全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 21 期 2014 年 11 月

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HPLC 法测定桂枝芍药知母汤中 5 种有效成分
王 淳 1，宋志前 1，夏 磊 2，董运茁 1，杜智勇 1，宁张弛 3，张琳琳 1，刘振丽 1*
1. 中国中医科学院中医基础理论研究所，北京 100700
2. 天津药业研究院有限公司，天津 300457
3. 北京中医药大学中药学院，北京 100029
摘 要：目的 建立 HPLC 法同时测定桂枝芍药知母汤中没食子酸、芒果苷、芍药苷、苯甲酸和肉桂酸的量。方法 采用
Zorbax Extend-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相为乙腈-水梯度洗脱，体积流量为 1.0 mL/min，检测波长为 230
nm，柱温为 25 ℃。结果 没食子酸、芒果苷、芍药苷、苯甲酸和肉桂酸进样量分别在 0.052～0.52（r＝0.999 8）、0.078～
0.78（r＝0.999 8）、0.336～3.36（r＝0.999 9）、0.029 6～0.296（r＝0.999 8）、0.020 6～0.206（r＝0.999 9）μg 线性关系良好；
平均回收率（RSD）分别为 99.73%（1.63%）、99.33%（1.02%）、100.2%（1.79%）、98.96%（1.02%）和 99.64%（1.62%）。
结论 本方法简便、可靠、重复性好，为桂枝芍药知母汤物质基础研究提供了依据。
关键词：高效液相色谱法；桂枝芍药知母汤；定量测定；没食子酸；芒果苷；芍药苷；苯甲酸；肉桂酸
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)21 - 3105 - 04
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.21.013
Determination of five components in Guizhi Shaoyao Zhimu Decotion by HPLC
mothod
WANG Chun1, SONG Zhi-qian1, XIA Lei2, DONG Yun-zhuo1, DU Zhi-yong1, NING Zhang-chi3, ZHANG
Lin-lin1, LIU Zhen-li1
1. Institute of Basic Theory, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China
2. Tianjin Pharmaceuticals Research Organization Co., Ltd., Tianjin 300457, China
3. School of Chinese Pharmacy, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China
Abstract: Objective To establish an HPLC method for the determination of galic acid, mangiferin, paeoniflorin, benzoic acid, and
cinnamic acid in Guizhi Shaoyao Zhimu Decotion (GSZD). Methods The separation was performed on a Zorbax Extend-C18 (150
mm × 4.6 mm, 5 μm) column with the gradient elution of acetonitrile-water; The volumn flow was 1.0 mL/min; The detection
wavelength was set at 230 nm. The colunm temperature was maintained at 25 ℃. Results Galic acid, mangiferin, paeoniflorin,
benzoic acid, and cinnamic acid had good linearity in the ranges of 0.052—0.52 (r = 0.999 8), 0.078—0.78 (r = 0.999 8), 0.336—3.36
(r = 0.999 9), 0.029 6—0.296 (r = 0.999 8), and 0.020 6—0.206 (r = 0.999 9) μg, respectively. The average recoveries of galic acid,
mangiferin, paeoniflorin, benzoic acid, and cinnamic acid were 99.73% (1.63%), 99.33% (1.02%), 100.2% (1.79%), 98.9% (1.02%),
and 99.64% (1.62%), respectively. Conclusion This method is simple, reliable, and accurate, and can provide the reference for study
on GSZD material basis.
Key words: HPLC; Guizhi Shaoyao Zhimu Decotion; quantitative determination; galic acid; mangiferin; paeoniflorin; benzoic acid;
cinnamic acid

桂枝芍药知母汤始见于《金匮要略》，由桂枝、
白芍和知母等 9 味中药组成，具有祛风除湿、温经
散寒、滋阴清热功效，是治疗类风湿性关节炎的经
典方剂[1]。药理学研究表明，桂枝芍药知母汤可明
显减轻类风湿性关节炎大鼠滑膜增殖的病理改变[2]，
对 II型胶原蛋白诱导大鼠类风湿性关节炎具有一定
的治疗作用[3]。其主要成分如芍药苷能抑制佐剂性
关节炎大鼠滑膜细胞的异常增殖[4]，降低 II 型胶原

收稿日期：2014-04-30
基金项目：中央级科研院所自主选题（YZ-1323）
作者简介：王 淳（1981—），女，博士，中药化学专业。E-mail: chuner-2006@hotmail.com
*通信作者 刘振丽，研究员，博士生导师，中药质量标准研究。Tel: (010)64014411-2503 E-mail: zhenli_liu@sina.com
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诱导的关节炎大鼠模型的细胞因子水平[5]，芒果苷
具有拮抗脂多糖（LPS）诱导的慢性炎症作用[6]，
没食子酸对实验性关节肿胀有显著的抗炎作用[7]，
并能诱导类风湿性关节炎患者成纤维样滑膜细胞凋
亡[8]。
目前未见对桂枝芍药知母汤化学成分进行定量
分析的报道。肉桂酸为君药桂枝的主要有效成分[9]，
在含桂枝的复方中多选取肉桂酸作为定量指标[10-12]。
芍药苷为白芍的主要有效成分[9]，其酯键水解后能
产生苯甲酸[13]；没食子酸也是白芍的活性成分之
一[14]。芒果苷为知母的主要有效成分[9]。基于桂枝
芍药知母汤良好的临床疗效，为研究其发挥作用的
物质基础，本实验采用 HPLC 法对用于药效实验研
究的提取物中桂皮酸、芍药苷、苯甲酸、没食子酸
和芒果苷 5 种成分进行定量测定。
1 仪器与材料
Agilent1100 型高效液相色谱仪，包括 G1322A
脱气机，G1311A 四元泵，G1313A 自动进样器，
G1315B DAD 检测器，G1316A 恒温箱，HP 化学工
作站；TCQ—250 型超声波清洗器，北京医疗设备
二厂；Sartorius CP225D 电子天平，德国赛多利斯
公司。
对照品没食子酸（批号 110831-200302，质量
分数≥98%）、芒果苷（批号 111607-200402，质量
分数≥98%）、芍药苷（批号 110736-200424，质量
分数 94.9%）、苯甲酸（批号 100419-201302，质量
分数≥98%）和肉桂酸（批号 110786-200503，质量
分数≥98%），均购于中国食品药品检定研究院。药
材饮片均购自北京仟草中药饮片有限公司，生姜购
自北京天泽祥菜市场，各药材均经北京中医药大学
刘春生教授鉴定，桂枝（批号 130706008，产地广
西）为樟科植物肉桂 Cinnamomum cassia Presl 的干
燥嫩枝，白芍（批号 121101009，产地安徽）为毛
茛科植物芍药 Paeonia lactiflora Pall. 的干燥根，知
母（批号 130918003，产地河北）为百合科植物知
母 Anemarrhena asphodeloides Bge. 的干燥根茎，甘
草（批号 130101012，产地新疆）为豆科植物甘草
Glycyrrhiza uralensis Fisch. 的干燥根和根茎，蜜麻
黄（批号 130531002，产地内蒙古）为麻黄科植物
草麻黄 Ephedra sinica Stapf 的干燥草质茎，炒白术
（批号 131026001，产地浙江）为菊科植物白术
Atractylodes macrocephala Koidz. 的干燥根茎，防风
（批号 130704003，产地内蒙古）为伞形科植物防风
Saposhnikovia divaricata (Turcz.) Schischk. 的干燥
根，黑顺片（批号 120103，产地四川）为毛茛科植
物乌头 Aconitum carmichaelii Debx. 的子根的加工
品，生姜（批号 131101，产地山东）为姜科植物姜
Zingiber officinale Rosc. 的新鲜根茎。按照《中国药
典》2010 年版方法检测，药材均为符合《中国药典》
2010 年版的品种规定。乙腈为色谱纯，美国 Fisher
公司，水为纯净水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 提取物制备
按处方比例，称取桂枝、白芍、甘草、麻黄、
生姜、白术、知母、防风、黑顺片适量，混合，加
入 8 倍量水提取 3 次，每次 1 h，合并提取液，滤过，
滤液于 60 ℃减压浓缩，放至室温，边搅拌边缓慢
加入 95%乙醇使含醇量为 60%，冷藏静置 12 h，取
上清液，减压回收乙醇，并浓缩成稠膏，于 60 ℃
真空干燥后，称定质量，粉碎成细粉，得提取物。
平行 3 次，提取物得率平均值为 20.60%。
2.2 色谱条件
Zorbax Extend-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）
色谱柱，流动相为乙腈-水，梯度洗脱，洗脱程序为
0～15 min，5%乙腈；15～20 min，15%乙腈；20～
28 min，20%乙腈；28～48 min，38%乙腈。体积流
量 1.0 mL/min，检测波长 230 nm，柱温 25 ℃。HPLC
图谱见图 1。
2.3 混合对照品溶液的制备
分别取没食子酸、芒果苷、芍药苷、苯甲酸和





1-没食子酸 2-芒果苷 3-芍药苷 4-苯甲酸 5-肉桂酸
1-galic acid 2-mangiferin 3-paeoniflorin 4-benzoic acid 5-cinnamic acid

图 1 混合对照品 (A) 和桂枝芍药知母汤 (B) 的 HPLC 图
Fig. 1 HPLC of mixed reference substances (A)
and GSZD (B)
1
3
4 2
5
1
2
3
4
5
A
B
0 10 20 30 40 50
t / min
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肉桂酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成各
含 0.260、0.390、0.840、0.148、0.103 mg/mL 的溶
液，作为对照品储备液。分别精密量取上述 5 个对
照品储备液适量，混合，加甲醇制成质量浓度分别
为 26.0、39.0、168.0、14.8、10.3 μg/mL 的混合对
照品溶液。
2.4 供试品溶液的制备
取提取物约 0.20 g，精密称定，精密加入 70%
的甲醇 25 mL，称定质量，超声提取（功率 254 W，
频率 40 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用 70%
甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，
即得。
2.5 线性范围考察
分别精密吸取“2.3”项下混合对照品溶液 2、4、
8、12、16、20 μL 进样测定。以峰面积（Y）为纵
坐标，进样量（X，μg）为横坐标，绘制标准曲线，
得没食子酸、芒果苷、芍药苷、苯甲酸和肉桂酸的
回归方程分别为 Y＝1 697.4 X＋12.46（r＝0.999 8），
Y＝1 300.2 X－2.334 2（r＝0.999 8），Y＝1 276.5 X－
11.395（r＝0.999 9），Y＝4 706.5 X＋13.386（r＝
0.999 8），Y＝2 048.9 X＋2.257 5（r＝0.999 9）；线
性范围分别为 0.052～0.52、0.078～0.78、0.336～
3.36、0.029 6～0.296、0.020 6～0.206 μg。
2.6 精密度考察
精密吸取同一供试品溶液 10 μL，连续进样 6
次，测得没食子酸、芒果苷、芍药苷、苯甲酸和肉
桂酸峰面积积分值的 RSD 分别为 0.59%、0.58%、
0.59%、0.71%和 0.84%，表明精密度良好。
2.7 重复性试验
取同一供试品粉末约 0.20 g，6 份，精密称定，
按“2.4”项下方法平行制备成供试品溶液，分别进
样 10 μL 进行测定，计算质量分数。没食子酸、芒
果苷、芍药苷、苯甲酸和肉桂酸的平均质量分数分
别为 3.355、4.203、18.15、1.201、0.674 4 mg/g；
RSD 分别为 1.13%、2.07%、1.34%、2.28%、1.78%，
符合要求。
2.8 稳定性试验
取同一供试品粉末约 0.20 g，精密称定，按“2.4”
项下方法制备成供试品溶液，在制备后 0、2、4、6、
8、10、12、24 h 进样，测得没食子酸、芒果苷、芍
药苷、苯甲酸和肉桂酸峰面积积分值的 RSD 分别为
2.46%、2.65%、2.10%、2.67%和 2.00%，符合要求，
表明供试品溶液在 24 h 内稳定。
2.9 回收率试验
取已知质量分数的提取物约 0.10 g，6 份，精密
称定，分别精密加入没食子酸、芒果苷、芍药苷、
苯甲酸和肉桂酸对照品适量，按“2.4”项下方法制
备成供试品溶液，在上述色谱条件下进行测定，计
算回收率，结果平均回收率分别为 99.73%、99.33%、
100.2%、98.96%、99.64%，RSD 分别为 1.63%、
1.02%、1.79%、1.02%、1.62%。
2.10 样品测定
取桂枝芍药知母汤提取物 3 批，按“2.4”项下
方法制备，测定 5 种成分的量，结果见表 1。
表 1 桂枝芍药知母汤中 5 种成分质量分数
Table 1 Contents of five components in GSZD
质量分数 / (mg·g−1) 样品
没食子酸 芒果苷 芍药苷 苯甲酸 肉桂酸
提取物 1 3.355 4.203 18.15 1.201 0.674 4
提取物 2 3.416 4.210 18.42 1.176 0.706 2
提取物 3 3.316 4.328 18.68 1.062 0.654 4

3 讨论
本实验对桂枝芍药知母汤提取物中 5 种有效成
分的量进行了分析。供试品溶液的制备中考察了提
取方式、提取溶剂种类、溶剂加入量和提取时间。
结果显示，超声提取与回流提取无显著差异；70%
甲醇提取优于甲醇和无水乙醇；70%乙醇加入量 10、
25、50 mL 比较，加入量为 25、50 mL 时各成分的
量没有显著差异，但均优于 10 mL；提取时间 10、
30、60 min 比较，超声提取 30 min 时各成分的量最
高。最终确定取供试品 0.2 g，70%乙醇 25 mL 超声
提取 30 min 为最佳供试品溶液制备方法。由于桂枝
芍药知母汤组成药味较多，化学组成复杂，提取物
色谱分离难度较大，因此采用梯度洗脱。考察了不
同流动相甲醇-水和乙腈-水以及柱温的影响，最后
确定色谱条件。在该色谱条件下，芍药苷、没食子
酸、苯甲酸、肉桂酸、芒果苷 5 种成分分离效果较
好。通过全波长扫描对 5 种成分的最佳波长进行研
究，芍药苷为 230 nm、没食子酸为 270 nm、苯甲
酸为 228 nm、肉桂酸为 285 nm、芒果苷为 258 nm，
最终选取 230 nm 为检测波长。
建立的 HPLC 方法能同时测定芍药苷、没食子
酸、苯甲酸、肉桂酸、芒果苷 5 种成分的量，可有
效控制提取物的质量，为桂枝芍药知母汤物质基础
研究提供了科学依据。
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参考文献
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