全 文 :园艺学报,2015,42 (2):263–270.
Acta Horticulturae Sinica
doi:10.16420/j.issn.0513-353x.2014-0774;http://www. ahs. ac. cn 263
收稿日期:2014–11–17;修回日期:2015–01–07
基金项目:公益性行业(农业)科研专项(201303028);西南大学国家级大学生创新创业训练计划项目(20130635075)
* 与第一作者同等贡献
** 通信作者 Author for correspondence(E-mail:qling@swu.edu.cn)
重庆辣椒病毒病病原初步鉴定和分析
郭思瑶 2,童 艳 2,*,黄 娅 1,罗信福 1,青 玲 1,**
(1 西南大学植物保护学院,重庆 400716;2西南大学含弘学院,重庆 400716)
摘 要:利用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和 RT-PCR 法对重庆地区发生的辣椒病毒病的病原进行
了鉴定和优势病毒分析。利用 5 种常见蔬菜病毒的血清对采自重庆 8 个区县的 152 份辣椒病毒病样品进
行 Dot-ELISA 检测,结果表明,共有 118 份辣椒样品检测呈阳性,其中,黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic
virus,CMV)的侵染最普遍,总检出率高达 57.89%;番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)的总
检出率最低,为 22.52%;烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,
TuMV)和蚕豆萎蔫病毒 2 号(Broad bean wilt virus 2,BBWV-2)的总检出率分别为 30.26%、36.18%和
24.34%。在 118 份阳性样品中,有 66.10%的样品受两种及以上病毒复合侵染,其中 33.33%的样品受到
CMV 和 TuMV 复合侵染,有 26.27%的样品受 3 种病毒复合侵染。设计 5 种病毒的特异性引物,随机选
取 16 份阳性样品进行 RT-PCR 扩增,克隆测序结果表明扩增片段确实是 5 种病毒的相应序列,且 RT-PCR
与 ELISA 检测结果基本吻合。检测结果表明 CMV 是重庆地区辣椒上的优势病毒种类,且该地区辣椒上
病毒复合侵染现象普遍。本文首次报道了 ToMV 和 TuMV 侵染辣椒。
关键词:辣椒;辣椒病毒病;Dot-ELISA;RT-PCR;病原鉴定
中图分类号:S 641.3 文献标志码:A 文章编号:0513-353X(2015)02-0263-08
Preliminary Identification and Analyses of Viruses Causing Pepper Virus
Disease in Chongqing,China
GUO Si-yao2,TONG Yan2,*,HUANG Ya1,LUO Xin-fu1,and QING Ling1,**
(1College of Plant Protection,Southwest University,Chongqing 400716,China;2Hanhong College,Southwest University,
Chongqing 400716,China)
Abstract:The viruses causing pepper virus disease in Chongqing,China were identified and analyzed
by Dot-ELISA and RT-PCR. In this research,152 pepper samples with viral symptoms,collected from
eight pepper-growing counties in Chongqing,were detected with the special serums against five common
vegetable viruses by Dot-ELISA method. The detection results showed that 118 pepper samples were
positive,among which the infection of Cucumber mosaic virus(CMV)is common,and the detection rate
is 57.89%. The detection rate of Tomato mosaic virus(ToMV)is the lowest,22.52%. The detection rate of
Tobacco mosaic virus(TMV),Turnip mosaic virus(TuMV),and Broad bean wilt virus 2(BBWV-2)
were 30.26%,36.18% and 24.34%,respectively. Among the 118 positive samples,66.10% samples were
mix-infected with more than two viruses,33.33% samples were infected with CMV and TuMV,26.27%
Guo Si-yao,Tong Yan,Huang Ya,Luo Xin-fu,Qing Ling.
Preliminary identification and analyses of viruses causing pepper virus disease in Chongqing,China.
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samples were infected with three viruses. Sixteen samples were randomly selected for RT-PCR
amplification using specific primer pairs for the five viruses respectively,and the positive samples were
then cloned and sequenced. The results showed that the amplified fragments were highly homologous with
corresponding sequences of five viruses and the detection results were nearly consistent with those of
ELISA detection. These results showed that CMV is the prevalent pathogenic virus,and the mix-infection
of viruses on pepper was severe in Chongqing. This is the first report of ToMV and TuMV infecting
pepper.
Key words:pepper;pepper virus disease;Dot-ELISA;RT-PCR;identification of pathogen
辣椒病毒病是辣椒(Capsicum annuum L.)上常见的病害,感病植株常表现叶片皱缩、斑驳、
黄化、花叶、坏死、畸形和植株矮化等(张建云,2013)。辣椒病毒病的发生常给辣椒的生产造成严
重的危害和损失,产量损失在 20% ~ 70%。在对中国湖南、北京、成都、陕西、贵州、河南、云南、
江苏、广东、广西和内蒙古等 11 个主要省、市、自治区进行辣椒病毒病调查中发现,被调查地区均
有辣椒病毒病发生,且病毒复合侵染现象严重,表明中国辣椒病毒病普遍发生(张竹青,2009)。
据报道,至少有 45 种病毒可侵染辣椒和甜椒,且多数国家以烟草花叶病毒(Tobacco mosaic
virus,TMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)侵染最为普遍(杨永林 等,1995;
雷蕾 等,2001;赵尊练 等,2004;奚庆 等,2007)。中国辣(甜)椒上已鉴定出的 RNA 病毒有
15 种,包括 CMV、TMV、烟草蚀纹病毒(Tobacco etch virus,TEV)、马铃薯 Y 病毒(Potato virus
Y,PVY)、马铃薯 X 病毒(Potato virus X,PVX)、辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus,PMMoV)、
苜蓿花叶病毒(Alfalfa mosaic virus,AMV)、蚕豆萎蔫病毒 2 号(Broad bean wilt virus 2,BBWV-2)、
烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)、辣椒环斑病毒(Chilli ring spot virus,ChiRSV)、番茄
斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)、花生黄斑病毒(Groundnut yellow spot virus,GYSV)、
辣椒褪绿病毒(Capsicum chlorosis virus,CaCV)、烟草轻型绿花叶病毒(Tobacco mild green mosaic
virus,TMGMV),以及今年首次在甜椒上发现的番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)(林
清 等,2001;赵尊练 等,2004;李志勇,2005;刘勇 等,2010;王亚南 等,2010;张仲凯 等,
2010;杨会房 等,2011;李飞 等,2012;王健华 等,2012;陈青 等,2013;赵汝娜 等,2014)。
鉴定出的 DNA 病毒均为双生病毒,包括番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)、
烟草曲茎病毒(Tobacco curly shoot virus,TbCSV)及中国辣椒黄化曲叶病毒(Pepper yellow leaf curl
China virus,PYLCCNV),其中 PYLCCNV 是双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花叶病毒属
(Begomovirus)的一个新种(Qing et al.,2010;阮涛,2012;丁英娜 等,2013)。
辣椒是重庆的支柱产业,近年来辣椒病毒病危害日趋严重,但有关重庆地区辣椒病毒病的研究
极少,仅报道 CMV 和 TMV 侵染辣椒,是否存在其它病毒种类尚不明确(雷蕾 等,2001;林清 等,
2001)。BBWV-2、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)和芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,
TuMV)均为茄科和十字花科蔬菜作物上发生普遍的病毒,但目前未见 ToMV 和 TuMV 侵染辣椒的
报道(张竹青,2009;张建云,2013),为了弄清重庆辣椒上除 CMV 和 TMV 外是否还存在其它的
病毒种类,进一步明确病毒病的主要毒原种类,有针对性地制定辣椒病毒病的防控措施以及进一步
指导辣椒抗病毒品种选育,本研究中利用 CMV、TMV、BBWV-2、ToMV 和 TuMV 等 5 种病毒的
血清,结合斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,对采自重
庆市 8 个区县的 152 份辣椒病毒病样品进行了检测。
郭思瑶,童 艳,黄 娅,罗信福,青 玲.
重庆辣椒病毒病病原初步鉴定和分析.
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1 材料与方法
1.1 材料
2013 年 6—8 月,分别从重庆巫山(9 份)、万州(11 份)、巫溪(21 份)、北碚(44 份)、石柱
(13 份)、彭水(25 份)、武隆(7 份)和永川(22 份)等 8 个区县的辣椒种植区采集了辣椒病毒病
样品共 152 份,保存于–80 ℃冰箱。
1.2 供试血清
CMV、TMV、ToMV、BBWV-2 及 TuMV 的相应抗原及单克隆抗体由浙江大学生物技术研究所
周雪平教授惠赠(青玲 等,2000;Yu et al.,2005),碱性磷酸酶标记的羊抗鼠 IgG 购自美国 Promega
公司。
1.3 病毒种类的血清学检测——斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)
将采集到的辣椒样品每次每份取 0.1 g,按 M/V(1 g /10 mL)分别加 1 mol · L-1 PBS 研磨,8 000
r · min-1 离心 3 min,取 2 μL 上清液点到硝酸纤维素膜(NC 膜)上,每个样品点 3 个点作为重复。
室温干燥 10 min 后,将 NC 膜浸入含 5%脱脂奶粉缓冲液中,室温封闭 30 min。然后将 NC 膜放
入 1︰5 000 倍稀释的单克隆抗体中室温孵育 30 ~ 60 min,PBST 洗膜 3 ~ 4 次,每次 3 min。将 NC
膜放入用 5%的脱脂奶粉 1︰8 000 倍稀释的碱性磷酸酶标记羊抗鼠 IgG 中室温孵育 30 ~ 60 min;然
后 PBST 洗膜 4 ~ 5 次。显色底物 NBT 66 μL 和 BCIP 33 μL 加到 10 mL 底物缓冲液中混匀,洗好的
膜用滤纸吸干后放入底物显色液中反应,待阳性对照显色明显,而阴性对照没有任何颜色显示时终
止反应(显色 5 ~ 20 min),随即在自来水中漂洗一下,观察并记录结果。
1.4 病毒总 RNA 提取
采用 Trizol 法提取每一样品的总 RNA。将 100 mg 辣椒样品用液氮磨细,迅速移入加有 1 mL
Trizol 的 2 mL 离心管中,室温静置 5 min;4 ℃下 12 000 r · min-1 离心 5 min;取上清液加入 200 μL
氯仿剧烈振荡 15 s,室温下放置 5 min;4 ℃下 12 000 r · min-1 离心 15 min;取水相(约 500 μL)
加入等体积的异丙醇,室温下放置 10 min;4 ℃下 12 000 r · min-1 离心 10 min;弃上清液,加入 1 mL
75%乙醇(用 DEPC 水配制)洗涤沉淀 2 次;4 ℃下 12 000 r · min-1 离心 5 min;室温干燥 RNA 沉
淀,加入 30 μL DEPC 水溶解,–80 ℃保存备用。
1.5 反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)
BBWV-2 特异性引物引自文献(Ferrer et al.,2007)。下载 GenBank 中已登录的 CMV、TuMV、
TMV 及 ToMV 各分离物的核苷酸序列,经多序列比对后根据其保守序列,用 Primer 5 设计各病毒
的特异性引物如下:CMV-F:5′-GATAAGAAGCTTGTTTCGCG-3′,CMV-R:5′-GCTCGATGTCGA
CATGAAGT-3′;TuMV-F:5′-TAAACGGAATGTGGGTGATGATGG-3′,TuMV-R:5′-GTCCTCGGTCG
TATGCCTTTCC-3′;TMV-F:5′-CAGCTGCTATTGACCTTGAAAC-3′,TMV-R:5′-CAATATCAATGA
TGCCAGAC-3′;ToMV-F:5′-GGAAACCTTTCCCTCAGAGC-3′,ToMV-R:5′-AGACATACTTTCA
AAAGTAT-3′。引物由华大基因合成。
对提取的总 RNA 进行反转录。RT 反应体系:RNA 模板 2.5 μL,Random 6 mers 0.5 μL,RNase
Free ddH2O 4.0 μL,5× PrimeScript Buffer 2.0 μL,Oligo dT Primer 0.5 μL,PrimeScript RT Enzyme MixⅠ
Guo Si-yao,Tong Yan,Huang Ya,Luo Xin-fu,Qing Ling.
Preliminary identification and analyses of viruses causing pepper virus disease in Chongqing,China.
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0.5 μL。反应程序:37 ℃ 15 min,85 ℃变性 20 s,合成的 cDNA 用于 PCR 扩增。PCR 反应体系:
12.5 μL 10× Premix Taq,1 μL 上游引物(10 μmol · L-1),1 μL 下游引物(10 μmol · L-1),1 μL cDNA,
加 ddH2O 至 25 μL。PCR 反应程序:94 ℃预变性 3 min,94 ℃变性 45 s,Tm退火 30 s,72 ℃延伸
1 min,循环 35 次,72 ℃延伸 10 min。取 5 μL PCR 产物用 1%琼脂糖凝胶电泳检测。
1.6 病毒扩增片段的克隆、测序和分析
PCR 产物纯化后克隆至 pGEM-T Easy 载体,经菌液鉴定后委托华大基因工程有限公司进行序
列测定。将测序结果与 GenBank 已登录的病毒核苷酸序列进行比对,采用 DNAStar(Version 7.0,
Madison,Wis.,USA)软件进行序列分析及相似性比较。
2 结果与分析
2.1 辣椒样品侵染病毒的 Dot-ELISA 检测
2.1.1 主要病毒种类
对采集的 152 份样品进行 Dot-ELISA 检测,结果表明,有 118 份样品可与 5 种植物病毒血清中
的 1 种或多种发生不同程度的阳性反应。其中,CMV 的总检出率最高,达 57.89%;此外,TuMV
和 TMV 的侵染现象也很普遍,总检出率分别为 36.18%和 30.26%;BBWV-2 和 ToMV 的总检出率
略低,分别为 24.34%和 22.52%。这些结果表明 CMV 在重庆地区辣椒上的侵染最普遍,为优势病毒
种类。
分析发现 5 种病毒在不同区县的发生及危害程度有所差别(图 1)。其中,彭水和石柱的辣椒病
毒病发生最为严重,有 4 种病毒的检出率均在 40%以上;巫山地区病害发生最轻,TMV 和 TuMV
检出率均为 11.11%,未检测到 BBWV-2 和 ToMV。CMV 在万州、彭水、石柱、北碚、永川和巫山
等 6 个区县的检出率均为最高,其中在万州地区其检出率高达 90.91%;在巫山地区危害最轻,检出
率为 22.22%;在彭水、石柱、北碚和永川其检出率分别为 80.00%、61.54%、61.36%和 59.09%;TMV
在武隆样品中的检出率最高,为 57.14%;TuMV 在巫溪样品中的检出率最高,为 54.55%。
图 1 重庆不同地区辣椒上单一病毒侵染分析
Fig. 1 The infection of single virus on pepper in different districts of Chongqing
郭思瑶,童 艳,黄 娅,罗信福,青 玲.
重庆辣椒病毒病病原初步鉴定和分析.
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图 2 辣椒上病毒的侵染类型及比例
Fig. 2 The infection types and percentage of viruses on pepper
表 1 辣椒样品的病毒复合侵染类型和比例
Table 1 Types and percentages of co-infections of viruses
in pepper samples
复合侵染的
病毒种类
Number of
viruses
病毒复合侵染类型
Types of co - infections of viruses
阳性检出率/
%
Positive rate
2 CMV + TuMV 33.33
TMV + CMV 25.00
CMV + BBWV-2 11.11
其他 Others 30.56
3 TMV + CMV + TuMV 22.58
CMV + TuMV + BBWV-2 16.13
TMV + CMV + BBWV-2 12.90
TMV + CMV + ToMV 16.13
其他 Others 32.26
4 CMV + TMV + BBWV-2 + TuMV 44.44
CMV + ToMV + BBWV-2 + TuMV 33.33
其他 Others 22.23
2.1.2 病毒复合侵染
在 118 份 ELISA 检测呈阳性的样品中,仅
发现 40 份样品受到单一病毒的侵染,其余样品
均检测到 2 种及以上病毒的复合侵染,复合侵
染率为 66.10%。其中两种病毒复合侵染所占比
例最高,为 30.51%;3 种病毒的复合侵染次之,
侵染率为 26.27%;4 种及以上病毒的复合侵染
率为 9.32%(图 2)。另外,两种病毒复合侵染
类型中以 CMV + TuMV 的复合侵染率最高,阳
性检出率达 33.33%。这些结果表明重庆地区辣
椒上病毒复合侵染现象普遍,CMV 与 TuMV
复合侵染是该地区辣椒上的优势复合侵染类
型。
各种病毒发生情况及复合侵染类型由表 1
可知,两种病毒复合侵染的类型及比例分别为:
CMV + TuMV,33.33%;TMV + CMV,25.00%;
CMV + BBWV-2,11.11%;其他类型占 30.56%;
3 种病毒复合侵染的类型及比例为:TMV +
CMV + TuMV,22.58%;CMV + TuMV +
BBWV-2,16.13%;TMV + CMV + BBWV-2,
12.90%;TMV + CMV + ToMV,16.13%;其他
类型占 32.26%;4 种病毒复合侵染的类型及比
例为:CMV + TMV + BBWV-2 + TuMV,
44.44%;CMV + ToMV + BBWV-2 + TuMV,
33.33%;其他类型占 22.23%。
2.2 RT-PCR 鉴定及序列分析
从 Dot-ELISA 检测呈阳性的辣椒病毒病样品中,随机抽取北碚地区 6 份样品,彭水地区 10 份
样品,共计 16 份样品,提取叶片总 RNA,分别用 CMV、TMV、TuMV、BBWV-2 和 ToMV 等 5
种病毒的特异性引物进行 RT-PCR 扩增,进一步明确辣椒样品中的病毒种类。结果表明,16 份样品
均扩增到 1 种或多种病毒与预期大小一致的片段,经克隆测序证明其分别为这 5 种病毒的特异性片
段,证实重庆地区辣椒病毒病的毒源包含 CMV、TMV、TuMV、BBWV-2 和 ToMV 等 5 种病毒。
其中,CMV 扩增片段与 GenBank 中各分离物核苷酸序列相似性在 96.3% ~ 98.8%之间,其与四川烟
草上的 CMV 分离物(KJ746016)序列相似性最高。TMV 因扩增片段仅 177 bp,且为 TMV 的保守
序列,因而该片段与 GenBank 中各 TMV 分离物核苷酸序列相似性均为 100%。TuMV 与 GenBank
中各分离物核苷酸序列相似性在 98.9% ~ 99.5%之间。BBWV-2 与中国松果菊上的分离物(JX070674)
核苷酸序列相似性最高,为 95.9%;与中国甜椒分离物(KF498696)相似性最低,仅为 87.4%。ToMV
与 GenBank 中各分离物核苷酸序列相似性在 97.20% ~ 99.30%之间。
将 Dot-ELISA 与 RT-PCR 检测方法所得结果进行比较(表 2),结果表明,两种方法的检测结果
基本一致,但利用 Dot-ELISA 从 XM-0554、XM-0555、XM-0563、PS-4529 及 PS-4552 等 5 个样品
Guo Si-yao,Tong Yan,Huang Ya,Luo Xin-fu,Qing Ling.
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中未检测到某一种病毒,而该病毒在 RT-PCR 检测中呈阳性。
表 2 Dot-ELISA 与 RT-PCR 检测结果的比较
Table 2 Camparison of detection results from Dot-ELISA and RT-PCR
Dot-ELISA RT-PCR 样品编号
Sample No. CMV TMV BBWV-2 ToMV TuMV CMV TMV BBWV-2 ToMV TuMV
XM-0554 + – + – – + * + – –
XM-0555 + – – – – + – * – –
XM-0559 + – + – – + – + – –
XM-0560 + – + – – + – + – –
XM-0562 + + – – – + + – – –
XM-0563 + – – – – + – – * –
PS-4528 + – – – – + – – – –
PS-4529 – – – + + * – – + +
PS-4533 + + – – – + + – – –
PS-4534 + – – – + + – – – +
PS-4535 + – – – + + – – – +
PS-4536 + – – – + + – – – +
PS-4539 + – – – – + – – – –
PS-4545 + – – – + + – – – +
PS-4546 + + – + + + + – + +
PS-4552 + + – – – + + – * –
注:“+”表示检测呈阳性;“–”表示未检出该病毒;“*”表示检测结果与 Dot-ELISA 结果不同。
Note:“+”means virus detected;“–”means no virus detected;“*”indicates the difference of detection results from Dot-ELISA and RT-PCR.
3 讨论
本研究中利用 Dot-ELISA 和 RT-PCR 技术检测重庆辣椒病毒病样品,结果表明重庆辣椒病毒病
的毒原种类包含 CMV、TMV、ToMV、TuMV 和 BBWV-2 等 5 种常见植物病毒。中国已先后在辣
椒上鉴定出 TMV、CMV、PVX、PVY、TEV、PMMoV、AMV、BBWV-2、TRV、TbCSV、ChiRSV、
TSWV、TYLCV、GYSV、CaCV 及 TMGMV 等 16 种病毒,不同地区辣椒病毒种类不同,但主要以
CMV 和 TMV 为主,其次为 PVX 和 PVY(杨永林 等,1995;雷蕾 等,2001;林清 等,2001;赵
尊练 等,2004;李志勇,2005;奚庆 等,2007;杨会房 等,2011)。ToMV 和 TuMV 在世界各地
分布广泛,主要危害茄科和十字花科作物(施曼玲,2006),是蔬菜上的重要病毒种类,但未见其侵
染辣椒的报道,因而本研究在辣椒上检测到 ToMV 和 TuMV 的侵染属首次报道。由于 ToMV 和 TuMV
均可通过蚜虫传播,近年来气候变暖及保护地蔬菜种植导致蚜虫发生量增加,贸易往来频繁又加速
了植物病毒的传播,导致蚜虫传播的植物病毒的危害日益加剧。以往有关重庆辣椒病毒基本都是针
对 CMV 和 TMV 的检测报道,本研究中从辣椒上检出更多的病毒种类,一方面可能是气候的变化以
及辣椒新品种的引进等原因,另一方面也可能是过去未针对这些病毒进行检测所致。
在本研究中检出的 5 种病毒中 CMV 的总检出率最高,为 57.89%,且在万州、彭水、石柱、北
碚、永川和巫山等 6 个区县的检出率均最高,其中在万州和彭水更是高达 90.91%和 80.00%,表明
CMV 为重庆地区辣椒上的优势毒原。检测发现辣椒上病毒复合侵染现象普遍,在 118 份阳性样品中
复合侵染率达 66.10%,且种类较多,其中两种病毒复合侵染率达 30.51%,其中较为常见的复合侵
染类型为 CMV + TuMV、TMV + CMV 及 TMV + CMV + TuMV。事实上,TMV、CMV 与 TuMV 的
单一检出率也高于其他病毒。从病毒在各地区的发生来看,北碚、石柱、彭水及永川等 4 个地区病
毒复合侵染比较严重,5 种病毒在这些地区都有发生。彭水和石柱地区的辣椒病毒病最为严重,有 4
种病毒的检出率均在 40%以上,而巫山地区病害最轻。不同地区病毒种类和数量的差异可能是由于
郭思瑶,童 艳,黄 娅,罗信福,青 玲.
重庆辣椒病毒病病原初步鉴定和分析.
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环境条件、气候因素以及种植方法不同等造成的。由于巫山海拔高,气温偏低,是重庆主要的马铃
薯种植区,辣椒仅少量种植,故病毒病不容易造成大面积危害,而石柱和彭水地区具有重庆最大的
辣椒种植基地,这种规模化、单一品种的种植方式可能是造成病毒病发生及病毒复合侵染严重的重
要原因。
比较发现 Dot-ELISA 和 RT-PCR 两种技术的检测结果基本一致,除个别样品在血清学检测中未
检测出病毒而在 RT-PCR 中被检出之外,其余血清学检测呈阳性的病毒样品在分子检测中都扩增到
了相应病毒的特异性片段,两种方法相结合可确保试验的准确性。
本试验中有 33 份样品检测呈阴性,但病毒病的症状明显,不能排除感染其他病毒的可能性。
由于本试验受到采集样品数量及地域的限制,且仅针对 5 种植物病毒进行了检测,因而无法涵盖引
起该地区辣椒病毒病的所有毒源,样品中是否还存在其它侵染辣椒的病毒种类如 ChiRSV、TSWV
和 PMMoV 等仍需进一步鉴定。
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