犆犺犻狀犪
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ａｓｔｕｄｙｈａｓｂｅｅｎｕｎｄｅｒｔａｋｅｎｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｍｉｃｒｏｂｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｐｏｐｕ
ｌａｔｉｏｎｓａｎｄｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｉｎ犎狅狉犱犲狌犿犫狉犲狏犻狊狌犫狌犾犪狋狌犿ｓｉｌａｇｅ．Ｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａ，ｃｏｌｉｆｏｒｍ
ｂａｃｔｅｒｉａ，ａｅｒｏｂｉｃｂａｃｔｅｒｉａ，ｙｅａｓｔａｎｄｍｏｌｄｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｃｏｕｎｔｅｄｂｙｍｅａｎｓｏｆｓｅｌｅｃｔｉｖｅｍｅｄｉａ．Ｌａｃｔｉｃａｃｉｄ
ｂａｃｔｅｒｉａｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ，ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄ
ｐａｒｔｉａｌ１６ＳｒＤＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏａｓｓｉｓｔｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｂｅｎｅｆｉｃｉａｌｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓｆｏｒａｎｉｍａｌ
ｆｅｅｄ，ｔｈｅｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｓｔｒａｉｎｓｗｉｔｈｈｉｇｈｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｂａｓｅｄｏｎｇｒｏｗｔｈｃｕｒｖｅｓ
ａｎｄｔｈｅｉｒａｂｉｌｉｔｙｔｏｐｒｏｄｕｃｅａｎｄｒｅｓｉｓｔａｃｉｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｃｈａｎｇｅｉｎｄｉｆ
ｆｅｒｅｎｔｗａｙｓｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓ．Ｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｆｒｏｍ０ｔｏ４．００×１０８
第２４卷 第１２期
Ｖｏｌ．２４，Ｎｏ．１２
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
２０１５年１２月
Ｄｅｃ，２０１５
收稿日期：２０１５０３１１；改回日期：２０１５０５２０
基金项目：中央公益性行业（农业）科研专项经费项目（２０１２０３０４２）和中国农业科学院创新工程牧草栽培与加工利用（ＣＡＡＳＡＳＴＩＰＩＧＲ２０１５
０２）资助。
作者简介：陶雅（１９８２），女，内蒙古呼和浩特人，助研，硕士。Ｅｍａｉｌ：ｔａｏｙａ２００１＠１２６．ｃｏｍ
通信作者Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．Ｅｍａｉｌ：ｓｕｎｑｚ＠１２６．ｃｏｍ
ｃｆｕ／ｇＦＭａｎｄｙｅａｓｔｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｇｒｅｗｆｒｏｍ８．５０×１０５ｔｏ１．０２×１０８ｃｆｕ／ｇＦＭ，ｗｈｅｒｅａｓｃｏｌｉｆｏｒｍｂａｃｔｅｒｉａ，ａｅｒｏ
ｂｉｃｂａｃｔｅｒｉａａｎｄｍｏｌｄｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｄｉｄｎｏｔｃｈａｎｇｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．Ｆｏｕｒｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄ
ｆｒｏｍ犎．犫狉犲狏犻狊狌犫狌犾犪狋狌犿ｓｉｌａｇｅｗｈｉｃｈｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｔＬｘ３６ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｓ犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊狆犲狀狋狅狊狌狊，ａｔＬｘ３７ｉｓｏｌａ
ｔｉｏｎａｓ犔．犫狉犲狏犻狊，ａｔＬｘ５３ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｓ犘犲犱犻狅犮狅犮犮狌狊狆犲狀狋狅狊犪犮犲狌狊ａｎｄａｔＬｘ５４ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｓ犔．狆犪狉犪犫狌犮犺狀犲狉犻．Ｌｘ３６
ｗａｓｓｃｒｅｅｎｅｄｏｕｔｆｏｒｈｉｇｈｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｂｅｃａｕｓｅｉｔｃｅａｓｅｄｔｏｇｒｏｗａｆｔｅｒ２０ｈｏｕｒｓｏｆｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ，
ｗｉｔｈａｎＯＤｖａｌｕｅｏｆ４．２１．ＴｈｅｐＨｖａｌｕｅｏｆＭＲＳｂｒｏｔｈ（ｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｇｒｏｗｔｈｍｅｄｉｕｍ）ｗａｓｏｎｌｙ４．０８ａｆｔｅｒ１２
ｈｏｕｒｓｏｆＬｘ３６ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｓｔｒａｉｎｃａｎｓｕｒｖｉｖｅｉｎＭＲＳｂｒｏｔｈｗｉｔｈａｐＨｏｆ３．０．Ｔｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅ
ｔｈａｔｓｉｌａｇｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｉｓａｐｒｏｃｅｓｓｏｆｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎａｎｄｔｈａｔｓｉｌａｇｅｑｕａｌｉｔｙｉｓｄｉｒｅｃｔｌｙｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄｂｙ
ｔｈｅｃｈａｎｇｉｎｇｃｈａｒａｃｔｅｒｏｆｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｓｐｅｃｉｅｓｉｎ犎．犫狉犲狏犻狊狌犫狌犾犪狋狌犿ｓｉｌａｇｅ
ｗｅｒｅｒｅｌａｔｉｖｅｌｙａｂｕｎｄａｎｔ．犔．狆犲狀狋狅狊狌狊ｓｃｒｅｅｎｅｄｗｉｔｈａｈｉｇｈａｂｉｌｉｔｙｔｏｒｅｐｒｏｄｕｃｅａｎｄｔｏｐｒｏｄｕｃｅａｎｄｒｅｓｉｓｔａｃｉｄ，
ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇｉｔｓｐｏｔｅｎｔｉａｌｖａｌｕｅｆｏｒｐｒａｃｔｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犎狅狉犱犲狌犿犫狉犲狏犻狊狌犫狌犾犪狋狌犿；ｓｉｌａｇｅ；ｍｉｃｒｏｂｉａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ；ｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａ
短芒大麦草（犎狅狉犱犲狌犿犫狉犲狏犻狊狌犫狌犾犪狋狌犿）产量高、适口性好、适应性广且具有较强的耐盐性，其青草利用期长、
叶量丰富、草质柔软、营养品质好、粗蛋白含量高，是一种良好的放牧—刈割兼用型多年生禾草［１３］。开发短芒大
麦草青贮饲料，能够有效地利用青绿植物中的营养成分、提高饲料的适口性、扩大饲料来源、解决季节性饲草不平
衡、促进饲料的均衡供应。
乳酸菌是影响青贮发酵品质的主要因素之一。近年，欧美畜牧业发达的国家及日本致力于开发乳酸菌等添
加物，改善青贮饲料的发酵品质和营养价值的研究。而我国对于青贮乳酸菌的研究起步比较晚，对青贮乳酸菌资
源的收集、发酵特性以及遗传特性研究比较落后，拥有自主知识产权的乳酸菌及其制剂较少［４］，得到大量推广应
用的更是微乎其微。本试验以短芒大麦草为材料，对青贮过程中起作用的微生物菌群进行初步研究，探明该青贮
料中乳酸菌多样性，并选出性状优良的乳酸菌，为制备有益微生物饲料奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 青贮原料
以短芒大麦草为供试材料，采自内蒙古赤峰市林西县良种场，于２０１３年８月短芒大麦草处于初花期，从田间
按梅花形布点法选取５个区域取样刈割。
１．２ 青贮调制
将刈割的短芒大麦草铡成２～３ｃｍ，充分混合均匀后，按照四分法选取适量的样品装入聚乙烯袋，设３次重
复，每袋约２００ｇ，用真空包装机抽成真空并封口，室温条件下放置６０ｄ后开封取样分析。
１．３ 仪器设备
生物安全柜为ＥＳＣＯ公司的ＡＣ２Ｓ型；恒温培养箱为ＭＥＭＭＥＲＴ公司的ＩＮＢ４００型；立式压力蒸汽灭菌器
为上海申安医疗器械厂的ＬＤＺＸ５０ＫＢＳ型；台式恒温摇床为太仓市实验设备厂的 ＴＨＺＤ型；光学显微镜为
ＯＬＭＰＵＳ的ＢＸ５１型；高速冷冻离心机为Ｔｈｅｒｍｏ公司Ｆｒｅｓｃｏ２１型；ＰＣＲ仪为ＢＩＯＲＡＤ的ＰｅｌｔｉｅｒＴｈｅｒｍａｌ
Ｃｙｃｌｅｒ；凝胶成像仪为ＡＬｐｈａＩｍａｇｅ；电泳仪为北京六一仪器厂的ｄｙｙ６ｃ型；紫外分光光度计为北京普析通用仪
器有限责任公司的ＴＵ１９０１型。
１．４ 培养基及试剂
液体、固体 ＭＲＳ培养基、ＮＡ培养基和ＰＤＡ培养基购自广东环凯微生物科技有限公司；ＢＬＢ培养基购自日
水制药株式会社；细菌全基因组ＤＮＡ提取试剂盒、２×ＴａｑＰＣＲＭａｓｔｅｒＭｉｘ、溶菌酶等购自天根生化科技有限公
司；扩增引物购自上海桑尼生物科技有限公司。
１．５ 试验方法
１．５．１ 微生物计数 采用稀释平板涂布法对短芒大麦草原料和青贮料中微生物菌群进行计数，称取５ｇ待测
７６第１２期 陶雅 等：短芒大麦草青贮微生物特性研究及优良乳酸菌筛选
样品，放入装有４５ｍＬ无菌水的三角瓶内，置于摇床振荡３０ｍｉｎ，将得到的溶液继续用无菌水做１０倍梯度的稀
释，分别吸取１０－１，１０－３和１０－５三个稀释度悬液２０μＬ，均匀涂于 ＭＲＳ、ＢＬＢ、ＮＡ和ＰＤＡ平板培养基上，ＭＲＳ
培养基上的菌落（乳酸菌）于３７℃厌氧环境下培养，ＢＬＢ、ＮＡ和ＰＤＡ培养基上菌落（大肠杆菌、好氧细菌、酵母菌
和霉菌）则直接置于３７℃恒温培养箱内，４８ｈ后对各平板上的菌落数进行计测。
１．５．２ 乳酸菌的分离与纯化 挑取 ＭＲＳ培养基上生长的典型菌落，在 ＭＲＳ平板上反复划线分离，直到获得
该菌的纯培养。对获得的各菌株进行革兰氏染色［５］和过氧化氢酶试验［６］。凡是呈革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性
的菌株，均认为是疑似乳酸菌，保存备用。
１．５．３ 乳酸菌的生理生化特征鉴定 乳酸菌发酵葡萄糖产气试验参照凌代文和东秀珠［６］的方法进行。在不
同温度（１０，１５，４０，４５℃）、ｐＨ（ｐＨ＝３．０，３．５，４．０，４．５，５．０，７．５，８．０）和ＮａＣｌ浓度（３．０％和６．５％）条件下生长
试验以及利用ＡＰＩ５０ＣＨ检测乳酸菌对４９种不同碳源发酵能力检测参照Ｄｕａｎ等［７］方法进行。
１．５．４ 乳酸菌菌株的１６ＳｒＤＮＡ序列分析及系统进化树的构建 乳酸菌ＤＮＡ的提取按照天根细菌全基因
组ＤＮＡ提取试剂盒说明进行。以提取菌株的ＤＮＡ为模板，应用引物序列２７ｆ：５′ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴ
ＣＡＧ３′和１４９２ｒ：５′ＡＡＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＧＧＴＡＡＣＣ３′进行ＰＣＲ扩增，ＰＣＲ反应体系（５０μＬ）为：２×ＴａｑＰＣＲ
ＭａｓｔｅｒＭｉｘ２５μＬ，引物２７ｆ和１４９２ｒ（１０μｍｏｌ／Ｌ）各２μＬ，模板２μＬ，加ｄｄＨ２Ｏ补足至５０μＬ。ＰＣＲ扩增程序
为：９４℃预变性５ｍｉｎ；９４℃，变性５０ｓ；５５℃，退火５０ｓ；７２℃，延伸２ｍｉｎ，３０个循环后，７２℃延伸１０ｍｉｎ，４℃保
存。利用１．５％琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ产物，ＰＣＲ扩增片段约为１５００ｂｐ，将ＰＣＲ产物送上海桑尼生物科技
有限公司进行双向测序。将测序获得的所有菌株序列信息利用Ｂｌａｓｔ检索系统在ＧｅｎＢａｎｋ数据库中进行Ｂｌａｓｔ
比对，选择适当数量与目的基因序列同源性相对较高的标准菌株的１６ＳｒＤＮＡ序列与测定菌株的１６ＳｒＤＮＡ序
列，共同用 ＭＥＧＡ５．１软件构建系统进化树。
１．５．５ 产酸速率测定 将乳酸菌按３％的接种量转入 ＭＲＳ液体培养基中，于３７℃培养１２ｈ，每隔２ｈ测定不
同菌株发酵液ｐＨ，以培养时间为横坐标，ｐＨ为纵坐标绘制产酸速率曲线［８］。
１．５．６ 生长曲线的测定 将乳酸菌按３％的接种量转入 ＭＲＳ液体培养基中，于３７℃培养３６ｈ，每隔２ｈ取１
次样品，在６２０ｎｍ下测定样品的吸光度值，以培养时间为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标绘制生长曲线［８］。
２ 结果与分析
２．１ 短芒大麦草叶围及青贮体系微生物计数
短芒大麦草新鲜样品与青贮样品中微生物种类和数量见表１，新鲜样品上附着的微生物数量最多的是好氧
细菌，为３．１５×１０７ｃｆｕ／ｇＦＭ，其次是大肠杆菌和酵母菌，而乳酸菌和霉菌未检测到，经过青贮发酵后，乳酸菌数
量明显增多，达到了４．００×１０８ｃｆｕ／ｇＦＭ，酵母菌的数量也有所增加，而大肠杆菌、好氧细菌和霉菌数量几乎没有
变化。
表１ 短芒大麦草微生物计数
犜犪犫犾犲１ 犕犻犮狉狅犫犻狅犾狅犵犻犮犪犾犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳狋犺犲犎．犫狉犲狏犻狊狌犫狌犾犪狋狌犿 ｃｆｕ／ｇＦＭ
样品
Ｓａｍｐｌｅ
微生物菌落计数Ｃｏｕｎｔｓｏｆｖｉａｂｌｅｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ
乳酸菌Ｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａ 大肠杆菌Ｃｏｌｉｆｏｒｍｂａｃｔｅｒｉａ 好氧细菌Ａｅｒｏｂｉｃｂａｃｔｅｒｉａ 酵母菌Ｙｅａｓｔ 霉菌 Ｍｏｌｄ
新鲜样品Ｆｒｅｓｈｓａｍｐｌｅ ０ ２．２５×１０５ ３．１５×１０７ ８．５０×１０５ ０
青贮样品Ｓｉｌａｇｅｓａｍｐｌｅ ４．００×１０８ １．０４×１０６ ６．７０×１０７ １．０２×１０８ ０
ｃｆｕ：菌落形成单位Ｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ；ＦＭ：鲜物质Ｆｒｅｓｈｍａｔｔｅｒ．
２．２ 乳酸菌的生理生化特征
从短芒大麦草青贮样品中共分离出４株乳酸菌，分别命名为Ｌｘ３６、Ｌｘ３７、Ｌｘ５３、Ｌｘ５４，各菌株生理生化特征
见表２、３。所有分离到的菌株均表现为革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性，其中Ｌｘ３６和Ｌｘ５３发酵葡萄糖不产生ＣＯ２，
８６ 草 业 学 报 第２４卷
属同型发酵乳酸菌，而Ｌｘ３７和Ｌｘ５４为异型发酵
乳酸菌；根据这４株乳酸菌生理生化特性可将其
分成２个类群：类群Ⅰ包含Ｌｘ３６、Ｌｘ３７、Ｌｘ５４，这
３株菌均为杆菌，可在４０℃、４５℃、３．０％ ＮａＣｌ浓
度和ｐＨ＝４．５，５．０，７．５，８．０的环境条件下生长，
其中Ｌｘ３６在５和１０℃下不生长，Ｌｘ３７在５℃、
６．５％ ＮａＣｌ浓度和ｐＨ＝３．０，３．５，４．０条件下弱
生长，Ｌｘ５４在６．５％ ＮａＣｌ浓度和ｐＨ＝３．０条件
下不生长，而在ｐＨ＝３．０时弱生长。这３株菌均
可以利用果糖、半乳糖、葡萄糖、麦芽糖、密二糖和
葡萄糖酸盐，其中Ｌｘ３６可以发酵苦杏仁苷、纤维
二糖、甘露醇、甘露糖、海藻糖，而Ｌｘ３７和Ｌｘ５４
不能发酵这几种碳源，Ｌｘ５４可以发酵松三糖、棉
籽糖和蔗糖，而Ｌｘ３７不能利用这几种碳源，所以
将３株菌株初步鉴定［６，９］属于乳杆菌属（犔犪犮狋狅犫犪
犮犻犾犾狌狊）；类群Ⅱ包含Ｌｘ５３，该菌为球菌，在５℃和
ｐＨ＝３．０，３．５条件下不生长，可以发酵核糖、麦
芽糖、海藻糖和熊果苷，不能利用松三糖、鼠李糖、
乳糖、蔗糖、淀粉、甘油、甘露醇和α甲基Ｄ葡萄
糖苷，其生理生化性状与片球菌属相似，初步鉴定
属于片球菌属（犘犲犱犻狅犮狅犮犮狌狊）。
２．３ 乳酸菌的１６ＳｒＤＮＡ 序列分析以及系统发
育树构建
将测序获得的所有１６ＳｒＤＮＡ 序列信息在
ＮＣＢＩ数据库和ＥｚＴａｘｏｎ数据库中进行Ｂｌａｓｔ相
似性比对，结果见表４。所有序列与数据库中已
知１６ＳｒＤＮＡ基因序列的相似性均在９９．０％～
１００．０％之间。
表２ 青贮饲料中乳酸菌的生理生化特征
犜犪犫犾犲２ 犜犺犲狆犺狔狊犻狅犾狅犵犻犮犪犾犫犻狅犮犺犲犿犻犮犪犾犮犺犪狉犪犮狋犲狉犻狊狋犻犮狊狅犳犾犪犮狋犻犮
犪犮犻犱犫犪犮狋犲狉犻犪狊狋狉犪犻狀狊犻狊狅犾犪狋犲犱犳狉狅犿狊犻犾犪犵犲
项目Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ Ｌｘ３６ Ｌｘ３７ Ｌｘ５３ Ｌｘ５４
菌体形态Ｓｈａｐｅ 杆状
Ｒｏｄ
杆状
Ｒｏｄ
球状
Ｃｏｃｃｕｓ
杆状
Ｒｏｄ
革兰氏染色Ｇｒａｍ ＋ ＋ ＋ ＋
过氧化氢酶反应Ｃａｔａｌａｓｅ － － － －
发酵葡萄糖产气Ｇａｓｆｒｏｍｇｌｕｃｏｓｅ － ＋ － ＋
发酵类型
Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔｙｐｅ
同型发酵
Ｈｏｍｏ
异型发酵
Ｈｅｔｅｒｏ
同型发酵
Ｈｏｍｏ
异型发酵
Ｈｅｔｅｒｏ
不同温度下生长Ｇｒｏｗｔｈａｔｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ：
５℃ － ｗ － ＋
１０℃ － ＋ ＋ ＋
４０℃ ＋ ＋ ＋ ＋
４５℃ ＋ ＋ ＋ ＋
不同盐浓度下生长ＧｒｏｗｔｈｉｎＮａＣｌ：
３．０％ ＋ ＋ ＋ ＋
６．５％ ＋ ｗ ＋ －
不同ｐＨ下生长ＧｒｏｗｔｈａｔｐＨ：
３．０ ＋ ｗ － －
３．５ ＋ ｗ － ｗ
４．０ ＋ ｗ ＋ ＋
４．５ ＋ ＋ ＋ ＋
５．０ ＋ ＋ ＋ ＋
７．５ ＋ ＋ ＋ ＋
８．０ ＋ ＋ ＋ ＋
＋：生长Ｐｏｓｉｔｉｖｅ；－：不生长Ｎｅｇａｔｉｖｅ；ｗ：微弱生长 Ｗｅａｋｌｙｐｏｓｉｔｉｖｅ．
由系统发育分析可以看出（图１），４株乳酸菌分别属于乳杆菌属和片球菌属，其中：Ｌｘ３６与犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊
狆犲狀狋狅狊狌狊的系统位置最接近，相似度为１００．００％，Ｌｘ３７与犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊犫狉犲狏犻狊处于同一进化分支上，相似度达
１００．００％，Ｌｘ５３与犘犲犱犻狅犮狅犮犮狌狊狆犲狀狋狅狊犪犮犲狌狊的系统进化位置最接近，相似度为９９．９７％，Ｌｘ５４与犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊
狆犪狉犪犫狌犮犺狀犲狉犻处于同一进化分支上，相似度达１００．００％。
２．４ 乳酸菌生长曲线及繁殖速度比较
４株乳酸菌的生长曲线见图２，从曲线中可以看出４株乳酸菌均在２ｈ后进入对数生长期，其中Ｌｘ５３、Ｌｘ５４
和Ｌｘ３７约在１４ｈ左右进入稳定生长期，生长速度依次递减，生长较为缓慢，而Ｌｘ３６生长速度较快，明显高于其
他３株乳酸菌，约在２０ｈ后进入稳定生长期，２０ｈ时其犗犇值达到４．２１。可见４株乳酸菌中Ｌｘ３６的繁殖速度最
快。
２．５ 乳酸菌产酸速率及产酸能力比较
４株乳酸菌发酵过程中产酸速率曲线如图３所示。从图中可以看出，Ｌｘ３７和Ｌｘ５４发酵液的ｐＨ下降较为
缓慢，发酵１２ｈ的ｐＨ分别为５．２８和５．３５，Ｌｘ５３发酵液的ｐＨ下降较快，发酵１２ｈ的ｐＨ为４．５１，而Ｌｘ３６发酵
液的ｐＨ下降最快，从２ｈ便开始急剧下降，其发酵１２ｈ的ｐＨ仅为４．０８。可见４株乳酸菌中Ｌｘ３６的产酸能力
最强。
９６第１２期 陶雅 等：短芒大麦草青贮微生物特性研究及优良乳酸菌筛选
表３ 乳酸菌犃犘犐５０犆犎碳源发酵结果
犜犪犫犾犲３ 犃犘犐５０犆犎犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀狆犪狋狋犲狉狀狊狅犳犾犪犮狋犻犮犪犮犻犱犫犪犮狋犲狉犻犪狊狋狉犪犻狀狊犻狊狅犾犪狋犲犱犳狉狅犿狊犻犾犪犵犲
碳源Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｌｘ３６ Ｌｘ３７ Ｌｘ５３ Ｌｘ５４ 碳源Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｌｘ３６ Ｌｘ３７ Ｌｘ５３ Ｌｘ５４
甘油Ｇｌｙｃｅｒｏｌ － － － － 柳醇Ｓａｌｉｃｉｎ ＋ － ＋ －
赤鞽醇Ｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌ － － － － 纤维二糖Ｃｅｌｏｂｉｏｓｅ ＋ － ＋ －
Ｄ阿拉伯糖Ｄａｒａｂｉｎｏｓｅ － － － － 麦芽糖 Ｍａｌｔｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋
Ｌ阿拉伯糖Ｌａｒａｂｉｎｏｓｅ － ＋ ＋ ＋ 乳糖Ｌａｃｔｏｓｅ ＋ － － ＋
核糖Ｒｉｂｏｓｅ － ＋ ＋ ＋ 蜜二糖 Ｍｅｌｉｂｉｏｓｅ ＋ ＋ － ＋
Ｄ木糖Ｄｘｙｌｏｓｅ － ＋ ＋ － 蔗糖Ｓａｃｃｈａｒｏｓｅ ＋ － － ＋
Ｌ木糖Ｌｘｙｌｏｓｅ － － － － 海藻糖Ｔｒｅｈａｌｏｓｅ ＋ － ＋ －
阿东醇Ａｄｏｎｉｔｏｌ － － － － 菊糖Ｉｎｕｌｉｎｅ － － － －
β甲基Ｄ木糖甙βｍｅｔｈｙｌｘｙｌｏｓｉｄｅ － － － － 松三糖 Ｍｅｌｅｚｉｔｏｓｅ － － － ＋
半乳糖Ｇａｌａｃｔｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ 棉籽糖Ｄ－ｒａｆｆｉｎｏｓｅ ＋ － － ＋
葡萄糖Ｄｇｌｕｃｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ 淀粉Ｓｔａｒｃｈ ｗ － － －
果糖Ｄｆｒｕｃｔｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ 肝糖Ｇｌｙｃｏｇｅｎ － － － －
甘露糖Ｄｍａｎｎｏｓｅ ＋ － ＋ － 木糖醇Ｘｙｌｉｔｏｌ － － － －
山梨糖Ｓｏｒｂｏｓｅ － － － － 龙胆二糖βｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｅ ＋ － ＋ －
鼠李糖Ｒｈａｍｎｏｓｅ － － － － Ｄ松二糖Ｄｔｕｒａｎｏｓｅ ＋ － － －
卫茅醇Ｄｕｌｃｉｔｏｌ － － － － Ｄ来苏糖Ｄｌｙｘｏｓｅ － － － －
肌醇Ｉｎｏｓｉｔｏｌ － － － － Ｄ塔格糖Ｄｔａｇａｔｏｓｅ － － ＋ －
甘露醇 Ｍａｎｎｉｔｏｌ ＋ － － － Ｄ岩糖Ｄｆｕｃｏｓｅ － － － －
山梨醇Ｓｏｒｂｉｔｏｌ － － － － Ｌ岩糖Ｌｆｕｃｏｓｅ － － － －
α甲基Ｄ甘露糖苷αｍｅｔｈｙｌＤｍａｎｎｏｓｉｄｅ － － － － Ｄ阿拉伯糖醇Ｄａｒａｂｉｔｏｌ ＋ － － －
α甲基Ｄ葡萄糖苷αｍｅｔｈｙｌＤｇｌｕｃｏｓｉｄｅ ＋ ｗ － － Ｌ阿拉伯糖醇Ｌａｒａｂｉｔｏｌ － － － －
Ｎ乙酰葡糖胺Ｎａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ ＋ ＋ ＋ － 葡萄糖酸盐Ｇｌｕｃｏｎａｔｅ ＋ ＋ ｗ ｗ
苦杏仁甙Ａｍｙｇｄａｌｉｎ ＋ － ＋ － ２酮基葡萄糖酸盐２ｃｅｔｏｇｌｕｃｏｎａｔｅ － － ｗ ｗ
熊果苷Ａｒｂｕｔｉｎ ＋ － ＋ － ５酮基葡萄糖酸盐５ｃｅｔｏｇｌｕｃｏｎａｔｅ ｗ ｗ － ｗ
七叶灵Ｅｓｃｕｌｉｎ ＋ － ＋ －
＋：９０％菌株为阳性９０％ｏｒｍｏｒｅｏｆｔｈｅｓｔｒａｉｎｓａｒｅｐｏｓｉｔｉｖｅ；－：９０％菌株为阴性９０％ｏｒｍｏｒｅｏｆｔｈｅｓｔｒａｉｎｓａｒｅｎｅｇａｔｉｖｅ；ｗ：弱阳性 Ｗｅａｋｌｙｐｏｓｉｔｉｖｅ．
表４ 乳酸菌株１６犛狉犇犖犃序列犅犾犪狊狋比对结果
犜犪犫犾犲４ 犅犾犪狊狋狉犲狊狌犾狋狊狅犳１６犛狉犇犖犃狊犲狇狌犲狀犮犲狊狅犳犾犪犮狋犻犮犪犮犻犱犫犪犮狋犲狉犻犪狊狋狉犪犻狀狊
菌株Ｓｔｒａｉｎ 近缘种Ｃｌｏｓｅｓｔｒｅｌａｔｉｖｅｓｐｅｃｉｅｓ 相似度Ｉｄｅｎｔｉｔｙ（％） 基因库存取号ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．
Ｌｘ３６ 戊糖乳杆菌犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊狆犲狀狋狅狊狌狊ＪＣＭ１５５８（Ｔ） １００．００ Ｄ７９２１１
Ｌｘ３７ 短乳杆菌犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊犫狉犲狏犻狊ＡＴＣＣ１４６８７（Ｔ） １００．００ ＥＦ１２０３６７
Ｌｘ５３ 戊糖片球菌犘犲犱犻狅犮狅犮犮狌狊狆犲狀狋狅狊犪犮犲狌狊ＤＳＭ２０３３６（Ｔ） ９９．９７ ＡＪ３０５３２１
Ｌｘ５４ 类布氏乳杆菌犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊狆犪狉犪犫狌犮犺狀犲狉犻ＬＭＧ１１４５７（Ｔ） １００．００ ＡＪ９７０３１７
３ 讨论
青贮发酵过程是各种微生物共同作用的结果，参与青贮过程的微生物包括青贮原料上附着的微生物，引起青
贮饲料发酵的微生物以及引起青贮腐败变质的微生物等［１０］，在整个青贮过程中微生物的数量存在动态变化［１１］。
Ｋｏｂａｙａｓｈｉ等［１２］研究认为，附生乳酸菌的数量影响最终发酵品质，如果牧草表面附生乳酸菌数量过低，则会导致
青贮料发酵品质和营养价值下降。检测附生乳酸菌的数量可以预测自然青贮发酵充分与否及是否有必要添加菌
０７ 草 业 学 报 第２４卷
图１ 基于１６犛狉犇犖犃序列分析结果的系统发育树
犉犻犵．１ 犘犺狔犾狅犵犲狀犲狋犻犮狋狉犲犲犫犪狊犲犱狅狀狋犺犲１６犛狉犇犖犃狊犲狇狌犲狀犮犲狊
图２ 乳酸菌生长曲线
犉犻犵．２ 犌狉狅狑狋犺犮狌狉狏犲狊狅犳犾犪犮狋犻犮犪犮犻犱犫犪犮狋犲狉犻犪狊狋狉犪犻狀狊
图３ 乳酸菌产酸速率曲线
犉犻犵．３ 犃犫犻犾犻狋狔狅犳狆狉狅犱狌犮犻狀犵犪犮犻犱狅犳犾犪犮狋犻犮犪犮犻犱犫犪犮狋犲狉犻犪狊狋狉犪犻狀狊
剂促进发酵［１３］。本研究中短芒大麦草青贮前后乳酸菌数量变化较大，青贮前并未在新鲜样品上检测出乳酸菌，
青贮发酵后样品中乳酸菌含量高达１０８ｃｆｕ／ｇＦＭ，酵母菌的数量由１０５ｃｆｕ／ｇＦＭ 变化到１０８ｃｆｕ／ｇＦＭ，而大肠
杆菌、好氧细菌和霉菌的数量变化不明显。可见短芒大麦草在青贮发酵过程中，随着厌氧和酸性环境的形成，乳
酸菌迅速繁殖，数量增加；酵母菌在厌氧条件下可利用青贮饲料中的糖分进行繁殖，数量也有所增加；大肠杆菌和
部分好氧细菌，耐酸性不强，当发酵体系ｐＨ逐渐降低时，这两类细菌的生长受到抑制，但是可能由于短芒大麦草
附生乳酸菌数量太低，导致发酵效果不理想［１２］，青贮后发酵体系ｐＨ并未迅速降低到能够显著抑制这两类细菌
的程度，所以其数量没有显著降低。Ｚｈａｎｇ［１４］研究了青贮原料和青贮料中微生物种类和数量，青贮前乳酸菌数量
在１０１～１０７ｃｆｕ／ｇ、肠细菌数量为１０２～１０８ｃｆｕ／ｇ、酵母菌数量为１０１～１０７ｃｆｕ／ｇ、霉菌数量为１０２～１０６ｃｆｕ／ｇ，青
贮后这几类微生物数量分别为１０５～１０９ｃｆｕ／ｇ、低于１０２ｃｆｕ／ｇ、１０２～１０６ｃｆｕ／ｇ和１０４ｃｆｕ／ｇ，本研究结果基本与其
相符，但短芒大麦草青贮后肠细菌和酵母菌数量较高。
本研究对短芒大麦草青贮乳酸菌多样性研究在国内外尚属首例，通过 ＭＲＳ培养基从短芒大麦草青贮发酵
体系分离得到４株乳酸菌，根据表型特征、生理生化特性初步鉴定３株属于乳杆菌属，１株属于片球菌属，杆菌较
１７第１２期 陶雅 等：短芒大麦草青贮微生物特性研究及优良乳酸菌筛选
球菌丰富。通常情况下乳酸杆菌对酸的耐受性要高于乳酸球菌，当环境酸度较高时，乳酸球菌的生长受到抑制，
活力降低、数量减少［９］。由于分离出的４株乳酸菌碳源发酵模式与模式菌株均存在差异，因此单纯利用表型相似
性并不能把这些菌株鉴定到种的水平。１６ＳｒＤＮＡ序列分析既可以在种属水平上对细菌进行较为准确的鉴定，
也可以对细菌亚种进行鉴定［１５］，经分析４株菌的１６ＳｒＤＮＡ序列与参考菌株的１６ＳｒＤＮＡ序列相似性都在９９％
以上，因此Ｌｘ３６鉴定为犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊狆犲狀狋狅狊狌狊，Ｌｘ３７鉴定为犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊犫狉犲狏犻狊，Ｌｘ５３鉴定为犘犲犱犻狅犮狅犮犮狌狊狆犲狀
狋狅狊犪犮犲狌狊，Ｌｘ５４鉴定为犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊狆犪狉犪犫狌犮犺狀犲狉犻。
乳酸菌是促使青贮饲料发酵的主要微生物，将其用作饲料青贮的生物添加剂，可有效地调节青贮料内微生物
区系，抑制有害菌的活动［１６１７］，调控青贮发酵过程，从而提高青贮发酵品质。因此那些繁殖速度快，产酸、耐酸能
力强的乳酸菌常被筛选出来用作发酵促进剂［１８］。早期用作青贮添加剂的菌株大部分来自奶牛及乳产品［１９］，但
是结果并不理想，而从青贮饲料中分离出的乳酸菌更宜适应青贮环境，从中筛选青贮用优良乳酸菌则为一种高
效、快速的方法。通过研究短芒大麦草青贮饲料中分离出４株乳酸菌的生长特性、产酸特性以及耐酸性，发现戊
糖乳杆菌Ｌｘ３６为同型发酵乳酸菌，可以迅速繁殖，使酸性快速下降，并且耐酸，这些完全符合 Ｗｈｉｔｔｅｎｂｕｒｙ［２０］、
Ｗｉｅｒｉｎｇａ和Ｂｅｃｋ［２１］制定的乳酸菌剂筛选标准的一些核心观点。戊糖乳杆菌广泛存在于传统发酵蔬菜、发酵乳
制品、发酵肉制品及醉鱼中［２２２５］，长期的食用历史使其被公认为具有发酵作用的安全菌［２６］，张想峰等［２７］从新疆
小芦苇青贮中分离出２株戊糖乳杆菌，发现其中１株具有较强的产酸能力，ｐＨ最低可达３．５０，是发酵过程中的
主要产酸菌株，本试验结果与此一致。可见Ｌｘ３６具有潜在的生产应用价值，适宜用作促发酵的青贮饲料发酵菌
株。
４ 结论
青贮发酵是体系中各种微生物相互作用的过程，微生物菌群的数量及变化直接影响青贮饲料发酵品质。短
芒大麦草附生乳酸菌数量极少，因此单独青贮时最好加入适量乳酸菌剂以促进发酵，保证发酵完全。短芒大麦草
青贮饲料中乳酸菌种类较丰富，共分离出４株乳酸菌，筛选得到的戊糖乳杆菌Ｌｘ３６繁殖速度快、产酸能力强，同
时表现出了较强的耐酸性，这一结果为其进一步开发用作青贮促发酵剂提供了理论依据。
犚犲犳犲狉犲狀犮犲狊：
［１］ ＳｕｎＱＺ．Ａｎｅｘｃｅｌｅｎｔｓａｌｔｔｏｌｅｒａｎｃｅｆｏｒａｇｅ－犎狅狉犱犲狌犿犫狉犲狏犻狊狌犫狌犾犪狋狌犿．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｒａｇｅａｎｄＬｉｆｅｓｔｏｃｋ，１９９６，（４）：２５２６．
［２］ ＷａｎｇＢＤ．Ａｎｅｘｃｅｌｅｎｔｇｒａｓｓ－犎狅狉犱犲狌犿犫狉犲狏犻狊狌犫狌犾犪狋狌犿．ＣｈｉｎａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ，１９８７，４（１）：５５５７．
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［６］ ＬｉｎｇＤＷ，ＤｏｎｇＸＺ．ＴｈｅＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓｉｎＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＬａｃｔｉｃＡｃｉｄＢａｃｔｅｒｉａ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＣｈｉｎａＬｉｇｈｔＩｎｄｕｓ
ｔｒｙＰｒｅｓｓ，１９９９．
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ＪｏｕｒｎａｌｏｆＧｅｎｅｒａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００８，５４（１）：５１６０．
［８］ ＺｈａｎｇＨＪ，ＹｕＺ，ＷａｎｇＬ，犲狋犪犾．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｆｒｏｍｓｉｌａｇｅａｎｄｆｉｌｔｅｒｉｎｇｏｆｅｘｃｅｌｅｎｔ
ｓｔｒａｉｎｓ．ＡｃｔａＡｇｒｅｓｔｉａＳｉｎｉｃａ，２０１１，１９（１）：１３７１４１．
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［１１］ ＳｉＢＷ，ＷａｎｇＺＬ，ＳｕｎＱＺ，犲狋犪犾．Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｃｈａｎｇｅｓｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｅｎｓｉｌｉｎｇ
犔犲狊狆犲犱犲狕犪犺犲犱狔狊犪狉狅犻犱犲狊．ＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ，２０１２，２９（４）：６５０６５７．
［１２］ ＫｏｂａｙａｓｈｉＨ，ＣａｉＹ，ＵｅｇａｋｉＲ，犲狋犪犾．Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆ
ｔｈｅｍｉｘｅｄｓｏｗｉｎｇｓｉｌａｇｅｏｆｔｉｍｏｔｈｙａｎｄｏｒｃｈａｒｄｇｒａｓｓａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｕｔｔｉｎｇｎｕｍｂｅｒ．ＮｉｈｏｎＣｈｉｋｕｓａｎＧａｋｋａｉｈｏ／ＪａｐａｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ
ｏｆＺｏｏｔｅｃｈｎｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，２０１０，８１（３）：３４５３５２．
［１３］ ＬｉｎＣＪ，ＢｏｌｓｅｎＫＫ，ＢｒｅｎｔＢＥ，犲狋犪犾．Ｅｐｉｐｈｙｔｉｃｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｓｕｃｃｅｓｓｉｏｎｄｕｒｉｎｇｔｈｅｐｒｅｅｎｓｉｌｉｎｇａｎｄｅｎｓｉｌｉｎｇｐｅｒｉｏｄｓｏｆ
２７ 草 业 学 报 第２４卷
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３７第１２期 陶雅 等：短芒大麦草青贮微生物特性研究及优良乳酸菌筛选