全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 6 期 2014 年 3 月

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HPLC 法同时测定常山胡柚花中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的量
宋剑锋 1，冯敬骞 2，胡建华 3，傅厚道 4*
1. 衢州市食品药品检验所，浙江 衢州 324000
2. 衢州职业技术学院，浙江 衢州 324000
3. 衢州南孔中药有限公司，浙江 衢州 324000
4. 浙江省宁波市第二医院，浙江 宁波 315010
摘 要：目的 建立同时测定常山胡柚花 Citrus changshan-huyou Y. B. Chang 中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的 RP-HPLC 方法。
方法 采用 HPLC 法，色谱柱为安捷伦 ZORBAX SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.2%磷酸（15∶85）；
检测波长为 284 nm；体积流量 1.0 mL/min；柱温为 40 ℃；峰面积外标法定量。结果 柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷分别
在 28.45～284.5、18.09～180.93、85.86～858.55 ng 内呈良好的线性关系，回归方程分别为 Y＝1 725.2 X＋6.383 3，r＝0.999 8；
Y＝1 764.6 X＋0.416 7，r＝0.999 8；Y＝1 914.7 X＋15.892，r＝0.999 6。平均回收率分别为 98.83%、99.05%、98.83%；RSD
分别为 2.12%、2.30%、1.85%；并按该建立的方法，测得样品中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的量。结论 本方法简便、快速、
准确、可靠，可为常山胡柚花的质量控制提供参考。
关键词：常山胡柚花；HPLC 法；柚皮苷；橙皮苷；新橙皮苷
中图分类号：R286.022 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)06 - 0854 - 03
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.06.022
Simultaneous determination for contents of naringin, hesperidin, and neohesperidin
in flower of Citrus changshan-huyou by RP-HPLC
SONG Jian-feng1, FENG Jing-qian2, HU Jian-hua3, FU Hou-dao4
1. Quzhou Institute for Drug Control, Quzhou 324000, China
2. Quzhou College of Technology, Quzhou 324000, China
3. Quzhou Nankong Chinese Medicine Co., Ltd., Quzhou 324000, China
4. Ningbo No. 2 Hospital, Ningbo 315010, China
Abstract: Objective To establish a method for the simultaneous determination for the contents of naringin, hesperidin, and
neohesperidin in the flower of Citrus changshanhuyou by RP-HPLC. Methods The HPLC method was adopted with Agilent Zorbax
SB-C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) column; The mobile phase was acetonitrile-0.2% aqueous phosphoric acid (15︰85) with the flow rate
of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 284 nm and column temperature was 40 ℃; The peak areas were quantified by external
standard method. Results According to the method, naringin linear was within 28.45—284.5 ng, the regression equation was Y =
1 725.2X + 6.383 3 (r = 0.999 8), and the average recovery rate was 98.83%. Hesperidin linear was within 18.09—180.93 ng, Y＝1 764.6
X＋0.416 7 (r = 0.999 8) with the average recovery rate of 99.05%. Neohesperidin linear was within 85.86—858.55 ng, Y = 1 914.7X +
15.892 (r = 0.999 6), and the average recovery rate was 98.83%. According to the established method, the contents of sample, naringin,
hesperidin, and neohesperidin were respectively determined. Conclusion The method is simple, rapid, accurate, and reliable, which
provides the reference for the quality control for the flower of C. changshanhuyou, and is suitable for the content determination.
Key words: flower of Citrus changshanhuyou; HPLC method; naringin; hesperidin; neohesperidin

常山胡柚 Citrus changshan-huyou Y. B. Chang
主产于浙江衢州，以常山为重点产区，常山县青石
乡胡家村为常山胡柚的起源地，资源丰富，产量高，
花期 4 月下旬至 5 月上旬[1-2]。常山胡柚花为常山胡

收稿日期：2014-01-27
基金项目：浙江省衢州市科技计划项目（20061082）
作者简介：宋剑锋（1974—），男，浙江衢州人，副主任中药师，主要从事中药材（饮片）及中成药质量研究。
Tel: (0570)8587269 E-mail: sjfqz@163.com
*通信作者 傅厚道（1973—），男，浙江宁波人，副主任中药师。Tel: 13616883400 E-mail: 13616883400@163.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 6 期 2014 年 3 月

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柚的花蕾，在花期大多胡柚花蕾最后都会掉落或被
疏枝整理，当地农户进行采集、烘制和晒干后，加
工生产为花茶。赵雪梅等[3-6]对常山胡柚皮中的挥发
性成分、黄酮类成分、相关药效做了大量的研究工
作，证实胡柚皮挥发油具有较好的抗菌活性，其中
对真菌的抑制效果好于对细菌的抑制效果，胡柚皮
中黄酮类成分主要为柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷，
具有免疫调节等生物活性。
常山胡柚的花朵和花蕾目前主要作为花茶使
用，其中主要为黄酮类成分，指标成分是柚皮苷、
橙皮苷和新橙皮苷，至今仍未见有常山胡柚花的相
关文献报道，本实验采用高效液相色谱法同时测定
其中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的量，以期为利用
常山胡柚花的资源提供参考，建立常山胡柚花的质
量控制方法。经方法学研究，证明本法结果准确，
操作方便，可用于常山胡柚花的质量控制。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Agilent 1260 高效液相色谱仪，自动进样系统；
日本岛津 UV—2450 紫外分光光度计；梅特勒
XP205 型电子天平；KQ—250B 型超声波清洗器（功
率：250 W，频率：40 kHz，昆山市超声仪器有限
公司）。
1.2 试药
柚皮苷（110722-201111）、橙皮苷（110721-
201014）、新橙皮苷（111857-201102）对照品均由
中国食品药品生物制品检定研究院提供，均供测定
用。乙腈为色谱纯；磷酸分析纯；水为纯化水；常
山胡柚花（批号及采集地分别为 20130422 于常山
县、20130429 于衢江区、20130502 于常山县、
20130505 于柯城区），经衢州食品药品检验所宋剑
锋 副 主 任 中 药 师 鉴 定 为 常 山 胡 柚 Citrus
changshan-huyou Y. B. Chang 的花蕾。
2 方法与结果
2.1 色谱条件和系统适应性试验
安捷伦 ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5
μm）；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液（15∶85）；检测
波长为 284 nm；体积流量 1.0 mL/min，柱温：40 ℃；
进样量：5 μL；峰面积外标法定量。理论塔板数按柚
皮苷峰计算不低于 4 000，分离度均大于 1.5，对称
因子 0.95～1.05。色谱图见图 1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品适

1-柚皮苷 2-橙皮苷 3-新橙皮苷
1-naringin 2-hesperidin 3-neohesperidin
图 1 样品 (A) 和混合对照品 (B) 的 HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC of samples (A) and mixed
reference substances (B)
量，用甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即制得
含柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷约分别为 30、20、80
μg/mL 的对照品混合溶液。
2.3 供试品溶液制备
取常山胡柚花适量，60 ℃烘干，粉碎，过三号
筛，取约 0.2 g，精密称定，置索氏提取器中，加甲
醇 150 mL，加热回流至提取液无色，放冷，滤过，
滤液置 200 mL 量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容
器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，
用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2.4 标准曲线的制备
分别精密吸取对照品溶液 1.0、2.0、4.0、5.0、
8.0、10 μL，注入高效液相色谱仪，按“2.1”项条
件测定，记录峰面积，以峰面积为纵坐标（Y）、对
照品溶液中成分的质量为横坐标（X）进行线性
回归，得柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的回归方程，
分别为 Y＝1 725.2 X＋6.383 3，r＝0.999 8；Y＝
1 764.6 X＋0.416 7，r＝0.999 8；Y＝1 914.7 X＋
15.892，r＝0.999 6。结果表明柚皮苷、橙皮苷、新
橙皮苷分别在 28.45～284.5、18.09～180.93、85.86～
858.55 ng 内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
按“2.1”项条件，取“2.2”项条件下的对照品
溶液混合溶液，进样 5 μL，重复进样 6 次，结果柚
皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的峰面积的 RSD 分别为
0.36%、0.23%、0.21%。
2.6 重复性试验
取同一批号样品 6 份（批号 20130502），按照
“2.3”项下操作，测定结果柚皮苷、橙皮苷、新橙
皮苷平均质量分数分别为 2.18%、1.41%、5.25%，
RSD 分别为 1.24%、2.50%、1.26%。
2.7 稳定性试验
取同一批号（批号 20130502）供试溶液，在室
1 2 3
5 10 15 20 25 30 35 40
t / min
A
B
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温下放置，分别按“2.1”项色谱条件在 0、4、8、
15、24、48 h 时测定，共测定 6 次，结果柚皮苷、
橙皮苷、新橙皮苷峰面积的 RSD 分别为 0.90%、
1.54%、0.98%。
2.8 回收率试验
采用加样回收试验方法，取已测定的胡柚花样
品（批号 20130502）粉末 6 份，每份约 0.1 g，精
密称定，分别精密吸取 10 mL 对照品溶液（柚皮苷
0.222 6 mg/mL 、橙皮苷 0.141 8 mg/mL、新橙皮苷
0.628 5 mg/mL），加入到样品中，照“2.3”项下操
作，分别按上述色谱条件测定，计算柚皮苷、橙皮
苷、新橙皮苷加样回收率分别为 98.83%、99.05%、
98.83%，RSD 分别为 2.12%、2.30%、1.85%。
2.9 样品测定
取样品适量，按照“2.3”项下操作制备得样
品溶液，按“2.1”项色谱条件进样 5 μL，记录柚
皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的峰面积，按外标法计
算，测得柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的量，计算
结果见表 1。
表 1 样品测定结果
Table 1 Determination of samples
批号 采集地 柚皮苷 / % 橙皮苷 / % 新橙皮苷 / %
20130422 常山 1.58 1.02 4.30
20130429 衢江 1.38 0.55 2.57
20130502 常山 2.18 1.41 5.25
20130505 柯城 1.55 1.23 4.84
由测定结果可见，在相近时间采集的常山胡
柚花样品，采自常山的所含指标成分的量相对较
高，常山的常山胡柚花样品的花蕾较小，质量分
数与采自柯城的相近，但较采自衢江的样品高。
由此，采自常山的胡柚花在其量上有一定的地缘
优势。但由于受样品数限制，有待通过增加采集
样品进一步确证。
3 讨论
3.1 检测波长的选择
分别取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品溶液，
用 HPLC-DAD 检测，在波长 200～400 nm 扫描，
经 DAD 光谱分析，结果均在 284 nm 波长处有最大
吸收，故以 284 nm 作为检测波长。
3.2 样品的提取
索氏提取法提取完全、容易控制，所以使用此
法制备样品，以后可以考察甲醇超声提取法、甲醇
回流提取法与该法的综合效率比较，以期择优选用。
3.3 柱温的选择
柱温虽对组分的分离度影响较小，但对样品组
分的保留时间影响较大，经反复实验，柱温在 40 ℃
时既可加快分析速度，又可保持出峰时间的恒定，
从而保证试验结果的重复性和准确性。
3.4 流动相的确定
比较了甲醇-水（25∶75）、乙腈-4%醋酸（12∶
88）、乙腈-0.2%磷酸（15∶85）3 种流动相，结果
以乙腈-0.2%磷酸（15∶85）分离效果最好，故选用
此作为流动相。
3.5 色谱柱的选择
考察了不同色谱柱，包括安捷伦 ZORBAX
SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）、岛津 VP-ODS
（250 mm×4.6 mm，5 μm）、依利特 Hypersil C18（250
mm×4.6 mm，5 μm），结果表明安捷伦 ZORBAX
SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）能够获得较好的
峰形和分离度。
常山胡柚花在空气中容易吸潮，不易粉碎，且
对结果影响较大，考虑到其中还含有挥发油等挥发
性成分，故样品采用 60 ℃烘干，粉碎，过 3 号筛
等处理。取样及量计算均以此干燥品为准。另外，
不同采集地、不同花期的常山胡柚花中柚皮苷、橙
皮苷、新橙皮苷的量是否有较大差别，常山胡柚的
花、果皮及果汁中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的量
是否有较大差别，还有待于进一步考察，这对常山
胡柚的进一步开发都具有较大的现实意义。本方法
简便、快速、准确、可靠，可为常山胡柚花的质量
控制提供参考。
参考文献
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术出版社, 1993.
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[4] 赵雪梅, 叶兴乾, 朱大元, 等. 常山胡柚皮中的一个新
化合物 [J]. 药学学报, 2008, 43(12): 1208-1210.
[5] 赵雪梅, 叶兴乾, 朱大元, 等. 常山胡柚皮中挥发性成
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