全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 29(5)：707— 71O 2009年 9月
HPLC法测定牙膏中柚皮苷的含量
覃青云，卢凯玲
(柳州两面针股份有限公司，广西 柳州 545001)
摘 要：建立了高效液相色谱测定牙膏中柚皮苷含量的方法 采用的色谱条件：Hypersil BDS C18色谱柱
(250 mm×4．6 mm，5 m)；柱温为 4O℃；以水(A相)和乙腈(B相)，梯度洗脱程序为：0～15 min，10 ～
100％ B；流速为 1．o mL／min；检测波长为 283 nm；进样量为 20 L。结果表明，柚皮苷的质量浓度在 14．55～
116．40／*g／mL范围内与峰面积呈 良好的线性关系(r—O．9999)，平均加标回收率为 97．56％。该方法稳定 、准
确，重现性好，可作为牙膏中柚皮苷的含量测定和质量控制方法。
关键词：HPLC法；牙膏；柚皮苷
中图分类号 ：Q946．83 文献标识码 ：A 文章编号：1000—3142(2009)05—0707—04
narlngln in toothpaste by high
— I - ‘ 1 ’ J ’
oertormance liquid ctwomatoeraOhy
QIN Qing-Yun．LU Kai—Ling
(Liuzhou Liangmianzhen Co．Ltd，l iuzhou 545001，China)
A~tract：A high performance liquid chromatographic method WaS developed for determining the content Of Naringin
in toothpaste．The chromatographic analysis was carried out on a Hypersil BDS C18 column(250 mm×4．6 mm，5
m)．The mobile phase was water(A)and acetonitrile(B)with gradient elution(O～ 15 min，10 ～ 100 B)．The
flow rate was maintained at 1．0 mL／min；The detection wavelength was set at 283 nm and the column temperature
was controlled at 40℃，The sample injection volume was 2O L_The results showed that the mass concentration of
Naringin with good linearity VS．the peak area within ranges of 14．55～116．40 ttg／mL，r=O．9999．The average re—
covery was 97．56 ．The method was proved to be stable，reproducible and precise，It could be used for determination
and quality control of naringin in toothpaste．
Key words：HPLC；toothpaste；Naringin
柚子(Citrus grandis)，又称文旦，是芸香科柑
桔属水果，有沙田柚、蜜柚、胡柚、葡萄柚、文旦柚、枰
山柚等品种。它原产于中国、印度、马来西亚一带，
在我国沿海的浙江、福建、广东、广西有种植(邓婷
婷，2008)。柚皮占整个柚子的 43 ～48 9／6，柚皮除
含有水分、维生素、矿物质等人体必须的营养素外，
还含有多种对人体有益 的非营养性生理活性成分，
如黄酮类化合物(杨洋，2001)、香精油(张晨，2000)、
天然色素(林春绵，l996)、膳食纤维(王林果，2008)
等。中医认为，柚皮具有止咳、化痰、理气、抗炎、止
痒等功效。现代医学研究表明，柚皮提取物具有抗
氧化、抗凝、抗微生物、抗癌、抑酶、抗衰老、降血糖、
降血压等活性(贾冬英，2001；冯宝民，2001)。柚皮
苷是柚皮提取物的活性成分之一，全称为柚皮素一7一
()-新橙皮糖苷，是一种双氢黄酮类化合物(苏玲，
20O8)。柚子中 50％以上 的柚皮苷分布于果皮 内，
柚皮苷具有多种生物活性 ，如抗氧化、抗突变、抗肿
瘤、抑菌、改善微循环、降低毛细血管的脆性等，在医
药、食品等领域有广泛应用(贾冬英，2002)。
柚皮提取物牙膏是两面针公司研发的新型消炎
收稿日期：2009—01—22 修回日期：2009—08—19
基金项目：柳州市科技计划项目(2006040501)[Supported by the Science and Technology Plan of liuzh0u(2006O4O501)]
作者简介：覃青云(1955一)t男，广西柳州市人，高级工程师 ，主要从事中草药在日化产品中的应用研究 ，(E-mail)qinqy@Imz．corn．cn。
。通讯作者(Author for c0rresp0ndence)
7O8 广 西 植 物 29卷
止血牙膏，根据功效型牙膏国家标准的要求，牙膏中
的活性成分需定性或定量检测(黄光伟 ，2009)。柚皮
提取物多用 于药品和保健食 品中(李芳 ，2007；贺肇
东，2008；苏东林，2008)。目前尚无添加柚皮提取物
作为牙膏功效剂 以及检测其中柚皮苷含量方法的文
献报道。为有效控制牙膏的产品质量 ，本研究以柚皮
提取物中的主要活性成分柚皮苷为指标 ，采用 HPLC
分析法 ，测定牙膏 中柚皮苷含量 ，为两面针新型消炎
止血牙膏建立相应的质量控制方法提供可靠依据。
1 材料与方法
1．1仪器与试剂
Agilent 1200高效液相色谱仪，配有色谱工作站和
DAD检测器，美国 Agilent公司；AND HM_200电子天
平，日本 公司；As3120超声清洗仪，Automatic科
学仪器公司；LG1o．2．4A离心机，北京医用离心机厂；
RE52—98旋 转 蒸 发 器，上 海 亚 荣 生 化 仪 器 厂；
ZFMQ05001 Mli—Q PUJS超纯水仪，美国Milipore公
司；柚皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：
110722—200309)；牙膏(规格：每支 120 g，柳州两面针股
份有限公司生产)；乙腈，色谱纯，国药集团化学试剂有
限公司；甲醇，色谱纯，Fisher公司；超纯去离子水。
1．2色谱条件
色谱柱：依利特 Hypersil BDS CI8(250 mm×
4．6 mm，5 m)；流动相；A为超纯去离子水，B为乙
腈；梯度洗脱：0min l0 B。0—15 min内 lO 9／6一
i00 9，6 B；流速：1．0 mL／min；柱温：4O℃；检测波长：
283 vim；进样量 ：2O L。
1．3标准溶液和样品溶液的配制
称取柚皮苷对照品 0．0291 g，置 100 mL容量
瓶中，加入适量甲醇 ，振荡溶解 ，再加甲醇至刻度 ，摇
匀，备用。准确称取 3 g牙膏样品于具塞锥形瓶中，
加 10 mL甲醇，使样 品充 分分 散，超声 波提 取 6O
min，离心沉淀，取上清液于 i00 mL圆底烧瓶中，50
℃水浴减压回收甲醇，浓缩提取液至2～3 mL，转移
至1O mL容量瓶，并以甲醇稀释至刻度，用0．45 m
滤膜过滤，滤液为供试品溶液。
2 结果与讨论
2．1色谱条件的选择
取柚皮苷对照品溶液在 200～400 nm波长范
围内扫描。扫描结果表 明，在 283 nm处柚皮苷有
最大吸收 ，而且供试品中此处的杂峰干扰最小，本实
验选择 283 mil作为检测波长。
通过 以甲醇 、乙腈分别和水作不同比例等度洗
脱和不同时间的梯度洗脱试验，得出前述最佳洗脱
条件 ，在此条件下 ，理论塔板数按柚皮苷峰计算大于
57 900，分离度大于 37．O0，具 有 良好的分离效果。
采用 1．2的色谱条件 ，对照品的标准色谱图见图 1，
供试品的色谱图见图 2。
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盘 乏
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Minutes
图 1 对照品的标准色谱图
Fig．1 HPLC chromatograms of control solution
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6 8 1 0 1 2
Minutes
图 2 供试品的色谱图
Fig．2 HPLC chromatograms of sample solution
2．2线性关系
精密吸取 1．3配制的柚皮苷对照品储备液
0．5、1．0、2．0、3．0、4．0 mL分别置于 10 mL容量瓶
中，用甲醇稀释至刻度、摇匀，依前述色谱条件进行
测定。以浓度(Y)对峰高(X)进行线性回归，得回归
方程：y=0．1571 一0．1526，(r一0．9999)。结果表
明，柚皮苷浓度在 14．55～116．40／~g／mL与峰高呈
良好的线性关系(图 3)。
2．3精密度试验
取用牙膏样品制备的供试品溶液，依前述色谱
条件连续进样 6次(编号为 1、2、3、4、5、6)，测定柚
5期 覃青云等 ：HPLC法测定牙膏中柚皮苷的含量 709
二!
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图 3 对照品标准曲线
Fig．3 Stnadard curve of sample solution
皮苷含量。结果显示，柚皮 苷含量分别 为 78．39、
78．47、78．95、78．73、79．2l、78．05 1ag／g，平均值为
78．63 1ag／g，RSD为 0．53 。
2．4稳定性试验
取用牙膏样品制备的供试品溶液，依前述的色
谱条件在0、1．0、2．0、3．0、4．0、5．0、23．0、24．0 h分
别进样检测柚皮苷含量。结果显示，供试品溶液 24
h内测定结果稳定，柚皮苷含量分别为 78．39、
78．28、78．39、78．45、78．82、78．21、78．14、78．6O
!ag／g，平均值为 78．41 1ag／g，RSD为 0．28 。
2．5重现性试验
取同一支牙膏平行称取样品 6份(编号为 1、2、
3、4、5、6)，依照 1．3方法分别制备供试品溶液，进样
测定，计算得牙膏样品中柚皮苷的含量。结果显示，
柚皮苷含量分别为 78．45、79．O3、78．26、77．98、
78．68、78．4l!ag／g，平均值为 78．47 1ag／g，RSD为
0．46％，表明分析方法重现性 良好。
表 1 回收率试验结果 (n=3)
Table 1 Test results of recovery
冬筹 Re sult R ecov奏ery 平A罨ve rage率 R SD ’ ‘( g)( g) (g)rat(％)()⋯
2．6回收率试验
精密称取已知含量的牙膏 6份平行样，分别精
密加入不同量的柚皮苷对照品，搅匀 ，依照 1．3方法
制成供试品溶液 ，按上述方法进行测定 ，并计算加样
回收率，结果平均回收率为 97．56 9／6，表明本方法准
确可靠。结果见表 l。
2．7样品的测定
取牙膏样 品 6批，按 1．3方法制备供试品溶液
测定 ，每批测量 3次，计算牙膏中柚皮苷含量 ，结果
见表 2。
表 2 牙膏中柚皮苷的测定结果
Table 2 Determination of Naringin in toothpaste
编号 No． 1 2 3 4 5 6
柚皮苷含量 (~g／g)79．13 78．66 78．70 76．08 78．64 79．23
Content of narigin
RSD (％) 0．57 0．57 0．36 0．51 0．56 0．30
3 结论与讨论
(1)柚皮提取物多用于医药、保健食品中，李芳
(2007)、贺肇东(2008)、苏东林(2008)报道过柚皮苷
的检测，但都是测定药材、药品或保健品中柚皮苷的
含量，这些样品中柚皮苷的含量较高，而且是采用等
度洗脱的方法。韩彩轩(2003)报道采用反相高效液
相色谱法进行检测分析。对于牙膏样品，它是一种
口腔卫生用品，其主要作用是清洁牙齿保持口腔卫
生。把柚皮提取物添加到牙膏中，只是利用柚皮提
取物所具有的消炎止血的功效，在刷牙时起到辅助
功效的作用，因此，样品中添加的柚皮提取物相对较
少，而且牙膏是一种由十几种原料组成的混合物，其
中包含有表面活性剂和香精等多种有机成分，对分
析的干扰很大。为了达到理想的分离效果，本研究
首次将柚皮提取物添加到牙膏中，不仅利用柚皮提
取物所具有的消炎止血作用，使牙膏具有消炎止血
的辅助效果，而且对牙膏的提取和检测条件进行优
化，最终建立了以水一乙腈为流动相，梯度洗脱的分
析方法，并在实际工作中加以应用。
(2)根据国家功效性牙膏标准的要求，需要检测
牙膏中添加的功效成分含量，现有文献报道的柚皮
苷检测方法，都是采用高效液相色谱法中的等度洗
脱方法。而牙膏中的成分比较复杂，柚皮提取物的
添加量又相对较少，因此，采用等度洗脱法不能将牙
膏中的柚皮苷进行有效分离。作者经过研究，在化
学成分复杂、含柚皮提取物少的牙膏中，建立了梯度
洗脱法，较好地分离检测其中柚皮苷的含量。最佳
测定条件 ：依利特 Hypersil BDS Cl8(250 mm×4．6
mm，5 m)色谱柱；流速为 1．0 mL／min；柱温为 4O
℃；检测波长为 283 nin。结果表明，该方法的分离
3
o
6
7
9
勰 ” ∞
陀 ∞ n 跗 船
呱 M呈兰啪
5 5 O O 5 5
5 5 1 1 6 6
4 4 9 9 3 3
l l 2 2 4 4
4 4 1 8 4 9
2 8 1 5 6 7
9 8 9 9 8 8
7 7 7 7 7 7
710 广 西 植 物 29卷
效果好，质量浓度在 l4．55～116．40 t~g／mL范围内
与峰高呈良好的线性关系(r一0．9999)，平均回收率
为 97．56 9／6。将该方法应用于样品的测定，其稳定
性、重现性和准确性 良好，可作为牙膏的质量控制
方法 。
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