全 文 ：ＨＰＬＣ同时测定灯盏细辛注射液中４种
有效成分的含量
王晓明，王跃飞，潘桂湘，杨 静
（天津中医药大学 中医药研究院 省部共建教育部方剂学重点实验室，天津 ３００１９３）
［摘要］ 目的：建立同时测定灯盏细辛注射液中绿原酸、咖啡酸、１，５二Ｏ咖啡酰奎宁酸、野黄芩苷的含量测
定方法。方法：采用高效液相色谱法，ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８（４６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）色谱柱；流动相Ａ０１％甲酸
水溶液，Ｂ乙腈，梯度洗脱；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱温３５℃，进样量２０μＬ。结果：绿原酸、咖啡酸、１，５二Ｏ咖啡酰
奎宁酸、野黄芩苷分别在００２５～０８００（ｒ＝０９９９０），００２７～０８５０（ｒ＝０９９９９），００６２～１９７８（ｒ＝０９９９７），
０１１８～３７７０μｇ（ｒ＝０９９９９）成良好的线性关系，加样回收率分别为 ９７１９％（ＲＳＤ１１６％）；１００４５％（ＲＳＤ
１１６％）；９７３２％（ＲＳＤ１４３％）；１０３８１％（ＲＳＤ０７０％）。结论：本法简便、快捷，结果准确、重复性好，可用于灯盏
细辛注射液中４种有效成分的含量测定。
［关键词］ 灯盏细辛注射液；绿原酸；咖啡酸；１，５二Ｏ咖啡酰奎宁酸；野黄芩苷
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１４１６８１０３
［收稿日期］ ２００７０９２０
［基金项目］ 国家重点基础研究发展规划项目（２００５ＣＢ５２
３４０４）
［通讯作者］ 潘桂湘，Ｔｅｌ：（０２２）２３０５１１１４，Ｆａｘ：（０２２）
２３０５０１２９，Ｅｍａｉｌ：ｇｕｉｘｉａｎｇｐ＠１６３．ｃｏｍ
灯盏细辛始载于《滇南本草》，习称灯盏花，又
名灯盏菊、细辛草、土细辛、地朝阳、双葵花、东菊、地
顶草（云南），为菊科植物短葶飞蓬Ｅｒｉｇｅｒｏｎｂｒｅｖｉｓｃａ
ｐｕｓ（Ｖａｎｔ．）Ｈａｎｄ．Ｍａｚｚ．的干燥全草，主产于云南、
四川、贵州、广西、湖南、西藏等省区。性寒，味苦”，
具有散寒解表，止痛舒络，活血治瘫的功效［１２］。自
上世纪７０年代起灯盏花制剂就已经开始用于临床。
灯盏细辛（或灯盏花素）注射液和灯盏花素片现已
成为目前临床的常用药。其有效成分包括黄酮类化
合物及酚酸类化合物，现已证实对于治疗缺血性脑
血管疾病效果显著［３］。为进一步提高灯盏细辛注
射液质控标准，本试验以绿原酸、咖啡酸、１，５二Ｏ
咖啡酰奎宁酸、野黄芩苷为指标成分，根据相关文
献［４６］，建立了采用高效液相色谱法同时测定灯盏细
辛注射液中酚酸类及黄酮类４种化合物含量的方
法。
１ 仪器与试药
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００液相色谱仪（四元泵、在线真空脱
气机、自动进样器、柱温箱、ＤＡＤ检测器）；ＡＸ２０５
１／１０万天平（瑞士梅特勒托利多公司）；ＢＰ１２１Ｓ
１／万天平（德国赛多利斯公司）。
灯盏 细 辛 注 射 液 （批 号 ０５０２３１，０５０６０８，
０５０８０９）由云南生物谷灯盏花药业有限公司提供；
绿原酸 （１１０７５３２００４１３，纯度 ＞９８％）、咖啡酸
（１１０８８５２００１０２，纯度＞９８％）对照品均购自中国药
品生物制品检定所；１，５二Ｏ咖啡酰奎宁酸、野黄
芩苷对照品由云南生物谷灯盏花药业有限公司提供
（纯度均 ＞９８％）；实验用水为超纯水；甲醇、乙腈为
色谱纯，其余试剂为分析纯。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８色谱柱（４６
ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）；流动相Ａ０１％甲酸，Ｂ乙腈，
梯度洗脱：０～１２ｍｉｎ，７％ ～１０％Ｂ，１２～１５ｍｉｎ，
１０％～１９％Ｂ，１５～２８ｍｉｎ，１９％Ｂ；流速 １０ｍＬ·
ｍｉｎ－１；柱温３５℃；检测波长３３５ｎｍ；进样量２０μＬ。
在上述色谱条件下，绿原酸、咖啡酸、１，５二Ｏ咖啡
酰奎宁酸、野黄芩苷与其他峰分离度大于１５，峰形
较好，对照品及供试品的色图谱见图１。
２．２ 对照品溶液的制备 精密称定绿原酸 ４００
ｍｇ，咖啡酸４２５ｍｇ，１，５二Ｏ咖啡酰奎宁酸 ９８９
ｍｇ，野黄芩苷１８８５ｍｇ对照品分别置１０ｍＬ量瓶
中，加甲醇定容置刻度，作为储备液，备用。另精密
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第３３卷第１４期
２００８年７月
中 国 中 药 杂 志
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Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １４
Ｊｕｌｙ，２００８
Ａ．对照品；Ｂ．供试品；１．绿原酸；２．咖啡酸；
３．１，５二Ｏ咖啡酰奎宁酸；４．野黄芩苷
图１ 对照品及供试品ＨＰＬＣ图
移取储备液各１ｍＬ于同一１０ｍＬ量瓶中，加５０％
甲醇定容至刻度，摇匀，即得 ４００，４２５，９８９，
１８８５μｇ·ｍＬ－１的混合对照品溶液。
２．３ 供试品溶液的制备 精密移取５ｍＬ灯盏细辛
注射液（０５０８０９）于５０ｍＬ量瓶中，用５０％甲醇定容
至刻度，摇匀，即得。
２．４ 线性关系的考察 精密移取混合对照品溶液
适量，配制含绿原酸为 １２５，２５０，５００，１００，
２００，４００ｍｇ·Ｌ－１；含咖啡酸为１３３，２６６，５３１，
１０６２，２１２５，４２５０ｍｇ·Ｌ－１；含 １，５二Ｏ咖啡酰
奎宁酸为３０９，６１８，１２３６，２４７２，４９４５，９８９０ｍｇ
·Ｌ－１；含野黄芩苷为 ５８９，１１７８，２３５６，４７１２，
９４２５，１８８５０ｍｇ·Ｌ－１的混合对照品溶液，摇匀，吸
取上述混合对照品溶液２０μＬ注入高效色谱仪，按
２．１项下方法进行分析。分别以对照品进样量（μｇ）
为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线并进行回
归计算，得绿原酸、咖啡酸、１，５二Ｏ咖啡酰奎宁
酸、野黄芩苷的标准曲线回归方程及线性范围，结果
见表１。
表１ ４种成分线性关系考察（ｎ＝６）
化合物 回归方程 线性范围／μｇ ｒ
绿原酸 Ｙ＝２４９９５Ｘ＋１６８４０ ００２５～０８００ ０９９９０
咖啡酸 Ｙ＝４９０６２Ｘ－１３６０９ ００２７～０８５０ ０９９９９
１，５二Ｏ咖啡酰奎宁酸 Ｙ＝２７８３５Ｘ＋２２９５３ ００６２～１９７８ ０９９９７
野黄芩苷 Ｙ＝３２３４４Ｘ－４１９２０ ０１１８～３７７０ ０９９９９
２．５ 精密度试验 取灯盏细辛注射液，依２．３项下
制备供试品溶液，重复进样６次，记录峰面积，结果
表明：绿原酸 ＲＳＤ１５％；咖啡酸 ＲＳＤ０２％；１，５
二Ｏ咖啡酰奎宁酸ＲＳＤ０５％；野黄芩ＲＳＤ０４％。
２．６ 重复性试验 取灯盏细辛注射液，依２．３项下
制备供试品溶液６份，测得各成分平均质量浓度依
次为绿原酸 ８７３μｇ·ｍＬ－１，咖啡酸 １０７μｇ·
ｍＬ－１，１，５二Ｏ咖啡酰奎宁酸１３３μｇ·ｍＬ－１，野
黄芩 ４７９μｇ·ｍＬ－１；ＲＳＤ依次为 １８％，２９％，
２０％，２６％。
２．７ 稳定性试验 取灯盏细辛注射液，依２．３项下
制备供试品溶液，室温放置，分别于０，２，４，６，８ｈ按
２．１下进行分析。结果表明：绿原酸、咖啡酸、１，５
二Ｏ咖啡酰奎宁酸、野黄芩苷在 ８ｈ内稳定，ＲＳＤ
分别为１６％，０２％，０３％，０３％。
２．８ 回收率试验 取已知含量的灯盏细辛注射液
２５ｍＬ，置于５０ｍＬ量瓶中，分别加入绿原酸、咖啡
酸、１，５二Ｏ咖啡酰奎宁酸、野黄芩苷储备液５００，
６００，３００，６００μＬ，依２．３项下制备供试品溶液，结果
见表２。
２．９ 含量测定 按２．３项下制备供试品溶液，测定
３批注射液中绿原酸、咖啡酸、１，５二Ｏ咖啡酰奎宁
酸、野黄芩苷的含量，结果见表３。
表２ 绿原酸、咖啡酸、１，５２Ｏ咖啡酰奎宁酸、
野黄芩苷的加样回收率（ｎ＝６）
测定
成分
样品中
含量 ／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
绿原酸 ０２１８ ０２００ ０４１２ ９７１２ ９７１９ １１６
０２１８ ０２００ ０４１０ ９５８６
０２１８ ０２００ ０４１４ ９８１０
０２１８ ０２００ ０４１３ ９７２９
０２１８ ０２００ ０４１０ ９６０５
０２１８ ０２００ ０４１６ ９８７４
咖啡酸 ０２６８ ０２５５ ０５２５ １００７４ １００４５１１６
０２６８ ０２５５ ０５２１ ９９３１
０２６８ ０２５５ ０５２７ １０１５６
０２６８ ０２５５ ０５２４ １００６６
０２６８ ０２５５ ０５２０ ９８８０
０２６８ ０２５５ ０５２７ １０１６５
１，５二Ｏ ０３３２ ０２９７ ０６２０ ９６９６ ９７３２ １４３
咖啡酰奎 ０３３２ ０２９７ ０６１９ ９６６４
宁酸 ０３３２ ０２９７ ０６２５ ９８６１
０３３２ ０２９７ ０６２３ ９８００
０３３２ ０２９７ ０６１４ ９５０５
０３３２ ０２９７ ０６２５ ９８６８
野黄芩苷 １２０３ １１３１ ２３６５ １０２７８ １０３８１０７０
１２０３ １１３１ ２３８１ １０４２０
１２０３ １１３１ ２３８０ １０４０８
１２０３ １１３１ ２３７５ １０３６８
１２０３ １１３１ ２３８８ １０４８２
１２０３ １１３１ ２３７１ １０３２７
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表３ 样品测定 ｍｇ·Ｌ－１
批号 绿原酸 咖啡酸 １，５二Ｏ咖啡酰奎宁酸 野黄芩苷
０５０２３１ ５３６ ６２４ １０７ ４１２
０５０６０８ ６６８ １０８ ８６８ ４６１
０５０８０９ ８７５ １０４ １３１ ４５７
３ 讨论
３．１ 检测指标的选择 灯盏细辛注射液是以灯盏
花中提取的酚酸类及黄酮类化合物按一定比例配制
而成。因此，在指标成分选择时，选择了绿原酸、咖
啡酸、１，５二Ｏ咖啡酰奎宁酸、野黄芩苷，建立了采
用高效液相色谱法同时测定灯盏细辛注射液中黄酮
类及酚酸类４种化合物含量的方法。
３．２ 检测波长的选择 采用 ＤＡＤ进行光谱扫描，
灯盏细辛注射液中酚酸类成分的最大吸收波长在
（３２０±１０）ｎｍ处，野黄芩苷在２８０，３３５ｎｍ处有最
大吸收。因此，综合考虑，选择检测波长为３３５ｎｍ。
３．３ 流动相的选择 对甲醇０１％磷酸、乙腈
０１％甲酸进行了考察。结果表明甲醇０１％磷酸
为流动相时，对稀释溶剂要求较高，当稀释溶剂中甲
醇浓度高于５０％时既出现裂缝。乙腈０１％甲酸为
流动相时峰形较好，各成分分离较好，分析时间约为
３０ｍｉｎ，绿原酸、咖啡酸、１，５二Ｏ咖啡酰奎宁酸、野
黄芩苷的保留时间分别约为 ９８０，１２５０，１９３６，
２０１０ｍｉｎ。
３．４ 稀释溶剂的选择 试验中曾用１００％，７０％，
５０％甲醇分别作为稀释溶剂，结果表明１００％甲醇
溶解的供试品在该流动相下出现裂峰；７０％甲醇溶
解的供试品峰形较差；而５０％甲醇溶解的供试品峰
形较好，故选用５０％甲醇溶液作为稀释液。
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ＷＡＮＧＸｉａｏｍｉｎｇ，ＷＡＮＧＹｕｅｆｅｉ，ＰＡＮＧｕｉｘｉａｎｇ，ＹＡＮＧＪｉｎｇ
（ＴｈｅＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｒｅｏｆＴｉａｎｊｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｋｅｙ
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ｍｍ，５μｍ）ｅｖａｌｕａｔｅｄｗｉｔｈａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ０１％ ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ，ｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎ；ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；ｔｈｅ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｅｏｆｃｏｌｕｍｎｗａｓａｔ３５℃；ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓａｔ３３５ｎｍｆｏｒＵＶｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｓｗｅｒｅｌｉｎ
ｅａｒｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ００２５ｔｏ０８００μｇ（ｒ＝０９９９０）ｆｏｒｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄ，００２７ｔｏ０８５０μｇ（ｒ＝０９９９９）ｆｏｒｃａｆｅｉｃａｃｉｄ，００６２ｔｏ
１９７８μｇ（ｒ＝０９９９７）ｆｏｒｃａｆｅｏｙｌｑｕｉｎｉｃａｃｉｄａｎｄ０１１８ｔｏ３７７０μｇ（ｒ＝０９９９９）ｆｏｒｓｃｕｔｅｌａｒｉｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｌｅｌｙ．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖ
ｅｒｉｅｓｗｅｒｅ９７１９％ ｗｉｔｈＲＳＤ１１６％；１００４５％ ｗｉｔｈＲＳＤ１１６％；９７３２％ ｗｉｔｈＲＳＤ１４３％ ａｎｄ１０３８１％ ｗｉｔｈＲＳＤ０７０％，ｒｅ
ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅａｓｓａｙｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｉｍｐｌｅ，ｉｔｈａｄａｄｅｑｕａｔｅａｃｃｕｒａｃｙａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙｔｏｑｕａｎｔｉｆｙｔｈｅ
ｆｏｕｒａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＤｅｎｇｚｈａｎＸｉｘｉｎｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＤｅｎｇｚｈａｎＸｉｘｉｎｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄ；ｃａｆｅｉｃａｃｉｄ；ｃａｆｅｏｙｌｑｕｉｎｉｃａｃｉｄ；ｓｃｕｔｅｌａｒｉｎ
［责任编辑 鲍 雷］
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